bột Dielac Alpha Gold
Cân lượng chính xác 5,0000 gam sữa bột vào ống nhựa ly tâm (50mL). Thêm 25 mL dung môi pha mẫu. Lắc đều, rung siêu âm, sau đó ly tâm gạn lấy dung dịch sau đó đem lọc qua giấy lọc và màng lọc có kích thước 0,45 μm trước khi bơm vào hệ thống HPLC.
Bảng 3.30. Kết quả phân tích sữa bột Dielac Alpha Gold
Số thứ tự 1 2 3 4
Lượng cân (g) 5,0000 5,0000 5,0000 5,0000
Vitamin B1
Hàm lượng lý thuyết (ppm) 1,260 1,260 1,260 1,260
Diện tích pic (mAuxphút) 120635 122458 121223 121811
Hàm lượng xác định được
(ppm) 1,251 1,282 1,261 1,271
Số liệu thống kê X = 1,266 S = 0,013 %RSD = 1,03%
Vitamin B6
Hàm lượng lý thuyết (ppm) 1,500 1,500 1,500 1,500
Diện tích pic (mAuxphút) 123628 126192 125318 123978
Hàm lượng xác định được
(ppm) 1,517 1,561 1,546 1,523
Số liệu thống kê X = 1,537 S = 0,020 RSD = 0,79%
Vitamin B12
Hàm lượng lý thuyết (ppm) 0,003 0,003 0,003 0,003
Diện tích pic (mAuxphút) DGH DGH DGH DGH
Hàm lượng xác định được (ppm)
DGH DGH DGH DGH
Hình 3.26. Biểu đồ thể hiện sự chênh lệch về hàm lượng giữa lí thuyết và thực tế của các vitamin trong sữa bột Dielac Alpha Gold
Nhận xét: Kết quả phân tích cho thấy hàm lượng do nhà sản xuất công
bố và hàm lượng vitamin B1, B6 và B12 xác định được khác nhau không đáng kể. Riêng với vitamin B12 trong sữa có hàm lượng rất nhỏ dưới giới hạn phát hiện của phương pháp. Kết quả trên cho thấy độ lệch chuẩn tương đối %RSD vitamin B1 và B6 lần lượt là 1,03% và 0,79% . Điều đó chứng tỏ phương pháp nghiên cứu có đủ tin cậy để phân tích sữa bột Dielac Alpha Gold trong thực tế.
Bảng 3.31. Kết quả phân tích sữa bột Dielac Grow Plus Số thứ tự 1 2 3 4 Lượng cân (g) 5,000 5,000 5,000 5,000 Vitamin B1 Hàm lượng lý thuyết (ppm) 2,200 2,200 2,200 2,200
Diện tích pic (mAuxphút) 177294 197586 181232 178526 Hàm lượng xác định được (ppm) 2,215 2,254 2,282 2,236 Số liệu thống kê X = 2,247 S = 0,028 %RSD = 1,25% Vitamin B6 Hàm lượng lý thuyết (ppm) 2,2 2,2 2,2 2,2
Diện tích pic (mAuxphút) 166753 164130 168909 165995 Hàm lượng xác định được (ppm) 2,257 2,212 2,294 2,244 Số liệu thống kê X = 2,252 S = 0,033 RSD = 1,47% Vitamin B12 Hàm lượng lý thuyết (ppm) 0,004 0,004 0,004 0,004
Diện tích pic (mAuxphút) DGH DGH DGH DGH
Hàm lượng xác định được (ppm)
DGH DGH DGH DGH
Hình 3.27. Biểu đồ thể hiện sự chênh lệch về hàm lượng giữa lí thuyết và thực tế của các vitamin trong sữa bột Dielac Grow Plus
Nhận xét: Kết quả phân tích cho thấy hàm lượng do nhà sản xuất công
bố và hàm lượng vitamin B1, B6 và B12 xác định được khác nhau không đáng kể. Riêng với vitamin B12 trong sữa có hàm lượng rất nhỏ dưới giới hạn phát hiện của phương pháp. Kết quả trên cho thấy độ lệch chuẩn tương đối %RSD vitamin B1 và B6 lần lượt là 1,25% và 1,47% . Điều đó chứng tỏ phương pháp nghiên cứu có đủ tin cậy để phân tích sữa bột Dielac Grow Plus trong thực tế.
3.3.2. Xác định vitamin B1, B6, B12 trong sữa tươi Dielac Grow Plus và sữa tươi Dielac Alpha Gold
Hút chính xác 15 mL sữa tươi vào ống nhựa li tâm (50mL), thêm dung môi pha mẫu thành 25 mL. Lắc đều, rung siêu âm, sau đó ly tâm gạn lấy dung dịch đem lọc qua giấy lọc và màng lọc có kích thước 0,45 μm trước khi bơm vào hệ thống HPLC.
Bảng 3.32. Kết quả phân tích sữa tươi Dielac Grow Plus 180 mL Số thứ tự 1 2 3 4 Thể tích sữa (mL) 15,0 15,0 15,0 15,0 Vitamin B1 Hàm lượng lý thuyết (ppm) 0,468 0,468 0,468 0,468
Diện tích pic (mAuxphút) 75021 76021 75197 74609 Hàm lượng xác định được (ppm) 0,475 0,492 0,478 0,468 Số liệu thống kê X = 0,478 S = 0,010 %RSD = 2,09% Vitamin B6 Hàm lượng lý thuyết (ppm) 0,668 0,668 0,668 0,668
Diện tích pic (mAuxphút) 74560 73220 74910 73394 Hàm lượng xác định được (ppm) 0,675 0,652 0,681 0,655 Số liệu thống kê X = 0,666 S = 0,014 RSD = 2,10% Vitamin B12 Hàm lượng lý thuyết (ppm) 0,004 0,004 0,004 0,004
Diện tích pic (mAuxphút) GDH GDH GDH GDH
Hàm lượng xác định
được (ppm) GDH GDH GDH GDH
Hình 3.28. Biểu đồ thể hiện sự chênh lệch về hàm lượng giữa lí thuyết và thực tế của các vitamin trong sữa tươi Dielac Grow Plus 180 mL
Nhận xét: Kết quả phân tích cho thấy hàm lượng do nhà sản xuất công
bố và hàm lượng vitamin B1, B6 và B12 xác định được khác nhau không đáng kể. Riêng với vitamin B12 trong sữa có hàm lượng rất nhỏ dưới giới hạn phát hiện của phương pháp. Kết quả trên cho thấy độ lệch chuẩn tương đối %RSD vitamin B1 và B6 lần lượt là 2,56% và 2,10% . Điều đó chứng tỏ phương pháp nghiên cứu có đủ tin cậy để phân tích sữa tươi Dielac Grow Plus 180 mL trong thực tế.
Bảng 3.33. Kết quả phân tích sữa tươi Dielac Alpha Gold 180mL Số thứ tự 1 2 3 4 Thể tích sữa (mL) 15,0 15,0 15,0 15,0 Vitamin B1 Hàm lượng lý thuyết (ppm) 0,668 0,668 0,668 0,668
Diện tích pic (mAuxphút) 86835 87364 87717 87188 Hàm lượng xác định được (ppm) 0,676 0,658 0,691 0,682 Số liệu thống kê X = 0,677 S = 0,014 %RSD = 2,07% Vitamin B6 Hàm lượng lý thuyết (ppm) 1,200 1,200 1,200 1,200
Diện tích pic (mAuxphút) 108302 109118 106146 110051 Hàm lượng xác định được (ppm) 1,254 1,268 1,217 1,284 Số liệu thống kê X = 1,256 S = 0,029 RSD = 2,31% Vitamin B12 Hàm lượng lý thuyết (ppm) 0,004 0,004 0,004 0,004
Diện tích pic (mAuxphút) GDH GDH GDH GDH
Hàm lượng xác định
được (ppm) GDH GDH GDH GDH
Hình 3.29. Biểu đồ thể hiện sự chênh lệch về hàm lượng giữa lí thuyết và thực tế của các vitamin trong sữa tươi Dielac Alpha Gold 180 mL
Nhận xét: Kết quả phân tích cho thấy hàm lượng do nhà sản xuất công
bố và hàm lượng vitamin B1, B6 và B12 xác định được khác nhau không đáng kể. Riêng với vitamin B12 trong sữa có hàm lượng rất nhỏ dưới giới hạn phát hiện của phương pháp. Kết quả trên cho thấy độ lệch chuẩn tương đối %RSD vitamin B1 và B6 lần lượt là 2,07% và 2,31% . Điều đó chứng tỏ phương pháp nghiên cứu có đủ tin cậy để phân tích sữa tươi Dielac Grow Gold 180 mL trong thực tế.
