gia.. .21 CHƯƠN G2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGH IN CỨU
3 1 Tính ổn địn hở nhiệt độ bảo quản
3.3.1.1. Tính ổn định về cơng hiệu ở nhiệt độ -40°C ± 2°C và 5°C ± 3°C
Ở nhiệt độ bảo quản -40°C ± 2°C vắc xin RaP01 được theo dõi công hiệu t i 5 mốc thời gian là 1 tháng 2 tháng 3 tháng 6 tháng và 9 tháng Kết quả được chỉ ra ở bảng 3.7.
Bảng 3.7. Công hiệu của vắc xin RaP01 ở nhiệt độ bảo quản (-40°C ± 2°C)
Thời gian (tháng)
ĐVMD (IU/ống) TB
(IU/ống) SD CV%
Mẫu 1 Mẫu 2 Mẫu 3
1 72,54 74,52 73,56 73,54 0,99 1,3
2 77,56 74,25 76,54 76,12 1,7 2,2
3 68,50 76,58 78,56 74,55 5,3 7,1
6 75,25 72,34 71,45 73,01 2,0 2,7
9 74,58 76,54 68,54 73,22 4,2 5,7
Hình 3.9 Đồ thị biểu diễn cơng hiệu của VXMC dự tuyển ho gà vô bào RaP01 ở -40°C ± 2°C
Như vậy đối với nhiệt độ -40°C ± 2°C sau 9 tháng công hiệu của vắc xin là hông thay đổi, so với số ĐVMD trong 1 ống VXMC dự tuyển ho gà
9 6 3 Tháng 2 1 60.000 65.000 70.000 73.220 73.013 74.547 73.540 75.000 76.117 80.000 85.000 90.000 IU /ố ng
vô bào RaP01 đã được công nhận (72 IU/ống). Sự dao động của các ết quả đánh giá về tính ổn định cơng hiệu của vắc xin ở -40°C ± 2°C (73 2 ± 4,2 IU/ống) là trong giới h n của phép đo
Đối với vắc xin đông hô nhiệt độ 5°C ± 3°C được coi là nhiệt độ bảo quản của VXMC trong thời gian ngắn h n Nghiên cứu độ ổn định công hiệu của vắc xin RaP01 được thực hiện t i 3 mốc thời gian là 4 tuần, 8 tuần và 12 tuần. Kết quả được chỉ ra ở bảng 3.8.
Bảng 3.8. Công hiệu của vắc xin RaP01 ở nhiệt độ 5°C ± 3°C
Thời gian (tuần)
ĐVMD (IU/ống) TB
(IU/ống) SD CV%
Mẫu 1 Mẫu 2 Mẫu 3
4 74,80 67,74 71,18 71,24 3,5 5,0
8 72,68 70,35 67,26 70,10 2,7 4,0
12 69,50 67,26 69,24 68,67 1,2 1,8
Kết quả bảng 3.8 cho thấy với nhiệt độ 5°C ± 3°C công hiệu của vắc xin c xu hướng giảm nhẹ theo thời gian. Sau 4 tuần cơng hiệu trung bình là 71,24 ± 3,53 IU/ống tương đương 98 5%. Sau 8 tuần công hiệu sụt giảm còn 70,10 ± 2,72 IU/ống, giảm cịn 97% và sau 12 tuần cơng hiệu chỉ còn 68 67 ± 1,23 IU/ống, giảm cịn 95% so với giá trị cơng hiệu ban đầu ở nhiệt độ bảo quản Như vậy sau 8 tuần bảo quản ở nhiệt độ 5 ± 3°C giá trị công hiệu chỉ giảm 5% so với ban đầu (hình 3 9).
3.3.1.2. Tính ổn định về cảm quan và tính chất vật lý của vắc xin RaP01 ở các nhiệt độ bảo quản
Bảng 3.9. Kết quả xác định các chỉ tiêu cảm quan và tính chất vật lý theo thời gian của vắc xin RaP01 ở -40°C ± 2°C
Chỉ tiêu
đánh giá Tiêu chuẩn
Thời gian bảo quản ở nhiệt độ -40oC 1 tháng 2 tháng 3 tháng 6 tháng 9 tháng Cảm quan D ng bánh bong hơng teo sau hồn ngun
t o hỗn dịch đồng nhất màu trắng đục Không thay đổi Không thay đổi Không thay đổi Không thay đổi Không thay đổi Độ ẩm tồn dư (%) ≤ 3 2,32 2,45 2,56 2,34 2,75 Độ hấp phụ (%) ≥ 80 85,25 86,48 84,50 81,57 82,46 Tốc độ t o hỗn dịch sau hoàn nguyên (gi y) ≤ 60 gi y 40 45 50 45 54
Như vậy trong thời gian theo dõi 9 tháng ở nhiệt độ bảo quản -40°C ± 2°C VXMC RaP01 đ t các chỉ tiêu cảm quan và tính chất vật lý so với tiêu chuẩn.
Bảng 3.10. Kết quả xác định các chỉ tiêu cảm quan và tính chất vật lý theo thời gian của vắc xin RaP01 ở 5°C ± 3°C
Chỉ tiêu
đánh giá Tiêu chuẩn
Thời gian bảo quản ở nhiệt độ 5oC ± 3oC
4 tuần 8 tuần 12 tuần
Cảm quan
D ng bánh bong hơng teo
sau hồn nguyên t o hỗn dịch đồng nhất, màu trắng đục Không thay đổi Không thay đổi Không thay đổi Độ ẩm tồn dư (%) ≤ 3 2,48 2,76 2,84 Độ hấp phụ (%) ≥ 80 81,25 82,48 82,35 Tốc độ t o hỗn dịch sau hoàn nguyên (gi y) ≤ 60 gi y 50 45 55
Ở nhiệt độ bảo quản 5°C ± 3°C các đặc tính về cảm quan và tính chất vật lý của VXMC dự tuyển ho gà vô bào RaP01 vẫn đ t tiêu chuẩn trong 12 tuần.
3.3.2. Tính ổn định ở nhiệt độ thúc đẩy nhanh và dự đoán tuổi thọ của vắc xin mẫu chuẩn dự tuyển ho gà vơ bào RaP01
3.3.2.1. Tính ổn định ở các nhiệt độ 25°C ± 2°C; 37°C ± 2°C và 45°C ± 2°C
Tính ổn định của vắc xin RaP01 ở các dải nhiệt độ cao hơn nhiệt độ bảo quản được đánh giá thông qua 3 chỉ tiêu của vắc xin đ là công hiệu độ hấp phụ và tốc độ t o huyền dịch đồng nhất. Ở nhiệt độ 25°C ± 2°C, 37°C ± 2°C thời gian đánh giá trong 12 tuần với khoảng cách 4 tuần 1 lần. Trong khi đ ở nhiệt độ 45°C ± 2°C vắc xin được theo dõi trong thời gian ngắn nhưng với khoảng cách dày hơn (1 tuần, 2 tuần, 4 tuần và 6 tuần). Kết quả đánh giá tính ổn định của vắc xin RaP01 ở các nhiệt độ thúc đẩy nhanh được chỉ ra ở bảng 3.11, 3 12 và 3 13.
Bảng 3.11. Tính ổn định của vắc xin RaP01 ở nhiệt độ 25°C ± 2°C
Thời gian
Kết quả 4 tuần 8 tuần 12 tuần
Công hiệu (IU/ống) 32,87 31,82 29,69
Độ hấp phụ (%) 60,5 50,4 40,6
Tốc độ t o hỗn dịch sau
hoàn nguyên (gi y) 42 46 49
Bảng 3.12. Tính ổn định của vắc xin RaP01 ở nhiệt độ 37°C ± 2°C
Thời gian
Kết quả 4 tuần 8 tuần 12 tuần
Công hiệu (IU/ống) 31,20 29,51 25,06
Độ hấp phụ (%) 60,5 50,6 40,6
Tốc độ t o hỗn dịch sau
Bảng 3.13. Tính ổn định của vắc xin RaP01 ở nhiệt độ 45°C ± 2°C
Thời gian
Kết quả 1 tuần 2 tuần 4 tuần 6 tuần
Công hiệu (IU/ống) 42,21 32,02 24,00 10,42
Độ hấp phụ (%) 60,5 50,5 44,5 38,4
Tốc độ t o hỗn dịch sau hoàn nguyên (gi y)
44 48 50 55
Như vậy ở các nhiệt độ cao hơn, vắc xin RaP01 c sự sụt giảm đồng đều về các chỉ tiêu công hiệu và độ hấp phụ Đánh giá về cảm quan ở d ng đông hô vắc xin vẫn cho thấy hơng c sự thay đổi về hình d ng và màu sắc. Tuy nhiên chỉ số tốc độ t o huyền dịch đồng nhất bị éo dài hơn so với ban đầu, hoặc so với vắc xin bảo quản ở ở các nhiệt độ thấp hơn
Kết quả trên cho thấy các nhiệt độ cao hơng thích hợp để bảo quản vắc xin trong thời gian 4 tuần ở 37°C và 25°C.
3.3.2.2. Dự đoán tuổi thọ của vắc xin mẫu chuẩn dự tuyển ho gà vô bào RaP01
Tuổi thọ của vắc xin bảo quản trong một điều kiện nhất định nào đ phải được xác định theo thời gian thực Tuy nhiên đối với VXMC thường được sản xuất với mục đích sử dụng l u dài tối thiểu trong 10 n m thì việc xác định tuổi thọ của n là điều hông thực tế. Tuy nhiên việc dự đoán tuổi thọ của vắc xin c thể thực hiện dựa trên sự sụt giảm ho t tính hi để vắc xin trong các điều kiện giáng h a cấp tốc như ở nhiệt độ cao.
Trong nghiên cứu này dựa vào ết quả công hiệu của vắc xin RaP01 hi đặt ở nhiệt độ 45°C ± 2°C trong 1 2 4 và 6 tuần chúng tôi thiết lập các phương trình để tính tốn tuổi thọ dự đốn của vắc xin RaP01 ở nhiệt độ bảo quản - 40°C ± 2°C. Kết quả được trình bày ở bảng 3.14.
Bảng 3.14. Kết quả công hiệu RaP01 t i các thời điểm ủ mẫu ở nhiệt độ 45°C ± 2°C
STT Thời gian ủ mẫu (tuần) Công hiệu (IU/ống)
1 1 42,21
2 2 32,02
3 4 24,00
4 6 10,42
Từ kết quả cơng hiệu ở trên thiết lập được phương trình hồi quy tuyến tính biểu thị mối tương quan giữa thời gian bảo quản và công hiệu như được chỉ ra ở hình 3 11.
Hình 3.11. Đồ thị biểu diễn sự phụ thuộc công hiệu của RaP01 bảo quản ở nhiệt độ 45°C ± 2°C theo các tuần
Phương trình hồi quy thu được: Y= -6.084*X +45.41. R2 = 0 959: đ t yêu cầu về tính hồi quy.
Dựa vào phương trình hồi quy ta tính được thời điểm mà t i đ cơng hiệu cịn 50%:
36,16 - 45,41
X = = 1,52 (tuần)
- 6,084
Tuổi thọ dự đoán ở điều kiện bảo quản -40°C:
C = × X = 28 5×1 52 = 550.44 (tuần) tương đương 10 59 n m
Như vậy với phương pháp theo dõi ở điều kiện bảo quản lão h a cấp tốc ta xác định được tuổi thọ dự đoán của mẫu nghiên cứu là 10 59 n m
Tuổi thọ dự đốn theo phương pháp này hơng phản ánh chính xác số tuổi thọ thực sự của mẫu c bản chất sinh học nhưng n cũng phản ánh tương đối tuổi thọ của mẫu nghiên cứu. Kết quả này cho thấy tuổi thọ dự đoán của mẫu chuẩn RaP01 là cao
Do đ từ những kết quả trên ết luận mẫu chuẩn RaP01 c tuổi thọ phù hợp yêu cầu đưa ra là trên 10 n m
Tuy nhiên sự biến đổi của các chất c bản chất sinh học phụ thuộc vào sự biến đổi nhiệt độ thấp hơn so với các chất c bản chất h a học nên phương pháp thúc đẩy nhiệt để dự đoán tuổi thọ của VXMC c độ chính xác hơng cao Do đ vẫn phải tiếp tục giám sát công hiệu của VXMC dự tuyển RaP01 ở điều kiện bảo quản thường (-40°C) theo thời gian. Việc chọn thời điểm giám sát c thể dựa vào ph n tích xu hướng hoặc theo các mốc thời gian định kỳ cụ thể Nghiên cứu này cũng chưa xác định được giai đo n mẫu chuẩn bắt đầu giảm công hiệu liên tục Đ y là giai đo n quan trọng vì hi bước vào giai đo n này độ ổn định công hiệu của mẫu chuẩn rất thấp hơng cịn đủ tin cậy để đưa vào thử nghiệm và mẫu chuẩn phải hủy bỏ.
CHƯƠNG 4. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
4.1. KẾT LUẬN
(1) VXMC ho gà vô bào RaP01 đ t tiêu chuẩn chất lượng dự kiến về các chỉ tiêu vơ huẩn, an tồn chung cảm quan tính chất vật lý h a học đặc tính háng ngun và cơng hiệu đủ tiêu chuẩn dự tuyển cho MCQG.
(2) ĐVMD của VXMC ho gà vô bào RaP01 được xác định t i IV C là 67,71 IU/ống và t i NICVB là 76 28 IU/ống. Vắc xin RaP01 được công nhận mẫu chuẩn ho gà vô bào quốc gia c số ĐVMD là 72 IU/ống.
(3) VXMC ho gà vô bào quốc gia RaP01 đảm bảo được độ ổn định về chất lượng ở nhiệt độ bảo quản -40°C ± 2°C trong thời gian theo dõi 9 tháng và nhiệt độ 5°C ± 3°C trong thời gian theo dõi 12 tuần Nghiên cứu thúc đẩy nhanh ở các nhiệt độ 25°C ± 2°C và 37°C ± 2°C cho thấy thời gian lưu trữ hông quá 4 tuần. Tuổi thọ của VXMC ho gà vơ bào quốc gia RaP01 được dự đốn là trên 10 n m ở nhiệt độ bảo quản -40°C ± 2°C.
4.2. KIẾN NGHỊ
(1) Giám sát ho t tính miễn dịch và tính ổn định của mẫu chuẩn thơng qua q trình bảo quản và sử dụng. Thơng báo và phối hợp với NICVB tái chuẩn định ĐVMD hi c bất kỳ sự thay đổi nào c ảnh hưởng đến chất lượng của mẫu chuẩn.
(2) Nghiên cứu mở rộng mục đích sử dụng mẫu chuẩn RaP01 trong thử nghiệm huyết thanh học (Mouse Immunogenicity Test - MIT), một phương pháp đánh giá tính sinh miễn dịch của vắc xin ho gà vô bào c thể thay thế cho thử nghiệm thử thách trên chuột.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1. Nguyễn Thị Lan Phương 2008, Xây dựng phương pháp đánh giá
kháng nguyên ngoại và nội độc tố trong vắc xin ho gà - Đề xuất tiêu chuẩn sản xuất vắc xin ho gà an toàn cao tại Viện Vắc xin Nha Trang,
Luận án tiến s y học.
2. Đặng Đức Tr ch và cộng sự 1992 Vi sinh vật y học, Nhà xuất bản y học Hà Nội tr 97-101.
3. Lê V n Phủng 2009 Vi khuẩn y học, Nhà xuất bản giáo dục Việt Nam tr. 350-353.
4. Lê V n Hiệp, 2004, Công nghệ sản xuất vắc xin ho gà, Miễn dịch và
công nghệ Nhà xuất bản y học Hà Nội.
5 John B.Bruss and George R.Siber, 1999, Protective effects of pertussis immunoglobulin (P-IGIV) in the aerosol chellenge model, Clinical and
diagnostic laboratory immunology, pp. 464-470.
6. Biken-JICA, Text book of Diphtheria – Pertussis – Tetanus combined vaccine, Biological products technology course 6/1992-3/1993.
7. WHO, 1993, The immunological basis for Immunization series – modul
4: Pertussis, WHO/EPI/GEN93.14.
8. WHO, 2004, Global Immunization data, pp. 1-3.
9. Viện Vệ sinh Dịch Tễ Trung Ương và Cục Y Tế Dự phòng Niên giám thống ê bệnh truyền nhiễm n m 2010.
10. Bộ Y tế, 2015, Niên giám thống ê bệnh truyền nhiễm.
11. WHO, 2020, Progress Towards Global Immunization Goals - 2019:
Summary presentation of key indicators.
12. Granstrom M., 2011, The History of Pertussis Vaccination: From Whole -Cell to Subunit Vaccines, pp. 73-82.
13. World Health Organization, 2013, Expert Committee on Biological
Standardization, WHO TRS 979, annex 4, pp. 11-22.
14. John B.Bruss and George R.Siber, 1999, Protective effects of pertussis immunoglobulin (P-IGIV) in the aerosol chellenge model, Clinical and
diagnostic laboratory immunology, pp. 464-470.
15. World Health Organization, 2011, WHO manual for the Establishment of
national and other secondary standards for vaccines. WHO_IVB_11.03 _eng.pdf.
16. World Health Organization, 2006, Guidelines on stability evaluation of
vaccines, WHO TRS No. 962 annex 3.
17. ECBS Expert Committee on Biological Standardization, 2015,
Guidelines on the stability evaluation of vaccines for use under extended controlled temperature conditions, Geneva.
18. World Health Organization, 2016, Guidelines on stability evaluation of
vacciens for use under extended controlled temperature conditions,
WHO TRS No. 999 annex 5, WHO Geneva.
19. Đỗ Khánh Linh, 2016, Xác định tính khả dụng của Vắc xin bạch hầu đông
khô RD6 dự tuyển mẫu chuẩn Quốc gia, Luận v n Th c s Công nghệ sinh
học.
20. Đoàn Hữu Thiển, Sản xuất và đánh giá chất lượng vắc xin mẫu chuẩn quốc gia ho gà vô bào Tạp chí Khoa hoc Kiểm định Vắc xin và Sinh
PHỤ LỤC
Phụ lục 1: Quyết định cho phép sử dụng vắc xin mẫu chuẩn quốc gia
Phụ lục 2. Hướng dẫn sử dụng vắc xin mẫu chuẩn ho gà vô bào lần thứ nhất,