Dung môi pha mẫu
- Cân chính xác 2,67 g Na2HPO4 vào bình 1 lít, sau đó định mức thành 1000 mL bằng nước cất 2 lần. Dùng máy pH điều chỉnh pH = 3 bằng axit H3PO4 đặc nồng độ 85 % ta được dung dịch đệm photphat có pH = 3.
- Lấy chính xác 50,0 mL axetonitril cho vào bình định mức 250 mL, sau đó định mức bằng dung dịch đệm photphat (pH=3) vừa pha. Ta được dung dịch để pha mẫu là dung dịch đệm photphat và axetonitril tỉ lệ 80:20 về thể tích.
Dung dịch chuẩn gốc:
- Dung dịch B1 chuẩn: Cân chính xác 0,0100 g vitamin B1 cho vào bình định mức 100 mL sau đó cho thêm vào dung môi pha mẫu, rung siêu âm và định mức đến 100 mL. Ta được dung dịch vitamin B1 có nồng độ 100 (ppm). Từ dung dịch này ta pha loãng ra các nồng độ 28 (ppm); 24 (ppm); 20 (ppm); 18 (ppm); 14 (ppm); 10 (ppm); 4 (ppm); 2,8 (ppm); 2,2 (ppm); 1,6 (ppm); 1,4 (ppm); 1,2 (ppm); 0,8 (ppm); 0,4 (ppm).
- Dung dịch B6 chuẩn: Cân chính xác 0,0100 g vitamin B6 cho vào bình định mức 100 mL sau đó cho thêm vào dung môi pha mẫu, rung siêu âm và định mức đến 100 mL. Ta được dung dịch vitamin B6 có nồng độ 100 (ppm). Từ dung dịch này ta pha loãng ra các nồng độ 28 (ppm); 24 (ppm); 20 (ppm); 18 (ppm); 14 (ppm); 10 (ppm); 4 (ppm); 2,8 (ppm); 2,2 (ppm); 1,6 (ppm); 1,4 (ppm); 1,2 (ppm); 0,8 (ppm); 0,4 (ppm).
- Dung dịch B12 chuẩn: Cân chính xác 0,0100 g vitamin B12 cho vào bình định mức 100 mL sau đó cho thêm vào dung môi pha mẫu, rung siêu âm và định mức đến 100 mL. Ta được dung dịch vitamin B12 có nồng độ 100 (ppm). Từ dung dịch này ta pha loãng ra các nồng độ 28 (ppm); 24 (ppm); 20 (ppm); 18 (ppm); 14 (ppm); 10 (ppm); 4 (ppm); 2,8 (ppm); 2,2 (ppm); 1,6 (ppm); 1,4 (ppm); 1,2 (ppm); 0,8 (ppm); 0,4 (ppm); 0,05 (ppm); 0,01 (ppm).
- Dung dịch mẫu giả: Lấy lần lượt 10 mL dung dịch B1 có nồng độ 10 (ppm); 10 mL dung dịch B6 có nồng độ 10 (ppm) và 10 mL dung dịch B12 có nồng độ 4 (ppm) cho vào bình định mức 50 mL và định mức thành 50mL bằng dung môi pha mẫu được dung dịch chuẩn chứa hỗn hợp vitamin B1 có nồng độ 2 (ppm), vitamin B6 có nồng độ 2 (ppm) và vitamin B12 có nồng độ 0,8 (ppm).
Xử lí mẫu sữa
- Đối với mẫu sữa bột trẻ em: Cân lượng chính xác 5,0000 gam sữa bột vào ống nhựa ly tâm (50 mL). Thêm 25 mL dung môi pha mẫu. Lắc đều, rung siêu âm, sau đó ly tâm gạn lấy dung dịch đem lọc qua giấy lọc và màng lọc có kích thước 0,45 μm trước khi bơm vào hệ thống HPLC.
- Đối với mẫu sữa tươi: Hút chính xác 15 mL sữa tươi vào ống nhựa li tâm (50 mL), thêm dung môi pha mẫu thành 25 mL. Lắc đều, rung siêu âm, ly tâm gạn lấy dung dịch đem lọc qua giấy lọc và màng lọc có kích thước 0,45 μm trước khi bơm vào hệ thống HPLC.
Dung môi pha động:
- Kênh A: Cân chính xác 2,6700 g Na2HPO4 cho vào bình 1 lít, sau đó định mức thành 1000 mL bằng nước cất 2 lần. Dùng máy pH điều chỉnh pH = 3 bằng axit H3PO4 đặc nồng độ 85 % ta được dung dịch đệm photphat có pH = 3. Dung dịch đệm photphat trong bình 1000 mL được lọc qua màng lọc 0,45 μm trước khi đưa vào hệ thống HPLC .
- Kênh B: đưa vào kênh B của hệ thống máy HPLC dung dịch axetonnitril của merck.