6. Bố cục luận văn
3.5.2. Kết quả chạy sắc ký cột phân lập cao dichloromethane
Sử dụng cột sắc ký (USA) có đường kính ngoài 3,5cm và chiều cao làm việc cột là 50cm, lượng silicagel cho vào cột là 135gam, dung môi ổn định là n–hexane.
Kết quả giải ly bằng dung môi A (chloroform 100%)
Khi giải ly bằng dung dung môi A (chloroform 100%) thu được 112 bình ký hiệu từ 1 đến 112. Kết quả sắc ký bản mỏng dung dịch giải ly trong các bình được thể hiện trên các hình 3.9, 3.10, 3.11.
Hình 3.9. Sắc ký bản mỏng của bình 1 đến 18
Hình 3.10. Sắc ký bản mỏng của bình 19 đến 44
Dựa theo kết quả thu được từ sắc ký bản mỏng có thể gộp lại thành 3 phân đoạn: F1 (gộp bình 1 đến bình 18), F2 (gộp bình 19 đến bình 44), F3 (gộp bình 45 đến bình 112).
Kết quả giải ly bằng hệ dung môi B (chloroform : ethyl aceat = 50% : 50%) Bình 112 trên bản mỏng có vết rất mờ nên ta tăng độ phân cực bằng hệ dung môi chloroform : ethyl aceat (50% : 50%). Chạy hệ dung môi này thu được 44 bình. Kết quả sắc ký bản mỏng dung dịch giải ly trong các bình được thể hiện trên hình 3.12.
Hình 3.12. Sắc ký bản mỏng của bình 113 đến bình 157
Kết quả giải ly bằng hệ dung môi C (ethyl aceat 100%)
Kết quả sắc ký bản mỏng dung dịch giải ly trong các bình được thể hiện trên hình 3.13.
Hình 3.14. Sơ đồ phân lập phân đoạn cao dichloromethane Tinh chế F3A.1-4 1,561g E= 100% Cao tổng ethanol 140,00g Cao dichloromethane 22,60g
Phân tán vào nước (200 ml)
Chiết lỏng–lỏng với dichloromethane (4 lần x 500 ml) Sắc ký cột (45 x 3,5 cm/140g silacagel) C=100% C:E=50%:50% F1.1-18 2,078 g F2.19-44 4,354 g F3.45-112 1,870 g F4.113-157 1,572 g F5.158-203 1,332 g SKC (45x1,5 cm 25g silacagel) H:E:Me =5:5:2 SKC (75x2,0cm 60g silacagel) H:E=2:8 F1A.1-2 1,480g F1B.3-7 0,124g F1C.8-14 0,076g SKC (75x2,0cm 60g silacagel) H:E=2:8 F3C.23-35 0,056g F3B.5-22 0,317g F2A.1-8 0,908g F2B.9-21 2,270g Tinh thể F2B1 1,007g F2B2 0,702g F2B3 0,546g
Hình 3.15. Kết quả sắc ký bản mỏng phân đoạn F1
Hình 3.16. Kết quả sắc ký bản mỏng phân đoạn F2
Hình 3.17. Kết quả sắc ký bản mỏng phân đoạn F3
3.5.3. Kết quả đo HPLC và GCMS của mẫu F2B1
Kết quả đo HPLC và GCMS của mẫu F2B1 được thể hiện trên hình 3.19 và 3.20.
Hình 3.19. HPLC của mẫu F2B1 ở các hệ dung môi chạy cột khác nhau, thể tích
tiêm mẫu 20µL, column C18
Thành phần hóa học của của mẫu F2B1 đã được định lượng trình bày trong bảng 3.12. STT Thời gian lưu (phút) Diện tích pick (%) Tên gọi – CTPT
Công thức cấu tạo
1 61,28 21,93 Campesterol (C28H48O) HO 2 62,12 76,14 β –Sitosterol (C29H50O) HO
Bảng 3.12. Thành phần hóa học mẫu F2B1 trong phân đoạn F2
Nhận xét
Từ kết quả bảng 3.10 cho thấy trong phân đoạn kết tinh này đã định danh được thành phần của mẫu tinh thể F2B1 gồm 76,14% β–Sitosterol và 21,93% Campesterol.
