7. Bố cục của khóa luận gồ m3 phần
2.2.5. Định tính các nhóm hợp chất chính trong dịch chiết thân và rễ
rễ cây nở ngày đất
Để định tính các nhóm hợp chất chính có trong dịch chiết ta dựa vào các phản ứng đặc trƣng (phản ứng tạo kết tủa, phản ứng tạo màu...).
Cách thử như sau:
Cân 10g bột cây nở ngày đất. Tiến hành chiết Soxhlet mẫu dƣợc liệu ở điều kiện tối ƣu. Lấy dịch chiết và thực hiện các phản ứng sau:
a. Nhóm Saponin
Phản ứng tạo bọt: Lấy hai ống nghiệm cỡ bằng nhau, cho vào ống thứ nhất 5 ml dung dịch HCl 0,1N và ống thứ hai 5 ml NaOH 0,1N. Cho thêm vào mỗi ống 2 – 3 giọt dịch chiết rồi bịt ống nghiệm, lắc mạnh cả hai ống nghiệm trong 15 giây. Để yên, thấy ống kiềm có cột bọt bền và cao gấp đôi ống kia.
Nếu có hiện tƣợng nhƣ trên thì kết luận trong dịch chiết có nhóm steroid saponin.
b. Nhóm Alkaloid
Cô 10 ml dịch chiết tới bay hết dung môi. Thêm 10 ml dung dịch CH3COOH 5%, khuấy kĩ rồi lọc lấy dịch chiết axit để làm các phản ứng định tính. Cho dịch chiết acid vào 3 ống nghiệm, mỗi ống 1 ml rồi thêm vào từng ống một loại thuốc thử và kết quả nhƣ sau:
Ống thứ nhất: 2 – 3 giọt thuốc thử Mayer: có kết tủa trắng.
Ống thứ hai: 2 – 3 giọt thuốc thử Dragenfroff: có kết tủa cam. Ống thứ ba: 2 – 3 giọt thuốc thử Bourchardt: có kết tủa nâu.
Nếu có các hiện tƣợng nhƣ trên thì kết luận trong dịch chiết có nhóm Alkaloid.
c. Nhóm Coumarin
Phản ứng đóng mở vòng lacton: Cho vào hai ống nghiệm mỗi ống 1 ml dịch chiết. Ống 1 thêm 0,5 ml dung dịch NaOH 10%, ống 2 để nguyên. Sau đó đun cả hai ống nghiệm trên bếp cách thủy trong vài phút. Ống thứ nhất có màu vàng. Sau đó cho thêm vào mỗi ống 2 ml nƣớc cất, thấy ống thứ nhất trong hơn ống thứ hai. Nhƣng sau khi acid hóa thì cả hai ống đều đục nhƣ nhau.
Nếu có hiện tƣợng nhƣ trên thì kết luận trong dịch chiết có nhóm Coumarin.
d. Nhóm Flavonoid
Phản ứng Cyanidin: Cho 2 ml dịch chiết vào một ống nghiệm, thêm vào một ít bột Mg kim loại, rồi thêm vài giọt HCl đặc. Đun nóng trên bếp cách thủy, sau vài phút thấy xuất hiện màu tím đỏ.
Phản ứng với kiềm: Nhỏ vài giọt dịch chiết lên một mảnh giấy lọc, hơ khô rồi đặt mảnh giấy lên miệng lọ amoniac đặc thấy màu vàng hiện rõ.
Nếu có các hiện tƣợng trên thì kết luận trong dịch chiết có nhóm Flavonoid
e. Đường khử
Lấy khoảng 3ml dịch chiết cho vào ống nghiệm, đuổi dung môi trên bếp cách thủy thu đƣợc cặn. Hòa cặn với 3 ml nƣớc cất đun nóng, lọc. Cho thêm vào nƣớc lọc 4 – 5 giọt thuốc thử Fehling A và 4 – 5 giọt thuốc thử Fehling B, đun cách thủy. Nếu có kết tủa đỏ gạch thì có nhóm đƣờng khử.
f. Poliphenol
Phản ứng với dung dịch FeCl3 5%: Cho 2ml dịch chiết vào một ống nghiệm, thêm 2 – 3 giọt FeCl3 5%, thấy dung dịch có màu xanh thẫm.
Nếu có hiện tƣợng trên thì kết luận trong dịch chiết có nhóm poliphenol.