Hợp chất tritecpenoit khung lanostane

CHƢƠNG 2 PHẦN THỰC NGHIỆM

3.2.3. Hợp chất tritecpenoit khung lanostane

Axit Kadsuric 24 (Z)-3,4-seco-lanosta-4(28),9(11),24-triene-3,26- dioic axit (KhH.1)

Hợp chất này phân lập được từ dịch chiết hexan trong thân cây Naleo. Từ 30,5g cặn thơ n-hexan đem tách trên cột silicagel. Rửa giải cột bằng hệ dung mơi n-hexan – etyl axetat tăng dần theo độ phân cực (0-100%), dịch rửa giải thốt ra từ cột thu được đem kiểm tra các phân đoạn bằng sắc ký lớp mỏng và hiện màu bằng thuốc thử vanilin - H2SO4 5% sau đĩ các phân đoạn giống nhau được dồn lại rồi đem cất loại dung mơi.

Sử dụng hệ dung mơi n-hexan – etyl axetat theo tỷ lệ (15:1) thu được khối chất vơ định hình. Đem kết tinh lại trong dung mơi chloroform thu được chất kết tinh dạng hình kim nhỏ, cĩ khối lượng 0,820g, nĩng chảy ở 156- 158oC, RfB=75.

Phổ FI-IR (Hình 3.1) cho biết cĩ hấp thụ của nhĩm OH ở vùng 3461cm-1, nhĩm CH ở 2937cm-1, ở vùng 1632, 1461cm-1

đặc trưng cho liên kết C=C. Hấp thụ ở vùng 1700 cm-1

đặc trưng cho liên kết C=O. Trong các phổ 1

H-NMR (Hình 3.3) và 13C-NMR kết hợp với phổ DEPT (Hình 3.4 và Hình 3.5) đã cho biết trong phân tử của chất KhH.1 cĩ 30 nguyên tử cacbon trong đĩ cĩ 06 nhĩm CH3, 10 nhĩm metylen (CH2), 6 nhĩm metilen (CH) và 8 nguyên tử cacbon bậc 4. Phổ khối lượng LC-ESI-MS cho [M+H]+

471,0 amu (Hình 3.2). Các dữ liệu phổ 13C-NMR và ESI-MS [20] cho phép xác định cơng thức phân tử chất này là C30H46O4. Đây là một hợp chất tritecpen thuộc khung lanostan gồm cĩ 2 gốc axit cùng với một liên kết đơi ngoại vịng, một liên kết đơi ở mạch nhánh và một liên kết đơi trong vịng.

Phổ 1

H-NMR và 13C-NMR cho thấy ở vùng trường thấp cĩ tín hiệu cộng hưởng của hai proton olephinic (H 4,88ppm và 4,69ppm, H-29a và H-29b) với cacbon tương ứng C 113,7ppm. Khi phân tích phổ HSQC (Hình 3.6) là

Số hĩa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn

metylen olephin, đây là tương tác rất đặc trưng của nối đơi ngoại vịng. Đặc biệt trên phổ 13

C-NMR quan sát thấy tín hiệu đặc trưng của 2 nhĩm C=O axit ở C 181,1ppm và ở C 173,7ppm ứng với C-3 và C-26, điều này cũng phù

hợp với đặc trưng cho hấp thụ của liên kết C=O trong phổ IR. Ngồi ra ở vùng trường thấp cịn cĩ tín hiệu của proton olephin ở H 5,34 (1H, dd, J=5,5Hz, H- 11) và H 6,09 (1H, dd, J=7,5Hz, H-24) với cacbon tương ứng C-11 118,6ppm và C-24 147,30ppm. Phân tích phổ HSQC và HMBC (Hình 3.7)của KhH.1

cho biết cacbon ở C 181,1ppm chỉ cĩ tương tác với proton của H-2 và H-1, như vậy cĩ thể khẳng định cĩ sự mở vịng tại C-3. Kết quả phân tích dựa trên cơ sở số liệu phổ NMR và các dữ liệu phổ NMR tương tác xa của KhH.1

được đưa ra trong bảng 3.2.

Dựa trên những số liệu phổ thu thập về các hợp chất tritecpen khung lanostan và các số liệu phổ NOESY để xác định cấu trúc khơng gian của cacbon ở vị trí C-24 thu thập được nhiều tác giả đã cho biết cacbon ở vị trí C- 27 nếu cĩ độ chuyển dịch hĩa học nằm trong khoảng C 18ppm trở lên thì

cacbon ở vị trí C-24 cĩ cấu hình Z, ngược lại nếu độ chuyển dịch hĩa học của cacbon ở vị trí C-27 nằm ở vùng C 13ppm trở xuống thì cacbon ở vị trí C- 24 cĩ cấu hình E.

Kết hợp các dữ liệu phổ với tài liệu thu thập được [20] đã cho phép khẳng định cấu trúc của chất KhH.1 hồn tồn phù hợp với cấu trúc hố học của 24 (Z)-3,4-seco-lanosta-4(28),9(11),24-triene-3,26-dioic axit hay axit kadsuric.

Số hĩa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn

Hình 3.4: Phổ 13

Số hĩa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn

Hình 3.5: Phổ 13

Số hĩa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn

Axit Kadsuric

Bảng 3.2. Số liệu phổ NMR và các tương tác xa của KhH.1 500MHz (1

H- NMR), 125MHz (13C-NMR); Nội chuẩn TMS, dung mơi CDCl3

TT C (δ ppm) H (δ ppm) H → C (HMBC) CHn (DEPT) 1 32,0 2,04 và 1,80 (m) 2; 3; 10 CH2 2 26,7 2,43 và 1,58 (m) 3 CH2 3 181,1 - C 4 147,5 - C 5 49,5 2,05 (m) 4; 6; 10 CH 6 27,8 7 CH2 7 28,9 6 CH2 8 42,5 2,14 (m) 7; 9; 14 CH 9 142,4 - C 10 42,5 - C 11 118,6 5,34 (1H, dd, J=5, 5Hz) 8; 13 CH 12 37,6 CH2 13 43,9 - C 14 47,2 - C 15 33,7 1,38 (m) 16 CH2 16 27,8 1,90 và 1,78 (m) 15 CH2 17 50,7 1,64 (m) 13; 16; 18; 22 CH 18 14,6 0,66 (s) 12; 13; 14; 17 CH3 19 26,8 1,07 (s) 1; 5; 8; 9 CH3 20 36,0 1,43 (m) 19 CH 21 18,2 0,95 (d) 17; 22; 23 CH3 22 35,7 1,17 và 1,53 (m) 20; 23 CH2 23 26,7 CH2

Số hĩa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 24 147,3 6,09 (1H, dd, J=7,5Hz) 22, 26; 27 CH 25 125,8 - - C 26 173,7 - - C 27 20,4 1,90 (s) 24; 25; 26 CH3 28 18,1 0,75 (s) 13; 14; 15; 17 CH3 29 113,7 4,88 và 4,69 (2H, dd) 5; 30 CH2 30 23,2 1,76 (s) 4; 29 CH3 3.2.4. Các hợp chất lignan

3.2.4.1. Dihydroguaiaretic axit (4,4’-dihydroxy-3,3’-dimethoxy lignan) (KhE.3) (KhE.3)

Chất này thu được từ hệ dung mơi rửa giải cột clorofom-metanol theo tỷ lệ 9:1. Kết tinh trong axeton cho những tinh thể hình kim.

Phổ FI-IR (Hình 3.8) cho biết cĩ hấp thụ của nhĩm OH ở vùng 3500cm-1, nhĩm CH ở 2972cm-1, hấp thụ ở vùng 1518cm-1, và 1437cm-1 đặc trưng cho liên kết C=C. Hấp thụ ở vùng 1609 cm-1

đặc trưng cho liên kết C=O.

Trong các phổ 1

H-NMR (Hình 3.10) và 13C-NMR kết hợp với phổ DEPT (Hình 3.11 và Hình 3.12) đã cho biết trong phân tử của chất KhE.3 cĩ 20 nguyên tử cacbon trong đĩ cĩ 04 nhĩm CH3, 02 nhĩm metylen (CH2), 8 nhĩm metilen (CH) và 6 nguyên tử cacbon bậc 4. Phổ khối lượng LC-ESI-MS cho [M-H]+ 329,0 amu. Các dữ liệu phổ 13C-NMR và LC-ESI-MS [10] cho phép xác định cơng thức phân tử chất này là C20H26O4.

