CHẠY CỘT SẮC KÝ PHẦN CAO CHLOROFORM

5. Bố cục của luận văn

2.7. CHẠY CỘT SẮC KÝ PHẦN CAO CHLOROFORM

Phần cặn chloroform (12 g) đem tẩm với sillica gel, sau đó bốc hơi đến hết dung môi thành bột mịn tơi. Đưa bột silica gel đã tẩm dịch chiết lên cột. Tiến hành rửa giải bằng hệ dung môi dicloromethan/methanol với độ phân cực tăng dần (dicloromethan/methanol, 99/1, 95/5... 70/30 v/v). Hứng dịch rửa giải vào bình rồi tiến hành kiểm tra bằng sắc ký lớp mỏng. Dựa vào hình ảnh sắc ký đồ, chia dịch rửa giải thành 5 phân đoạn tương ứng là PA-C1 (3,4 g); PA-C2 (1,8 g); PA-C3 (1,4 g); PA-C4 (1,2 g) và PA-C5 (2,3 g).

Phân đoạn PA-C1 (3,4 g) được phân tách bằng cột silica gel pha đảo, rửa giải bằng hỗn hợp methanol/nước (3/2, v/v). Hứng dịch rửa giải vào các ống nghiệm sạch và khô. Kiểm tra các ống nghiệm bằng sắc ký lớp mỏng. Kết quả thu được từ ống số 45-50 có một vết có cùng giá trị Rf. Gộp các ống này lại rồi cho bay hơi dung môi thu được một chất bột màu vàng sẩm, khối lượng 40 mg, kí hiệu là C1. Kiểm tra C1 bằng SKLM, dựa trên vết sắc ký cho thấy C1 là chất tương đối tinh khiết.

Phân đoạn PA-C5 (2,3 g) được cho qua cột silicagel, giải hấp bằng hỗn hợp dichloromethan/methanol (95:5) thu được 4 phân đoạn (từ PAC5.1 đến

PAC5.4). Cô quay khô phân đoạn PAC5.4, hòa tan vào ethyl acetate thu được kết tủa trằng, hòa tan kết tủa và kết tinh lại trong hỗn hợp dichloromethan/methanol (1:1) thu được 27 mg chất C2 dưới dạng bột vô định hình, màu trắng, Rf = 0,67 (hệ dung môi dichlormethan/methanol = 85:15). Sơ đồ phân lập các hợp chất từ cao chiết chloroform được trình bày trên hình 2.3. Cắn CHCl3 (PA-C,12,0 g) Silica gel c. c. D:M gradient 99:1→10:1 Silica gel c.c. (v/v) D:M 95/5 Chất rắn kết tinh trắng Kết tinh lại C2 (27,0 mg) RP-18 c.c (v/v)M:W 3:2 C1 (40,0 mg)

Hình 2.3. Sơ đồ phân lập các hợp chất từ phân đoạn dịch chiết chloroformhoa đu đủ đực PA-C4 (1,2 g) PA-C5 (2,3 g) PA-C3 (1,4 g) PA-C2 (1,8 g) PA-C1 (3,4 g)

Chất C1 đem đo phổ ESI-MS, phổ 1H-NMR (MeOD, 500 Hz), phổ 13C- NMR (MeOD, 125Hz), thu được các kết quả sau:

- Phổ ESI-MS cho píc tại m/z 287,14 [M+H]+

- Phổ 1H-NMR cho các tín hiệu: 6,42(H,6), 6,42 (H,8), 8,07(H,2’), 6,91 (H,3’), 6,91 (H,5’), 8,07(H,6’).

- Phổ 13C-NMR các tín hiệu được trình bày trong bảng 3.4.

Chất C2 đem đo phổ hồng ngoại IR, phổ 1H-NMR (MeOD, 500 Hz), phổ 13C-NMR(CDCl3, 125 MHz), thu được các kết quả sau:

- Phổ IR (KBr) maxcm-1): 3430; 2939; 1644; 1463; 1370; 1029; 999; 830; 769; 663; 603; 433.

- Phổ 1H-NMR cho các tín hiệu: 0,66(3H,18); 1,01(3H,19); 0,90(3H,21); 0,88(3H,26); 0,84(3H,27); 0,82(3H,29), 5,33(H,6),3,34(2H,2’ ), 3,60(2H,6’), 3,52(3H,3α), 5,33(3H,6) , 4,22(3H,1’ )và một số tín hiệu proton khác của phần đường từ 2,91-3,6.

CHƯƠNG 3

KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN