KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.3.Kết quả ELISA
ELISA là phương pháp được sử dụng để xác định định tính kháng nguyên có trong mẫu. Trong nghiên cứu này, kháng nguyên Cyfra 21-1 với 4 nồng độ
khác nhau đã được biết trước và một giếng đối chứng H2O được cố định trên khay ELISA 96 giếng, ủ mỗi giếng với phức hệ kháng thể- DNA. Các phức hệ kháng thể-DNA sẽ gắn với kháng nguyên đích thông qua kháng thể biểu lộ trên
bề mặt phage.
Theo lý thuyết, kháng thể có ái lực cao với kháng nguyên sẽ cho giá trị OD450 cao hơn. Trong nghiên cứu này, phức hệ kháng thể-DNA được sử dụng là đơn dòng vì vậy ái lực với kháng nguyên Cyfra 21-1 là như nhau ở các giếng. Do
đó, giá trị OD sẽ có ý nghĩa xác định bán định lượng nồng độ kháng nguyên Cyfra 21-1.
Như vậy, giếng nào trên khay ELISA có nồng độ kháng nguyên Cyfra 21- 1 ban đầu cao hơn sẽ tương đương với với lượng kháng thể bắt cặp nên enzyme từ kháng thể cộng hợp oxy hóa cơ chất TMB tạo thành chất có mầu xanh đậm hơn. Do đo, khi chúng ta dừng phản ứng bằng H2SO4 dung dịch sẽ chuyển sang mầu vàng đậm hơn so với các mẫu còn lại, và mẫu này cũng sẽ cho kết quả OD
cao hơn.
Viện Đại học Mở Hà Nội Khoa CNSH33 Hình 13: Kết quả bán định lượng Cyfra 21-1
Mẫu 1: 2.106, mẫu 2: 2.105, mẫu 3: 2.104, mẫu 4: 2.103, mẫu 5: Đối chứng
Tuy nhiên, dựa vào kết quả ELISA chúng ta chỉ biết được kháng nguyên Cyfra 21-1 có tồn tại trong các mẫu hay không, và so sánh được mẫu nào có nồng độ kháng nguyên Cyfra 21-1 nhiều hơn. Chính vì vậy, để xác định được một cách chính xác nồng độ kháng nguyên Cyfra trong các mẫu, chúng tôi đã sử
dụng phương pháp Real-time PCR.