Các kết quả phân tích cho thấy hàm lượng do nhà sản xuất công bố và hàm lượng vitamin B1, B6 và B12 xác định được khác nhau không đáng kể. Riêng với vitamin B12 trong sữa có hàm lượng rất nhỏ dưới giới hạn phát hiện của phương pháp. Kết quả trên cho thấy độ lệch chuẩn tương đối %RSD của cả 3 chất phân tích hầu hết đều nhỏ hơn 1. Điều đó chứng tỏ phương pháp nghiên cứu có đủ tin cậy để phân tích mẫu thực tế.
Đối với vitamin B12, do hàm lượng trong sữa rất nhỏ, dưới giới hạn phát hiện của phương pháp nên không thể xác định được bằng phương pháp HPLC.
3.3.3. Xác định vitamin B1, B6, B12 trong sữa Dielac Grow Plus và sữa Dielac Alpha Gold theo phương pháp thêm chuẩn Dielac Alpha Gold theo phương pháp thêm chuẩn
3.3.3.1. Xác định vitamin B1, B6 và B12 trong sữa bột Dielac Alpha Gold bằng phương pháp thêm chuẩn
Cân chính xác 5,000 gam sữa bột Dielac Alpha Gold ứng với 0,0315 mg vitamin B1; 0,0375 mg vitamin B6 và 0,0750 μg vitamin B12. Hút chính xác lần lượt 5 mL vitamin B1, B6 hoặc B12 chuẩn với các nồng độ gốc như bảng 3.34; 3.35; 3.36 thêm vào các ống tương ứng, thêm dung môi pha mẫu cho tổng thể tích là 25 mL. Hòa tan và rung siêu âm sau đó đem li tâm gạn lấy dung dịch đem lọc qua giấy lọc và màng lọc có kích thước 0,45 μm.
Bảng 3.34. Bảng thêm chuẩn vitamin B1 trong sữa bột Dielac Alpha Gold
Mẫu 1 2 3 4 5
Khối lượng sữa bột (g) 5,0000 5,0000 5,0000 5,0000 5,0000 Thể tích vitamin B1 thêm vào (mL) - 5,0 5,0 5,0 5,0 Nồng độ vitamin B1 thêm vào (ppm) - 4,00 8,00 10,00 14,00
Thể tích dung môi pha mẫu (mL) 25,0 20,0 20,0 20,0 20,0 Nồng độ vitamin B1 sau khi pha (ppm) 1,26 2,06 2,86 3,26 4,06
Bảng 3.35. Bảng thêm chuẩn vitamin B6 trong sữa bột Dielac Alpha Gold
Mẫu 1 6 7 8 9
Khối lượng sữa bột (g) 5,0000 5,0000 5,0000 5,0000 5,0000 Thể tích vitamin B6 thêm vào (mL) - 5,0 5,0 5,0 5,0 Nồng độ vitamin B6 thêm vào (ppm) - 4,00 8,00 10,00 14,00
Thể tích dung môi pha mẫu (mL) 25,0 20,0 20,0 20,0 20,0 Nồng độ vitamin B6 sau khi pha (ppm) 1,50 2,30 3,10 3,50 4,30
Bảng 3.36. Bảng thêm chuẩn vitamin B12 trong sữa bột Dielac Alpha Gold
Mẫu 1 10 11 12 13
Khối lượng sữa bột (g) 5,0000 5,0000 5,0000 5,0000 5,0000 Thể tích vitamin B12 thêm vào (mL) - 5,0 5,0 5,0 5,0 Nồng độ vitamin B12 thêm vào (ppm) - 4,000 8,000 10,000 14,000
Thể tích dung môi pha mẫu (mL) 25,0 20,0 20,0 20,0 20,0 Nồng độ vitamin B12 sau khi pha (ppm) 0,003 0,803 1,603 2,003 2,803
Tiến hành chạy sắc ký lần lượt từng dung dịch theo điều kiện sắc ký đã chọn ở trên thu được kết quả như bảng 3.37.
Bảng 3.37. Kết quả phân tích sữa bột Dielac Alpha Gold theo phương pháp thêm chuẩn
STT
Nồng độ của vitamin trước khi thêm chuẩn
theo lí thuyết (ppm)
Nồng độ của vitamin thêm vào mẫu (ppm)
Nồng độ của vitamin xác định được sau khi thêm chuẩn theo thực
nghiệm (ppm) ReV (%) B1 B6 B12 B1 B6 B12 B1 B6 B12 1 1,26 1,5 0,003 - - - 1,281 1,512 DGH 2 1,26 1,5 0,003 0,80 - - 2,021 1,512 DGH 92,50 3 1,26 1,5 0,003 1,60 - - 2,861 1,512 DGH 98,75 4 1,26 1,5 0,003 2,00 - - 3,151 1,512 DGH 93,50 5 1,26 1,5 0,003 2,80 - - 3,861 1,512 DGH 92,14 6 1,26 1,5 0,003 - 0,80 - 1,281 2,302 DGH 98,82 7 1,26 1,5 0,003 - 1,60 - 1,281 3,092 DGH 98,36 8 1,26 1,5 0,003 - 2,00 - 1,281 3,492 DGH 99,12 9 1,26 1,5 0,003 - 2,80 - 1,281 4,272 DGH 98,74 10 1,26 1,5 0,003 - - 0,80 1,281 1,512 0,705 87,75 11 1,26 1,5 0,003 - - 1,60 1,281 1,512 1,412 88,06 12 1,26 1,5 0,003 - - 2,00 1,281 1,512 1,858 92,75 13 1,26 1,5 0,003 - - 2,80 1,281 1,512 2,452 86,50
Nhận xét: Kết quả phân tích ở bàng 3.37 cho thấy hàm lượng do nhà sản xuất công bố và hàm lượng vitamin B1, B6 và B12 xác định được khác nhau không đáng kể. Kết quả trên cho thấy thu hồi của B1 từ 92,14% đến 98,75%, của B6 từ 98,36% đến 99,12%; của B12 từ 86,50% đến 92,75%. Điều đó chứng tỏ phương pháp nghiên cứu có đủ tin cậy để phân tích sữa bột Dielac Alpha Gold trong thực tế.
3.3.3.2. Xác định vitamin B1, B6 và B12 trong sữa bột Dielac Grow Plus bằng phương pháp thêm chuẩn
Cân chính xác 5,000 gam sữa bột Dielac Grow Plus ứng với 0,0550 mg vitamin B1; 0,0550 mg vitamin B6 và 0,1100 μg vitamin B12. Hút chính xác lần lượt 5 mL vitamin B1, B6 hoặc B12 chuẩn với các nồng độ gốc như bảng 3.38; 3.39; 3.40 thêm vào các ống tương ứng, thêm dung môi pha mẫu cho tổng thể tích là 25 mL. Hòa tan và rung siêu âm sau đó đem li tâm gạn lấy dung dịch đem lọc qua giấy lọc và màng lọc có kích thước 0,45 μm.
