Nghiên cứu vi khuẩn gây bệnh:

đối tượng và phương pháp nghiên cứu 2.1 Đối tượng nghiên cứu:

2.2.4.2. Nghiên cứu vi khuẩn gây bệnh:

+ Phương pháp lấy mẫu bệnh phẩm:

Địa điểm tại Khoa xét nghiệm (BV Mắt TƯ): lấy mẫu tiết tố kết mạc phết lam kính vô trùng và tế bào kết mạc bằng nạo kết mạc: lộn mi trên, dùng một que dẹt vô trùng để nạo nhẹ kết mạc, khi nạo kết mạc phải hơi trắng ra, tránh chảy máu nhiều [13].

+ Tiến hành ngay soi tươi:

Sau khi tiết tố kết mạc đã được phết lam kính, nhỏ giọt nước muối sinh lý (Natri chloride 0,9%), đặt lên trên một phiến kính và soi bằng kính hiển vi, sẽ thấy được hình dạng, sự chuyển động của vi khuẩn.

+ Tiến hành soi trực tiếp:

- Nhuộm gram (xác định được hình dạng, cách sắp xếp và phân loại vi khuẩn gram âm hay gram dương):

 Cho thuốc tím gentian đầy tiêu bản, để 1 phút, rửa nhẹ dưới vòi nước cho sạch màu thừa dính trên lam.

 Nhá tiếp dung dịch lugol (iod) lên tiêu bản, để 1 phút và rửa.

 Nhá dung dịch tẩy màu và nghiêng tiêu bản để dung dịch chảy đi đến khi màu tím không còn bị nhạt đi nữa thì rửa.

 Nhá dung dịch Safranin, để 1phút, rửa và thấm khô.

 Soi bằng kính hiển vi: Vi khuẩn gram (+) bắt màu tím, vi khuẩn gram (-) bắt màu hồng.

- Nhuộm giemsa (thường để xác định chlamydia):

 Ngâm tiêu bản trong dung dịch giemsa mới pha, để 1 giê.  Rửa qua bằng Ethanol và thấm khô.

 Soi kính hiển vi: Bạch cầu có bào tương bắt màu xanh nhạt và nhân màu đỏ tía; các hạt trung tính bắt màu tím hồng; các hạt ưa axit bắt màu tím nhạt; các thể vùi chlamydia, vi khuẩn bắt màu tím.

+ Nuôi cấy vi khuẩn: Lấy chất tiết kết mạc 0,1l, cấy vào môi trường thạch phân lập thích hợp: canh thang não tim, thạch máu và thạch chocolate. Theo dõi từ 24–48 giờ, ở nhiệt độ350C (20C). Mẫu bệnh phẩm có kết quả nuôi cấy vi khuẩn dương tính sẽ tiếp tục phân lập vi khuẩn, bằng bộ định danh API của hãng BIO-MERIEUX (France), xác định vi khuẩn gây bệnh và làm thử nghiệm kháng sinh đồ (kỹ thuật khoanh giấy khuếch tán) với một số kháng sinh được sử dụng tại Bệnh viện Mắt Trung ương.

+ Ghi nhận kết quả xét nghiệm vi sinh vật và tế bào học kết mạc:

- Kết quả soi tươi, soi trực tiếp (có kết quả ngay sau 1 giê, trong ngày khám bệnh).

- Kết quả nuôi cấy và tế bào học kết mạc (có sau 3 ngày).