Tương tự nhưđợt thí nghiệm I, tôm ở các nghiệm thức NT1, NT2, NT3 được cho ăn thức ăn đã trộn với Fucoidan với liều tương ứng là 200, 400 và 600 mg/kg tôm và thức ăn đã trộn với Diệp Hạ Châu với liều tương ứng là: 1, 2 và 3g/ kg thức
ăn đã được dùng cho tôm ở các nghiệm thức NT4, NT5 và NT6 trong 5 ngày. Sang ngày thí nghiệm thứ 6, xác của tôm chân trắng bị hội chứng chết đỏ đã được dùng làm thức ăn cho nghiệm thức ĐC+ và các nghiệm thức nói trên trong 12h, sau đó thức ăn tổng hợp đã được trộn với thuốc F hoặc D với liều như đã mô tả ở trên đã
được dùng cho tôm ăn ở các nghiệm thức cho đến khi kết thúc thí nghiệm (10 ngày). Tỷ lệ chết tích lũy trùng bình (lặp lại 2 lần) ở các nghiệm thức thể hiện ở
bảng 3.4 và hình 3.6.
Bảng 3.4: Tỉ lệ (%) tôm chết tích lũy trung bình theo ngày ở thí nghiệm đợt II.
Tỉ lệ (%) tôm chết tích lũy theo ngày
Các NT đối Các NT dùng Fucoidan Các NT dùng Diệp hạ Châu Ngày thí nghiệm ĐC-1 ĐC+ NT1 NT2 NT3 NT4 NT5 NT6 1 0 0 0 0 0 0 0 0 2 0 0 0 0 0 0 0 0 3 0 0 0 0 0 0 0 0 4 0 0 0 0 0 0 0 0 5 0 0 0 0 0 0 0 0 6 0 0 0 0 0 0 0 0 7 0 45.83 52.08 50 62.5 58.33 56.25 64.58 8 0 91.67 81.25 89.58 87.5 85.42 91.67 81.25 9 0 100 100 100 100 100 100 97.92 10 0 100 100 100 100 100 100 100
Hình 3.7. Tỉ lệ (%) tôm chết tích lũy trung bình theo ngày ở thí nghiệm đợt II
Kết quả thí nghiệm ở bảng 3.4. và hình 3.6. đã thể hiện rằng, chỉ cần 30 h kể
từ khi bắt đầu cảm nhiễm bằng cách cho tôm thí nghiệm ăn xác của tôm bệnh, tôm thí nghiệm đã bộc lộ các dấu hiệu của bệnh ở hầu hết các nghiệm thức: ĐC+, NT1, NT2, NT3, NT4, NT5 và NT6. Một số con tôm ở các NT này đã kém ăn (thức ăn dư nhiều trong bể, đường ruột không rõ), cơ thể chuyển sang mầu đỏ bầm, bơi lội yếu ớt trên mặt nước gần dây sục khí, sau đó chìm xuống đáy và xác tôm chết xuất hiện sau 48h kể từ khi bắt đầu cảm nhiễm, tỷ lệ chết đã đạt xấp xỉ 50% vào ngày thứ
3 sau cảm nhiễm, và chết 100% ở tất cả các nghiệm thức đã được cảm nhiễm vào ngày thứ 5 sau cảm nhiễm (ngày thứ 10 kể từ khi bắt đầu bố trí thí nghiệm).
Trong khi đó, tôm ở NT đối chứng âm (ĐC-) vẫn khỏe mạnh bình thường, hoàn toàn không có hiện tượng chết, tỷ lệ sống sau 10 ngày thí nghiệm đạt 100%.
Ở những con tôm bị chết từ ngày thứ 4 sau cảm nhiễm, ngoài dấu hiệu đỏ
thân, còn quan sát thấy các đốm trắng to hoặc nhỏ ở mặt dưới của giáp đầu ngực, thường chỉ quan sát thấy khi dùng tay kéo rời lớp vỏ của giáp đầu ngực.
Hình 3.8.Các dấu hiệu bệnh lý đã quan sát được ở các con tôm chân trắng hấp hối và chết trong thí nghiệm phòng bệnh đợt II.
1. Tôm hấp hối đã bộc lộ dấu hiệu: thân chuyển sang đỏ bầm, không thấy
đường ruột, rất yếu
2. Hình ảnh của tôm ởđáy của một nghiệm thức sau cảm nhiễm 2 ngày
Bảng 3.5. So sánh thống kê về tỷ lệ chết trung bình của tôm ở các nghiệm thức sau khi đã bị cảm nhiễm đợt II. (cảm nhiễm vào ngày thứ 5 của thí nghiệm)
Tỉ lệ chết tích lũy theo ngày thí nghiệm % Các NT Ngày thứ 6 (2 ngày sau cảm nhiễm) Ngày thứ 7 (3 ngày sau cảm nhiễm) Ngày thứ 8 (4 ngày sau cảm nhiễm) Ngày thứ 9 (5 ngày sau cảm nhiễm) ĐC+ 0,00 45,83 ± 4,17a 91,67 ± 4,17a 100,00 ± 0,00a NT1 0,00 51,96 ± 10,29a 81,25 ± 6,25a 100,00 ± 0,00a NT2 0,00 50,00 ± 20,83a 89,58 ± 6,25a 100,00 ± 0,00a NT3 0,00 62,50 ± 12,50a 87,50 ± 4,17a 100,00 ± 0,00a NT4 0,00 58,33 ± 12,50a 85,42 ± 6,25a 100,00 ± 0,00a NT5 0,00 56,25 ± 27,08a 91,67 ± 4,17a 100,00 ± 0,00a NT6 0,00 64,58 ± 6,25a 81,25 ± 18,75a 97,92 ± 0,00a
Chú thích: Các chữ cái khác nhau viết kèm các số theo cột dọc thể hiện sự khác nhau có ý nghĩa thống kê (p<0,05) khi so sánh bằng ANOVA một yếu tố.