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
Qua quá trình nghiên cứu đề tài “Nghiên cứu chiết tách và xác định thành phần hóa học cao chiết ethanol của tua Sen (Nelumbo nucifera Gaertn.)”, đã thu được các kết quả như sau:
1. Bằng phương pháp trọng lượng và phương pháp hấp thụ nguyên tử AAS đã
xác định được: độ ẩm, hàm lượng tro và hàm lượng kim loại trong tua Sen được thu mua tại Hà Nội.
– Độ ẩm: 5,39%
– Hàm lượng tro: 17,15%
– Hàm lượng các kim loại nặng Pb, As, Hg, Cd nằm trong khoảng cho phép theo quyết định của Bộ Y tế số 46/2007/QD – BYT ngày 19 tháng 12 năm 2007 của Bộ trưởng Bộ Y tế về việc ban hành qui định giới hạn tối đa ô nhiễm sinh học và hóa học trong thực phẩm với hàm lượng các kim loại nặng cho phép trong thực phẩm.
2. Bằng phương pháp GC–MS đã định danh được 32 cấu tử có trong các dịch chiết tua Sen. Trong đó, có một số cấu tử chiếm thành phần lớn như: 9,12,15- Octadecatrienoic acid, 9,19-Cyclolanost-24-en-3-ol, acetate, (3α)-, n-Hexadecanoic acid, Hexadecanoic acid, ethyl ester, β-Sitosterol, Campesterol…và 5 cấu tử cùng có mặt trong 4 dịch chiết là: 9,12,15-Octadecatrienoic acid, Campesterol, β-Sitosterol, 9,19-Cyclolanost-24-en-3-ol, acetate, (3α)-, Cholest-4-en-3-one.
Một số cấu tử chiếm thành phần lớn có nhiều ứng dụng trong thực tế thuộc các nhóm chất chính: nhóm Phytosterol gồm có Stigmasterol, β-Sitosterol và Campesterol, nhóm axit hữu cơ gồm có axit oleic, axit palmitic, axit α-linolenic và axit stearic.
3. Theo kết quả định tính, trong thành phần cao ethanol ban đầu có chứa các nhóm chức flavonoid, steroid, glycosid, phenol, tanin, sesquiterpen–lacton và không chứa ankaloid, lipid.
4. Đã tiến hành phân lập phân đoạn cao dichlomethane (từ tổng cao ethanol) của
tua Sen bằng phương pháp sắc ký cột với chất hấp phụ là silicagel thu được chất kết tinh. Trong đó định danh được thành phần chủ yếu là β–Sitosterol và Campesterol.
Do thời gian nghiên cứu có hạn, thông qua kết quả của đề tài, tôi mong muốn đề tài được phát triển rộng hơn về một số vấn đề như sau:
– Tua Sen có chứa một số chất có ứng dụng trong y học như: β-Sitosterol, Campesterol…với hàm lượng tương đối cao. Vì vậy, cần nghiên cứu tách, làm giàu các cấu tử này bằng các phương pháp khác nhau để đạt hiệu quả tốt nhất nhằm đáp ứng nhu cầu cuộc sống.
– Nghiên cứu hoạt tính kháng khuẩn, kháng oxy hóa đối với một số dịch chiết của tua Sen nhằm tăng giá trị sử dụng của cây dược liệu này.
DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt
[1]AOAC 971.21 (2010), AOAC 986.15 (2010), AOAC 999.11 (2010).
[2]Đỗ Huy Bích (2005), Cây thuốc và Động Vật làm thuốc ở Việt Nam- tập 2, NXB Khoa học và Kỹ thuật, tr.721-726.
[3]Bộ Y Tế (2010), Dược điển Việt Nam IV, NXB Y học Hà Nội, tr.882-884, tr.PL- 9, 105, 119.
[4]Võ Văn Chi (2004), Từ điển thực vật thông dụng-tập 2,NXBKhoa học và Kỹ thuật Hà Nội, tr.1776-1777.
[5] Phạm Hoàng Hộ (2000),Cây cỏ Việt Nam-tập 2, NXB Trẻ, tr.312.