Bảng 3.38. Bảng thêm chuẩn vitamin B1 trong sữa bột Dielac Grow Plus
Mẫu 1 2 3 4 5
Khối lượng sữa bột (g) 5,0000 5,0000 5,0000 5,0000 5,0000 Thể tích vitamin B1 thêm vào (mL) - 5,0 5,0 5,0 5,0 Nồng độ vitamin B1 thêm vào (ppm) - 4,00 8,00 10,00 14,00
Thể tích dung môi pha mẫu (mL) 25,0 20,0 20,0 20,0 20,0 Nồng độ vitamin B1 sau khi pha (ppm) 2,20 3,00 3,80 4,20 5,00
Bảng 3.39 Bảng thêm chuẩn vitamin B6 trong sữa bột Dielac Grow Plus
Mẫu 1 6 7 8 9
Khối lượng sữa bột (g) 5,0000 5,0000 5,0000 5,0000 5,0000 Thể tích vitamin B6 thêm vào (mL) - 5,0 5,0 5,0 5,0 Nồng độ vitamin B6 thêm vào (ppm) - 4,00 8,00 10,00 14,00
Thể tích dung môi pha mẫu (mL) 25,0 20,0 20,0 20,0 20,0 Nồng độ vitamin B6 sau khi pha (ppm) 2,20 3,00 3,80 4,20 5,00
Bảng 3.40. Bảng thêm chuẩn vitamin B12 trong sữa bột Dielac Grow Plus
Mẫu 1 10 11 12 13
Khối lượng sữa bột (g) 5,0000 5,0000 5,0000 5,0000 5,0000 Thể tích vitamin B12 thêm vào (mL) - 5,0 5,0 5,0 5,0 Nồng độ vitamin B12 thêm vào (ppm) - 4,000 8,000 10,000 14,000
Thể tích dung môi pha mẫu (mL) 25,0 20,0 20,0 20,0 20,0 Nồng độ vitamin B12 sau khi pha (ppm) 0,004 0,804 1,604 2,004 2,804
Tiến hành chạy sắc ký lần lượt từng dung dịch theo điều kiện sắc ký đã chọn ở trên thu được kết quả như bảng 3.41.
Bảng 3.41. Kết quả phân tích sữa bột Dielac Grow Plus theo phương pháp thêm chuẩn
STT
Nồng độ của vitamin trước khi thêm chuẩn theo lí thuyết
(ppm) Nồng độ của vitamin thêm vào mẫu (ppm) Nồng độ của vitamin xác định được sau khi thêm
chuẩn theo thực nghiệm (ppm) ReV (%) B1 B6 B12 B1 B6 B12 B1 B6 B12 1 2,200 2,200 0,004 - - - 2,261 2,252 DGH - 2 2,200 2,200 0,004 0,80 - - 2,990 2,252 DGH 91,35 3 2,200 2,200 0,004 1,60 - - 3,745 2,252 DGH 92,86 4 2,200 2,200 0,004 2,00 - - 4,055 2,252 DGH 89,77 5 2,200 2,200 0,004 2,80 - - 4.802 2,252 DGH 90,81 6 2,200 2,200 0,004 - 0,80 - 2,26 3,024 DGH 96,54 7 2,200 2,200 0,004 - 1,60 - 2,26 3,817 DGH 97,81 8 2,200 2,200 0,004 - 2,00 - 2,26 4,116 DGH 93,22 9 2,200 2,200 0,004 - 2,80 - 2,26 4,075 DGH 91,17 10 2,200 2,200 0,004 - - 0,80 2,26 2,252 0,703 87,38 11 2,200 2,200 0,004 - - 1,60 2,26 2,252 1,416 88,25 12 2,200 2,200 0,004 - - 2,00 2,26 2,252 1,861 92,85 13 2,200 2,200 0,004 - - 2,80 2,26 2,252 2,614 93,21
Nhận xét: Kết quả phân tích ở bàng 3.41 cho thấy hàm lượng do nhà sản xuất công bố và hàm lượng vitamin B1, B6 và B12 xác định được khác nhau không đáng kể. Kết quả trên cho thấy thu hồi của B1 từ 89,77% đến 92,86%, của B6 từ 91,17% đến 97,81%, của B12 từ 87,38% đến 93,21%. Điều đó chứng tỏ phương pháp nghiên cứu có đủ tin cậy để phân tích sữa bột Dielac Grow Plus trong thực tế.
