6. Cấu trúc luận văn
2.2.2. Phương pháp tách và tinh chế chất
Hỗn hợp các chất sau phản ứng được tách và tinh chế bằng phương pháp sắc
kí cột kết hợp với sắc kí lớp mỏng với dung môi chạy cột đầu tiên là CH2Cl2 để loại
bỏ tất cả 4-nitroanilin tạo thành trong quá trình phản ứng. Sau đó sử dụng hệ dung môi rửa giải heptan/ EtOAc tỉ lệ 6/4 để thu được sản phẩm tinh khiết. Sắc kí cột sử dụng sắc kí cột thường, pha tĩnh là silicagel. Kiểm tra độ tinh khiết của các chất
Chất phản ứng: 4-nitroacetophenone; 4-methoxybenzylamine; 4-nitrophenyl azide; Xúc tác: acid acetic
Dung môi: toluene 4 A0 MS
Khuấy, gia nhiệt ở 1000 C Kiểm tra SKLM
Kết thúc phản ứng,
Sản phẩm tinh khiết
Xác định cấu trúc Chạy sắc kí cột
cũng như theo dõi quá trình tách chất trên cột bằng sắc kí lớp mỏng với hệ dung môi thích hợp.
a. Chuẩn bị cột sắc kí
- Cho dung môi CH2Cl2 vào ca nhựa.
- Cân lượng silicagel (Merck, 0,04 – 0,063 mm) cần thiết cho vào ca nhựa trên và khuấy đều để đuổi hết bọt khí.
- Silicagel được cho vào cột ở dạng sệt. Rót hỗn hợp sệt vào cột qua một phễu lọc và mở nhẹ khoá để dung môi chảy xuống bình hứng (dung môi này tiếp tục được dùng để rót trở lại đầu cột).
- Tiếp tục rót hỗn hợp vào cột đến hết số lượng, vừa rót vừa gõ nhẹ thành cột bằng thanh cao su để silicagel nén đều trong cột.
- Ổn định cột bằng cách đổ dung môi liên tục vào cột khoảng 30 – 60 phút đến khi vạch silicagel không xuống nữa [1].
b. Nạp mẫu vào cột
Mẫu được nạp vào cột theo phương pháp ướt.
- Hòa tan hoàn tan mẫu trong một lượng tối thiểu dung môi chạy cột ban đầu là CH2Cl2.
- Mẫu được cho trực tiếp vào cột bằng ống hút mẫu (pipet). Cho mẫu chảy vào từ từ theo thành cột. Với phương pháp nạp mẫu này, chúng ta cho dung môi trong cột chảy xuống sát bề mặt silicagel trong cột rồi khoá cột. Sau đó, mở khoá để mẫu chảy xuống đến sát bề mặt silicagel. Cho từng lượng nhỏ dung môi chạy cột vào để mẫu chảy qua bề mặt silicagel trong cột và rửa sạch thành cột rồi tiến hành chạy cột (để lớp mẫu chất chảy xuống được đồng đều) [1].
c. Phương pháp rửa giải
Rửa giải liên tục bằng dung môi chạy cột đầu tiên là CH2Cl2. Sau khi loại bỏ
hết 4-nitroanilin thì thay hệ dung môi n-heptan/EtOAc tỉ lệ 6/4 để thu được sản phẩm tinh khiết. Thử sản phẩm tinh khiết bằng sắc kí lớp mỏng.