KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.4.3.Kết quả định lượng Cyfra21-1 trong các mẫu huyết thanh do bệnh viện Bạch Mai cung cấp
viện Bạch Mai cung cấp
Ngoài những mẫu huyết thanh của bệnh viện Lao_Phổi trung ương cung cấp, chúng tôi còn tiến hành chạy Real-time PCR với các mẫu huyết thanh và
kháng nguyên do bệnh viện Bạch Mai cung cấp.
Các mẫu kháng nguyên và huyết thanh cần phân tích được pha loãng 100 lần trước khi chạy Real-time PCR.
Kết quả xác định hàm lượng Cyfra 21-1 trong các mẫu huyết thanh và kháng nguyên được trình bày ở bảng 5 và hình 17:
Viện Đại học Mở Hà Nội Khoa CNSHHình 17: Kết quả định lượng kháng nguyên Cyfra 21-1 trong 41 các mẫu huyết thanh do bệnh viện Bạch Mai cung cấp
Mẫu Nơi cung cấp Giá trị Cp Nồng độ kháng thể Nồng độ Cyfra 21-1 (ng/ml) HT1 BV Lao_Phổi 29,72 1.11.105 83 HT2 nt 29,61 1.24.105 92,9 HT3 nt 29,58 1,28.105 95,9 HT4 nt 30,97 3,07.104 22,9 HT5 BV Bạch Mai 36,07 3,58.105 7,2 HT6 nt >40,00 > 1,31.104 <0,26 HT7 nt >40,00 > 1,31.104 <0,26 HT8 nt 37,38 1,37.105 2,7 HT9 nt 35,14 7,37.105 15,0 HT10 nt 36,88 1,08.105 2,2 HT11 nt 35,20 7,03.105 14,1 HT12 nt 36,20 3,23.105 6,5 PBS >40,00 > 1,31.104 <0,26
KN1 nt 35,82 4,36.105 8,7 KN2 nt >40,00 > 1,31.104 <0,26 KN3 nt 36,06 3,63.105 7,3 KN4 nt 36,83 1,96.105 3,9 KN5 nt 36,22 3,19.105 6,4 H2O _ _ _
Bảng 5: Kết quả định lượng Cyfra 21-1 trong các mẫu phân tích
Dựa vào các phân tích kết quả ở trên cũng như dựa vào đồ thị phản ứng. Chúng tôi có nhận thấy, các mẫu đều có tín hiệu huỳnh quang vượt ngưỡng ở chu kỳ khá cao. Trong số các mẫu huyết thanh và kháng nguyên này, thì mẫu HT9 có chu kỳ vượt ngưỡng sớm nhất Cp = 35,14 với nồng độ kháng nguyên Cyfra 21-1
tương ứng là 15,0ng/ml. Ngoài ra, còn có mẫu HT11 cúng có chu kỳ vượt ngưỡng khá sớm Cp = 35,20 với nồng độ kháng nguyên Cyfra 21-1 tương ứng là
14,1. Cả hai mẫu huyết thanh này đều có nồng độ kháng nguyên Cyfra 21-1 cao hơn mức cho phép lưu thông trong máu theo nghiên cứu của P.P.Mumbarkar (3,3ng/mll). Từ những biện luận ở trên, chúng tôi cho rằng mẫu HT9 và HT11 có biểu biện của bệnh ung thư phổi ở giai đoạn sớm. Và để có kết quả chính xác nên
tiến hành các xét nghiệm cần thiết để đưa ra được phác đồ điều trị hợp lý nhất. Mẫu HT1 có Cp = 35,56 và nồng độ Cyfra 21-1 là: 10,7; mẫu HT2 có Cp = 35,92 và nồng độ Cyfra 21-1 là: 8,1; mẫu HT5 có Cp = 36,07 và nông độ Cyfra 21-1 là: 7,2; mẫu HT12 có Cp = 36,20 và nồng độ Cyfra 21-1 là: 6,5; mẫu KN1 có Cp = 35,82 và nồng độ Cyfra 21-1 là: 8,7; mẫu KN3 có Cp = 36,06 và nồng độ Cyfra 21-1 là: 7,3; mẫu KN5 có Cp = 36,22 và nồng độ Cyfra 21-1 là: 6,4; mẫu HT4 có
Cp = 36,49 và nồng độ Cyfra 21-1 là: 5,1. Các mẫu trên đều có nồng độ Cyfra 21-1 cao hơn mức mà nghiên cứu của P.P.Mumbarkar đưa ra (3,3ng/ml) nên cần
được theo dõi kỹ.
Dựa vào bảng kết quả ở trên, chúng tôi nhận thấy với phương pháp này chúng tôi có thể định lượng được nồng độ kháng nguyên Cyfra 21-1 trong huyết thanh ở
nồng độ chính xác ở mức nanogram (Ví dụ như: Mẫu HT3 có nồng độ kháng nguyên Cyfra 21-1 là: 1,005ng/ml và mẫu HT6, HT7 có nồng độ Cyfra 21-1 <o,26ng/ml). Từ những kết quả thu được, chúng tôi nhận thấy phương pháp định
lượng kháng nguyên mà chúng tôi sử dụng có độ nhạy và độ chính xác cao.
Kết luận
- Đã thu nhận được kháng thể phage có khả năng nhận biết và gắn kết với kháng nguyên Cyfra 21-1 bằng kỹ thuật phage display.
- Đã xây dựng được phương pháp định lượng kháng nguyên bằng kỹ thuật Real-time PCR và kỹ thuật phage display.
- Đã ứng dụng kỹ thuật định lượng kháng nguyên để xác định nồng độ Cyfra21-1 ở một số mẫu huyết thanh nhận được từ các bệnh Viện.
Kiến nghị
- Tiếp tục nghiên cứu hoàn thiện quy trình để Kit chẩn đoán bệnh ung thư phổi sớm được triển khai trong thực tiễn.