Phổ 1

H-NMR và 13C-NMR cho thấy ở vùng trường thấp cĩ tín hiệu cộng hưởng của hai proton olephinic H 6,82 (1H, d, J=8,0Hz, H-5) và H 6,65 (1H, dd, J=1,5 và 8,0Hz, H-6) với cacbon tương ứng C 113,97ppm (C-5 và 5’) và

C 121,68ppm (C-6 và 6’). Ngồi ra trên phổ 1

H-NMR cịn quan sát thấy tín hiệu của proton dạng singlet thuộc nhĩm hydoxy ở độ chuyển dịch H 5,36ppm (4-OH). Tín hiệu của proton thuộc nhĩm methoxy dạng singlet ở H 3,83ppm,

Số hĩa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn

và H-10). Đặc biệt trên phổ C-NMR quan sát thấy hầu hết cường độ tín hiệu của các vạch cacbon đều rất mạnh, thường là những cacbon giống nhau sẽ cho cường độ tín hiệu vạch tăng gấp 2 lần. Kết quả phân tích phổ tương tác xa HSQC và HMBC (Hình 3.12 và Hình 3.13) đã chỉ ra sự tương tác giữa proton của H-2 và H-6 với C-7 và H-2’ và H-6’ với C-7’. Các dữ liệu này cho biết cĩ 2 vịng thơm tương đương nhưng khơng liên kết trực tiếp với nhau. Kết hợp các dữ kiện phổ cùng với tài liệu tham khảo thu thập được cho phép khẳng định cấu trúc của KhE.3 hồn tồn phù hợp với cấu trúc của 4,4’-dihydroxy-

3,3’-dimethoxy lignan hay axit dihydroguaiaretic [10].

Kết quả phân tích dựa trên cơ sở số liệu phổ NMR và các dữ liệu phổ NMR tương tác xa của KhE.3 được đưa ra trong bảng 3.3.

Bảng 3.3. Số liệu phổ NMR và các tương tác xa của KhE.3

TT C (δ ppm) CDCl3 H (δ ppm) CDCl3 H → C (HMBC) CHn (DEPT) 1 133,75 C 2 111,46 6,60 (1H, d, J=1,5Hz) 1, 3, 4, 6 CH 3 146,30 - C 4 143,54 - C 5 113,97 6,82 (1H, d, J=8,0Hz, H-5) 1, 3, 4, 6 CH

Số hĩa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 6 121,68 6,65 (1H, dd, J=1,5 và 8,0Hz) 1, 2, 4, 5, 7, CH 7 38,85 2,72 (1H, dd, J=5,0 và 8,5Hz) 2,27 (1H, dd, J=9,0 và 14,5Hz) 1, 2, 6, 8, 9 CH2 8 39,14 1,73 (1H, m) 1, 7, 9, CH 9 16,17 0,83 (3H, d, J=7,0Hz) CH3 1’ 133,75 - C 2’ 111,46 6,60 (1H, d, J=1,5Hz) 8; 13 CH 3’ 146,30 C 4’ 143,54 - C 5’ 113,97 6,82 (1H, d, J=8,0Hz) CH 6’ 121,68 6,65 (1H, dd, J=1,5 và 8,0Hz) 16 CH 7’ 38,85 2,72 (1H, dd, J=5,0 và 8,5Hz) 2,27 (1H, dd, J=9,0 và 14,5Hz) 15 CH2 8’ 39,14 1,73 (1H, m) 13; 16; 18; 22 CH 9’ 16,17 0,66 (s) 12; 13; 14; 17 CH3 3,3’- OCH3 55,81 3,83 (3H, s) 1; 5; 8; 9 OCH3 4,4’-OH - 5,53 (s) 3; 4; 5

Số hĩa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn

Thu nhận các dịch chiết

Cặn dịch chiết n-hexan của thân (KhH)