- Nghiện rượu: Những bệnh nhõn uống 100 ml rượu /ngày trong
2.2.4.Định lượng TNFα trong huyết thanh bệnh nhõn
* Thời điểm lấy mỏu:
Mỗi bệnh nhõn được lấy mỏu 2 lần
+ Lấy mỏu lần 1: Ngay sau khi vào viện (trong 48 giờ đầu từ khi xuất hiện triệu chứng đầu tiờn).
+ Lấy mỏu lần 2: vào ngày thứ 5 của bệnh
- Mỗi mẫu mỏu lấy 2 ml, khụng chống đụng, sau 30 phỳt ly tõm lấy huyết thanh.
- Bảo quản: huyết thanh được bảo quản ở nhiệt độ -70oC ở Labo Trung tõm Trường Đại học Y Hà Nội.
* Kỹ thuật miễn dịch phúng xạ (RIA) định lượng TNFα huyết thanh.
- Sinh phẩm là kit IMK - 480 (kit thế hệ 3 ) của viện năng lượng nguyờn tử Trung Quốc, Thời hạn và quy trỡnh sử dụng theo hướng dẫn của nhà sản xuất.
- Nguyờn lý: dựa trờn nguyờn lý cạnh tranh, TNFα trong huyết thanh bệnh nhõn hoặc trong cỏc chuẩn sẽ cạnh tranh với TNFα gắn I125 để gắn vào khỏng thể khỏng TNFα. Số xung đo được sau khi hoàn thành thớ nghiệm tỷ lệ nghịch với nồng độ TNFα trong huyết thanh.
- Chuẩn bị:
• Huyết thanh bệnh nhõn 0,3ml
• Nhỏ 1,2ml dung dịch vào cỏc lọ chuẩn A, B, C, D, E, F tương ứng với cỏc nồng độ 0,15: 0,45; 0,90; 1,80; 3,60, 9,00 ng/ml • Nhỏ 11ml đệm vào lọ khỏng thể.
• Nhỏ 11ml đệm vào lọ TNFα gắn I125 (Tracer) - Tiến hành:
• Nhỏ 200(l cỏc chuẩn và mẫu vào cỏc ống tương ứng. • Nhỏ 100(l khỏng thể vào cỏc ống, trừ ống NSB. • Lắc đều vào ủ ở 4oC trong 3 giờ.
• Nhỏ 100(l Tracer vào cỏc ống kể cả ống Total (T) • Lắc đều và ủ ở 4oC trong 17 giờ.
• Cho vào mỗi ống 500(l dung dịch kết tủa. • Trộn đều và để ở nhiệt độ phũng trong 15 phỳt.
• Ly tõm với lực ly tõm 1500g trong 15 phỳt, hỳt bỏ nước nổi. • Đọc và phõn tớch kết quả trờn mỏy đếm gamma, dựng phần
mềm của hóng Oakffield (England).
- Nơi tiến hành: Khoa Miễn dịch Bệnh viện Trung ương Quõn đội 108.