[6] Phạm Thanh Kỳ (2007),Dược liệu học-tập 2,NXB Y học, tr.9-27, 116-119. [7] Đỗ Tất Lợi (2005), Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam,NXB Y học Hà Nội,
tr.783-786.
[8] Nguyễn Thị Nhung, Phạm Thanh Kỳ (1998), “Nghiên cứu thành phần hóa học của lá sen Nelumbo nucifera Gaertn.”, Tạp chí Dược học (6), tr.13-18. [9] Nguyễn Thị Nhung, Phạm Thanh Kỳ (1997), “Xác định cấu trúc của nuciferin
bằng phương pháp phổ khối lượng”, Tạp chí Dược học,tr.19-21.
[10] Nguyễn Kim Phụng (2006),Phương pháp cô lập hợp chất thiên nhiên, NXB Đại học, Viện Công nghệ Hóa học-Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam, chương 1, 3, 4.
[11] TCVN 5613:1991 [12] TCVN 5611: 2007
[13]Đỗ Châu Minh Vĩnh Thọ, Nguyễn Đức Tuấn, Trần Hùng (2011), “Nghiên cứu thành phần alkaloid trong tâm Sen”, Tạp chí Y học TP. Hồ Chí Minh, tr.606-611.
Tiếng Anh
[14] AmenTakhtajan (2009), Flowering plants, 2nd Ed, New York: Springer, pp.74- 75.
[15] Atsuko Itoh, Tomomi Saito (2011), “Bisbenzylisoquinoline alkaloids fromNelumbo nucifera”, Chem. Pharm. Bull, 59(8), pp.947-951.
[16] Beata Jasiewicz (2008), “NMR Spectra of Sparteine N1-oxide and α- Isosparteine N-oxide”,Molecules 13, pp.3-10.
[17] Bernauer K. (1963), “Pronuciferin, ein Benzylisochinolin-Alkaloid mit para- Cyclohexadienon Gruppierung”, Helv Chim Acta, pp.1783-1785.
[18] Chao Tse Yuan, Chou Tsan-Quo (1962), “Studies on the alkaloids of embryo loti, Nelumbo nucifera Gaertn. Isolation and characterisation of liensinine”, Scientia sennica, 11(2), pp.215-219.
[19]Chen J., Liu S., et als (2012), “The application of cation exchange resins in the separation of total flavonoids and alkaloids from seed embryo of Nelumbo nucifera”, Zhong Yao Cai, 35(11), pp.1842-1846.
[20] Chen Y., Guorong F. (2007), “Separation, identification and rapid determination of liensine, isoliensinine and neferine from embryo of the seed of Nelumbo nucifera Gaertn. by LC/PDA/MS”, Pharm Biomed Anal, 43, pp.99-104. [21] Ivan Polunin (1987), “Plants and Flowers of Singapore”, Times Editions, (p.
68: description, habitat, distribution, photo).
[22]Jiang Ning Hu, Bin Shan, (2010), “Application of high-speed counter-current chromatography for the isolation of 5 alkaloids from lotus (Nelumbo nucifera
Gaertn.) leaves”, Food Sci. Biotechnol, 19(6), pp.1661-1665.
[23]Hedeo Koshiyama, Hiroaki Ohkuma (1970), “Isolation of demethylcoclaurine, an active alkaloid from Nelumbo nucifera”, Chem. Pharm. Bull, 18 (12), pp.2564-2568.
[24] Hirhoshi Fukurama (1966), “On the alkaloids of Nelumbo nucifera Gaertn. XII. Alkaloids of Loti embryo”, Journal of the Pharmaceutical Society of Japan, 86, pp.75-77.
[25] Huang C. F., Chen Y. W., Yang C. Y., Lin H. Y, Way T. D., Chiang W., Liu S. H. (2011), Extract of lotus leaf (Nelumbo nucifera) and its active consitituent catechin with insulin secretagogue activity”, Journal of Agricultural and Food Chemistry.
[26] Kashiwada, Y,; Aoshima, A.; Ikeshiro, Y.; Chen, Y. P.; Furukawa, H.; Itoigawa, M.; Fujioka, T.; Mihashi, K.; Cosentino, L. M.; Morris-Natschke, S. L.; Lee, K. H. (2005), “Anti-HIV benzylisoquinoline alkaloids and flavonoids from the leaves of Nelumbo nucifera and structure-activity correlations with relate alkaloids”. Bioorganic & Medicinal Chemistry 13(2), pp. 443-
448.
