2. Mục tiêu của đề tài
2.4. Phân lập, tinh chế các hợp chất 1, 2
Phần cao chiết ethyl acetate (45 gam) tiến hành phân lập các chất trên sắc ký cột silica gel. Hòa tan lượng cao chiết sau đó được hấp phụ trên silica gel (Merck, cỡ hạt 63-20 µm). Nhồi cột khô silica gel (Merck, cỡ hạt 63-20 µm) vào cột sắc ký kích thước 15x100 cm với 1 kg silica gel. Ổn định cột bằng dung môi n-hexan. Hệ dung môi rửa giải là: acetone/n-hexan với tỉ lệ từ 1:20 - 1/1(v/v). Thu được 6 phân đoạn bằng cách sắc ký lớp mỏng để gộp các lọ giống nhau.
Cao chiết EA (95 gam)
Phân đoạn 1 Phân đoạn 2 Phân đoạn 3 Phân đoạn 4 Phân đoạn 5 Phân đoạn 6
SKC
Pha động: n-hexane/acetone với tỉ lệ 1:20 đến 1:1 (v/v)
SKC
Pha động: n-hexane/acetone với tỉ lệ 25-1 - 15/1 (v/v)
Phân đoạn 2.1
5 kg lá Cáp đồng văn
Cao chiết EtOH (650 gram)
Chiết nóng với EtOH 90%, 4h, 70o, 3 lần
Cao chiết n-Hex (125 g) Cao chiết n-BuOH (135 gam)
Cao chiết EA (lấy 45 gam trong 95
gam cao EA)
Phân đoạn 2.2
Chất 2 (12 mg)
SKC 18
Pha động: nước/acetone với tỉ lệ 10/ 90 (v/v), 2 mL/phút
Phân đoạn 3.2
SKC
Pha động: n-hexane/acetone với tỉ lệ 15/1 (v/v)
Phân đoạn 3.1
Chất 1 (16 mg)
SKC 18
Pha động: nước/acetone với tỉ lệ 20/ 80 (v/v), 2 mL/phút
Phân đoạn số 3 tiếp tục sắc ký cột silica gel pha thuận trên cột sắc ký có kích thức 4 x 50 cm bằng hệ dung môi rửa giải là: Acetone/n-Hexane = 15/1 (v/v) thu được các phân đoạn. Từ phân đoạn 3.1 tiếp tục được sắc ký cột pha đảo với chất hấp phụ RP C-18 với pha động nước/acetone = 20/80 (v/v), tốc độ dòng 2 mL/phút thu được chất dạng gum có màu vàng nhạt có khối lượng 16 mg (chất
1).
Phân đoạn số 2 tiếp tục sắc ký cột silica gel pha thuận trên cột sắc ký có kích thức 4 x 50 cm bằng hệ dung môi rửa giải là: Acetone/n-Hexane = 25/1- 15/1 (v/v) thu được các phân đoạn, phân đoạn 2.2 tiếp tục được sắc ký cột pha đảo với chất hấp phụ RP C-18 với pha động nước/acetone = 10/90 (v/v), tốc độ dòng 2 mL/phút thu được chất rắn không màu có khối lượng 12 mg (chất 2).
Chương 3
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN