Cỏc kỹ thuật hỗ trợ sinh sản đó được sử dụng từ nhiều năm nay. Cú nhiều phương phỏp lọc rửa tinh trựng nhưng tựy thuộc vào mẫu tinh trựng và mục đớch sử dụng mà lựa chọn phương phỏp nào.
1.3.2.1. Phương phỏp bơi lờn (swim-up)
Phương phỏp này đó được đưa vào sử dụng từ những năm 1980 và chỉ
dựng với những mẫu tinh dịch bỡnh thường. - Nguyờn tắc.
Với phương phỏp đặt mụi trường bờn trờn tinh dịch, sau một thời gian tinh trựng cú khả năng thoỏt khỏi lớp tinh dịch ở phớa dưới để bơi lờn bề mặt thoỏng của mụi trường. Những tinh trựng này sẽ được thu nhận và sử dụng trong điều trị vụ sinh.
- Mụi trường dựng để lọc rửa:
Cú thể dựng Ham’s F10 1X hoặc IVF. Một số phương phỏp bơi lờn sử
cú acid hyaluronic 1mg/ml mụi trường nuụi cấy. So với phương phỏp bơi lờn cổ điển, phương phỏp sử dụng mụi trường cú acid hyaluronic trực tiếp từ tinh dịch đó ly giải cho tỷ lệ tinh trựng di động cao hơn đỏng kể. Tỷ lệ cú thai lõm sàng ở cỏc trường hợp IVF cũng cao hơn. Tuy nhiờn, acid hyaluronic tinh khiết cao cú giỏ rất đắt.
- Điều kiện thực hiện:
+ Thể tớch xuất tinh > 2ml. + Độ nhớt khụng cao.
+ Số lượng tinh trựng di động: >10 triệu tinh trựng di động. + Độ di động: A+B > 50% hoặc A > 20%.
- Ưu điểm:
+ Đơn giản, dễ làm, rẻ tiền.
+ Tinh trựng thu được cú chất lượng cao (>90% tinh trựng di động). + Tinh trựng thu được cú tỷ lệ hỡnh dạng bỡnh thường cao, ớt lẫn chất cặn và tế bào khỏc.
- Nhược điểm:
+ Chỉ ỏp dụng được với những mẫu tinh trựng tương đối tốt. + Khụng thu được hết số tinh trựng di động.
- Phương phỏp thực hiện:
+ Cho vào mỗi ống nghiệm (Loại 14ml – đỏy nhọn) 1,5ml mụi trường nuụi cấy.
+ Cho một 1ml tinh dịch đó ly giải thật nhẹ nhàng xuống dưới đỏy lớp mụi trường.
+ Đặt ống nghiệm trong tủ cấy 45 phỳt – 60 phỳt, nghiờng 450.
+ Dựng pipette Pasteur hỳt khoảng 0,7-1 ml mụi trường trờn cho vào ống nghiệm 5ml đó cú sẵn 2ml mụi trường nuụi cấy, trộn đều.
+ Hỳt bỏ phần mụi trường phớa trờn, để lại 0,3-0,4ml cặn.
+ Trộn đều phần cặn, lấy 1 giọt cho vào buồng đếm kiểm tra độ di động và mật độ.
+ Phần cũn lại cú thể sẵn sàng thực hiện kỹ thuật.
1.3.2.2. Phương phỏp thang nồng độ.
Phương phỏp này được ỏp dụng trờn thế giới từ những năm 1980. - Nguyờn tắc:
Cỏc dung mụi percoll ở cỏc nồng độ khỏc nhau cú chức năng lọc, loại bỏ cỏc tinh trựng chết, dị dạng, di động kộm và cỏc thành phẩn trong tinh dịch. Phần tinh trựng lọc được, rửa 2 lần với mụi trường cấy để loại bớt percoll trong mụi trường cấy.
- Mụi trường lọc rửa:
Một thời gian dài Percoll được sử dụng nhiều trong cỏc kỹ thuật hỗ trợ
sinh sản. Trong Percoll cú những hạt silic bao bọc bởi polyvinylpyrrolidone (PVP). Đến thỏng 10 năm 1996, người ta khụng sử dụng Percoll nữa vỡ phỏt hiện trong đú cú cỏc chất độc cú thể làm thay đổi màng tinh trựng và làm giảm khả năng thụ tinh của tinh trựng. Vỡ vậy, rửa tinh trựng sau tỏch tinh trựng cú sử dụng Percoll là điều rất cần thiết. Rửa tinh trựng cần phải ly tõm
và tinh trựng lại chịu ảnh hưởng của ROS. Cỏc sản phẩm thay thế cho Percoll
được giới thiệu trờn thị trường từ giữa thế kỷ 19 và được sử dụng rộng rói hơn là IxaPrep (Medicult, Denmark), Silselect (Fertipro, Belgium), Isolate (USA). Khỏc với Percoll, đú là những hạt silic được bọc bởi silane cú độc tớnh thấp. Tất cả những sản phẩm thay thế này khụng gõy hại và được sử dụng cho người trờn lõm sàng.
- Điều kiện thực hiện:
+ Mật độ tinh trựng di động 5-20 triệu/ml
+ Độ nhớt cao khụng thể thực hiện bằng swim-up. - Ưu điểm:
+ Thu được tối đa số tinh trựng di động.
+ Thực hiện được với những mẫu tinh trựng yếu. - Nhược điểm:
Khả năng chọn lọc khụng cao nờn tinh trựng thu được yếu so với phương phỏp thang nồng độ.
- Cỏch thực hiện:
+ Pha cỏc dung mụi percoll đẳng trương 95% và 47,5%
+ Cho 2 lớp dung mụi percoll 95% và 47,5% vào ống nghiệm: mỗi lớp 1ml, lớp 95% ở dưới
+ Cho khoảng 1,5ml tinh dịch lờn trờn 2 lớp percoll thật nhẹ nhàng + Ly tõm 1500 vũng/ 1’ trong 15 phỳt
+ Giữ lại 0,5ml ở đỏy, cho vào ống nghiệm mới + Pha với 2ml mụi trường mới
+ Ly tõm 1000 vũng/1’trong 15 phỳt.
+ Hỳt bỏ lớp mụi trường ở trờn, chừa lại khoảng 0,4 – 0,5ml + Trộn đều, lấy 1 giọt cho vào buồng đếm kiểm tra
Phương phỏp thang nồng độ.
1.3.2.3. Phương phỏp dựng Nicodenz.
Với những mẫu tinh trựng quỏ yếu, người ta dựng Nicodenz thay cho Percol với từ 3 đến 5 lớp, hiệu quả đạt được sẽ cao hơn.
Cú nhiều phương phỏp lọc rửa nhưng hiện nay 2 phương phỏp được dựng nhiều phương phỏp bơi lờn và phương phỏp thang nồng độ. Theo tiờu chuẩn đỏnh giỏ của WHO tỷ lệ bỡnh thường về hỡnh dạng sau chuẩn bị bằng 2 phương phỏp Swim-up và Gradient là như nhau tuy nhiờn phương phỏp Gradient trờn hệ đệm Percoll thu được lượng tinh trựng cũn nguyờn vẹn về
DNA cao hơn.
Năm 1988 Lalich và cộng sự đó nghiờn cứu và phõn tớch hai phương phỏp lọc rửa tinh trựng Swim-up và Gradient kết quả cho thấy khụng cú sự
khỏc nhau về tỷ lệ cú thai giữa hai phương phỏp này [44]. Theo nghiờn cứu của Đào Thị Thỳy Phượng năm 2004, phương phỏp bơi lờn và thang nồng độ đều cú khả năng loại bỏ hoàn toàn cỏc mảnh vụn trong tinh dịch. Chất lượng tinh trựng được cải thiện nhiều sau lọc rửa. Tuy nhiờn, mật độ tinh trựng sau lọc rửa bằng phương phỏp thang nồng độ cao hơn so với phương phỏp bơi lờn nhưng phương phỏp bơi lờn lại thu được tỷ lệ tinh trựng cú hỡnh thỏi bỡnh thường cao hơn [20]. Ly tõm Tinh dịch và mụi trường Phần dịch Phần lắngcặn Hỳt bỏ dịch nổi Trộn với mụi trường