3.3.3.3. Xác định vitamin B1, B6 và B12 trong sữa tươi Dielac Alpha Gold 180 mL bằng phương pháp thêm chuẩn
Hút chính xác 15 mL sữa tươi Dielac Alpha Gold ứng với 0,0117 mg vitamin B1; 0,0167 mg vitamin B6 và 0,0483 μg vitamin B12 cho vào ống nhựa li tâm (50 mL). Hút chính xác lần lượt 5 mL vitamin B1, B6 hoặc B12 chuẩn với các nồng độ gốc như bảng 3.42; 3.43; 3.44 lần lượt thêm vào các ống nhựa li tâm (50mL) chứa mẫu sữa tươi, thêm dung môi pha mẫu cho tổng thể tích là 25 mL. Hòa tan và rung siêu âm sau đó đem li tâm gạn lấy dung dịch đem lọc qua giấy lọc và màng lọc có kích thước 0,45 μm.
Bảng 3.42. Bảng thêm chuẩn vitamin B1 trong sữa tươi Dielac Alpha Gold
Mẫu 1 2 3 4 5
Thể tích sữa tươi (mL) 15,0 15,0 15,0 15,0 15,0 Thể tích vitamin B1 thêm vào
(mL)
- 5,0 5,0 5,0 5,0
Nồng độ vitamin B1 thêm vào (ppm)
- 4,000 8,000 10,000 14,000 Thể tích dung môi pha mẫu
(mL)
10,0 5,0 5,0 5,0 5,0
Nồng độ vitamin B1 sau khi pha (ppm)
Bảng 3.43. Bảng thêm chuẩn vitamin B6 trong sữa tươi Dielac Alpha Gold
Mẫu 1 6 7 8 9
Thể tích sữa tươi (mL) 15,0 15,0 15,0 15,0 15,0 Thể tích vitamin B6 thêm vào
(mL)
- 5,0 5,0 5,0 5,0
Nồng độ vitamin B6 thêm vào (ppm)
- 4,000 8,000 10,000 14,000 Thể tích dung môi pha mẫu
(mL)
10,0 5,0 5,0 5,0 5,0
Nồng độ vitamin B6 sau khi pha (ppm)
1,200 2,000 2,800 4,000 4,800
Bảng 3.44. Bảng thêm chuẩn vitamin B12 trong sữa tươi Dielac Alpha Gold
Mẫu 1 10 11 12 13
Thể tích sữa tươi (mL) 15,0 15,0 15,0 15,0 15,0 Thể tích vitamin B12 thêm vào
(mL)
- 5,0 5,0 5,0 5,0
Nồng độ vitamin B12 thêm vào (ppm)
- 4,000 8,000 10,000 14,000 Thể tích dung môi pha mẫu
(mL)
10,0 5,0 5,0 5,0 5,0
Nồng độ vitamin B12 sau khi pha (ppm)
0,002 0,802 1,602 2,002 2,802
Tiến hành chạy sắc ký lần lượt từng dung dịch theo điều kiện sắc ký đã chọn ở trên thu được kết quả như bảng 3.45.
Bảng 3.45. Kết quả phân tích sữa tươi Dielac Alpha Gold theo phương pháp thêm chuẩn
STT
Nồng độ của vitamin trước khi thêm chuẩn theo lí thuyết
(ppm) Nồng độ của vitamin thêm vào mẫu (ppm) Nồng độ của vitamin xác định được sau khi thêm