Số liệu ở bảng 3.5. đã cho ta thấy không có sự sai khác rõ ràng về thời điểm xuất hiện tôm chết và tỷ lệ chết của tôm ở các nghiệm thức đã dùng Fucoidan (với
liều: 200, 400 và 600 mg/kg tôm) hoặc Diệp Hạ Châu (với liều 1, 2 và 3 g/ kg thức
ăn) trộn vào thức ăn trước (4 ngày) và sau cảm nhiễm để phòng hội chứng chết đỏ ở tôm chân trắng với nghiệm thức đối chứng dương (ĐC+) trong điều kiện thí nghiệm. So sánh thống kê đã cho thấy tỷ lệ chết tích lũy ở mỗi ngày giữa các nghiệm thức đều khác nhau không có ý nghĩa (p>0,05) so với nghiệm thức đối chứng dương (không dùng thuốc phòng bệnh).
3.1.2.2. Kiểm tra PCR và mô bệnh học các mẫu tôm trước và sau đợt thí
nghiệm II.
Cũng như đợt thí nghiệm thứ nhất, mẫu tôm khỏe dùng để bố trí thí nghiệm, mẫu tôm bệnh dùng để cảm nhiễm và các mẫu tôm thu từ các nghiệm thức ĐC-,
ĐC+, NT1, NT2, NT3, NT4, NT5 và NT6 sau thí nghiệm đều được kiểm tra mức
độ cảm nhiễm virus gây hội chứng chết đỏ (WSSV) ở tôm chân trắng (Litopenaeus vannamei) bằng kỹ thuật PCR và bằng phương pháp mô bệnh học. Kết quả kiểm tra
được thể hiện ở bảng 3.6.
Bảng 3.6.Kết quả kiểm tra mẫu tôm đợt thí nghiệm thứ II bằng PCR và mô bệnh học.
Nhiễm WSSV ở các mẫu tôm thí nghiệm Nghiệm thức thí nghiệm PCR MÔ BỆNH HỌC Tôm khỏe trước TN - - Tôm bị hội chứng chết đỏ dùng cho cảm nhiễm + +
KẾT QUẢ KIỂM TRA TÔM SAU THÍ NGHIỆM PHÒNG BỆNH
Mẫu thu từ ĐC- - - Mẫu thu từ ĐC+ + + Mẫu thu từ NT1 + + Mẫu thu từ NT2 + + Mẫu thu từ NT3 + + Mẫu thu từ NT4 + + Mẫu thu từ NT5 + + Mẫu thu từ NT6 + +
Từ kết quả thể hiện ở bảng 3.6. đã cho ta thấy, đàn tôm khỏe dùng cho thí nghiệm đã đảm bảo âm tính với WSSV và mẫu tôm dùng để cảm nhiễm trong thí nghiệm II cũng đã bộc lộ những dấu hiệu của hội chứng chết đỏở tôm chân trắng và dương tính với WSSV. Sau thí nghiệm 10 ngày, mẫu tôm thu ở nghiệm thức ĐC- vẫn âm tính với WSSV tương ứng với tỷ lệ sống 100% khi kết thúc thí nghiệm.
Trong khi đó, các mẫu tôm hấp hối thu ở các nghiệm thức ĐC+, NT1, NT2, NT3, NT4, NT5 và NT6 đã bộc lộ nhưng dấu hiệu đặc thù của hội chứng chết đỏ
như đã từng được báo cáo bởi Nguyễn Thị Nguyệt Huệ (2011) và những mẫu này
đều có kết quả dương tính (+) với WSSV, tương ứng với một tỷ lệ chết dữ dội (xấp xỉ 50%) từ ngày thứ 3 sau khi cảm nhiễm và chết 100% vào ngày thứ 6 sau cảm nhiễm ở nhiệt độ 28,2-310C.
Kết quả thu được từ đợt thí nghiệm thứ II đã một lần nữa khẳng định rằng, dùng Fucoidan sản xuất từ rong mơ (với các liều: 200, 400 và 600 mg/kg tôm) và cao Diệp Hạ Châu (với liều 1, 2 và 3 g/kg thức ăn) trộn vào thức ăn để cho tôm ăn trước (từ 4-7 ngày) và sau thời điểm cảm nhiễm WSSV (thí nghiệm kéo dài từ 10- 14 ngày) đã không có hiệu quả phòng hội chứng chết đỏ do WSSV gây ra ở tôm chân trắng (Litopenaeus vannamei) trong điều kiện thí nghiệm.