3. Nội dung nghiên cứu
1.5.2. Các kỹ thuật sinh học phân tử
Sự hiểu biết gen của lớp I (1980) và lớp II (1982) cũng ngày càng sâu sắc hơn giúp cho giải thích được ADN bổ sung và bộ gen (genomique) cho phép chúng ta sử dụng cách thứ hai của HLA. Người ta có thể sử dụng cách này trong phản ứng lai với ADN của bộ gen để nghiên cứu tính đa dạng của loci hay của allen. Kỹ thuật sinh học phân tử đầu tiên được áp dụng trong định nhóm HLA dựa trên sự phân tích số lượng và kích thước đoạn ADN lai với sond đặc hiệu của HLA sau khi nó bị cắt bởi enzym giới hạn (RFLP). Đây là kỹ thuật định nhóm HLA được sử dụng chủ yếu trong Workshop - HLA 1997 và cho thấy có nhiều tiến bộ quan trọng, nhất là trong xác định và nghiên cứu tính đa dạng của lớp II trong ghép cơ quan và tổ chức. Kỹ thuật RFLP cũng lần đầu tiên cho phép xác định HLA-DP mà không cần đến kỹ thuật tế bào và giải thích những hiện tượng không giống nhau của DP trong nuôi cấy hỗn hợp hai quần thể tế bào (culture mixte) [15]. Nó cũng còn là một cuộc cách mạng về mối liên quan giữa HLA và bệnh, miễn dịch kháng bạch cầu giữa mẹ và con.
Kỹ thuật phản ứng chuỗi khuyếch đại gen (polymerase chain reaction - PCR) là một cuộc cách mạng cho mọi nghiên cứu về gen, giải trình tự gen và nhất là nghiên cứu về tính đa dạng. Kỹ thuật này có độ nhạy cao, đặc hiệu và đơn giản trong những nghiên cứu về gen. Điều quan trọng trong là sự chọn lựa đoạn mồi sao cho đạt được những yêu cầu về tính đặc hiệu. Dựa trên những nguyên tắc chính mà người ta tạm chia nó làm 3 nhóm phương pháp như sau:
Phản ứng chuỗi polymerase với những oligosondes đặc hiệu đánh dấu phóng xạ hoặc enzym của allen hay trình tự gen (PCR - SSO: Polymerase Chain Reaction -Sequence Specific Oligoprobes)
Kỹ thuật PCR cho phép đánh dấu sự tiến bộ trong xác định tính đa dạng của gen HLA lớp II và nhận biết đựợc chính xác những allen khác nhau của
DRB1 và DPB1. Tính đa dạng của lớp I cũng gặp những khó khăn khi sử dụng kỹ thuật PCR vì lý do giàu pseudogens cùng khuyếch đại trong vùng của lớp I.