[27] Kupchan. S.M, B. Dasgupta, (1963), “The alkaloids of American lotus Nelumbo lutea”, Tetrahedron, 19, pp.227-232.
[28]Lin H. Y., Kuo Y. H., Lin Y. L, Chiang W. (2009), “Antioxidative effect and active components from leaves of Lotus (Nelumbo nucifera), Graduate Institute of Food Science and Technology”, Journal of Agricultural and Food Chemistry.
[29]Ohkoshi E., Miyazaki H., K Shindo, Watanabe H., Yoshida A., Yajima H. (2007), “Constitutents from the Leaves of Nelumbo nucifera Stimualate Lipolysis in the White Adipose Tissue of Mice”, Planta Medica.
[30] Perry, F. Flowers of the World Bonanza Books(1972), p. 192-193.
[31] Shen-Miller, J.; Schopf, J. W.; Harbottle, G.; Cao, R.; Ouyang, S.; Zhou, K.; Southon, J. R.; Liu, G. (2002), “Long living lotus: Germination and soil irradiation of centuries old fruits, and cultivation, growth, and phenotypic abnormalities of offspring”,American Journal of Botany 89(2), pp. 236- 247.
[32] Takefumi Sagara, Naoyoshi Nishibori, Manami Sawaguchi, Takara Hiro, Mari Itoh, Song Her, Kyoji Morita (2012), “Lotus root (Nelumbo nucifera)
extract causes protective effesct against iron-induced toxic damage to C6 glioma cell”, Inforesights Publishing UK, pp. 179-189.
[33] Wang. H.M, W. L Yang, (2011), “Chemical constituents from the leaves of
Nelumbo nucifera Gaertn. cv. Rosa-plena”, Chemistry of Natural Compounds, 47(2), pp.316-318.
[34]Wang Ling, Liu Bin (2009), “Study on chemical constituents of Folium nelumbinis”, Natural Product Research and Development, 3, pp.231-235. [35] Wee Yeow Chin (1992), “A Guide to Medicinal Plants”, Singapore Science
Centre, (p. 108: description, chemical compouds, uses).
Websites
dan-chat-tu-sen-7518/. [37] http://123doc.org/document/896340-nghien-cuu-mot-so-dac-diem-thuc-vat- va-hoa-sinh-cua-cay-sen-nelumbo-nucifera-gaertn-tai-xa-hung-tien-nam- dan-nghe-an.htm?page=9. [38] http://tailieu.vm/doc/do-an-tot-nghiep-tim-hieu-ve-sen-va-cac-san-pham-tu- sen-1681740.html. [39] http://thuocnam.me/hat-sen-lam-thuoc-bo-ty. [40] http://www.duoclieu.org/2012/01/sen-nelumbo-nucifera.html. [41] https://www.google.com.vn/search?tbm=isch&q=sen+hong#imgdii=2Z8FB5 fRFRxfVM:&imgrc=kA-yVsGZyYwrTM: [42] https://www.google.com.vn/search?tbm=isch&q=sen+trang#imgrc=0sYycU ugxApLM: [43] http://www.thuocvuonnha.com/cong-dung-cua-tra-la-sen/thuoc-vuon-nha. [44] http://en.wikipedia.org/wiki/Phytosterol. [45] http://en.wikipedia.org/wiki/Stigmasterol. [46] http://mji.ui.ac.id/journal/index.php/mji/article/view/1085. [47] http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21658378. [48] http://en.wikipedia.org/wiki/Campesterol. [49] http://en.wikipedia.org/wiki/Oleic_acid. [50] https://vietmedix.com/Drug/drug-alpha-linolenic-acid.126.html. [51] http://www.xnkhoachat.com/2012/06/acid-stearic-cong-dung-acidstearic.html. [52] http://en.wikipedia.org/wiki/Palmitic_acid. [53] https://en.wikipedia.org/wiki/Mannose. [54] https://www.tabletwise.com/medicine-vi/d-mannose.