Phổ 13C-NMR của hợp chất 5 (HUNG 3) xuất hiện đẩy đủ tín hiệu của các nguyên tử cacbon có mặt trong phân tử bao gồm tín hiệu của các nhóm cacbonyl, tín hiệu của nhóm bão hòa và nhân thơm. Tín hiệu cộng hưởng vùng trường thấp tại 170,5 ppm là đặc trưng của nhóm cacbonyl trên khung tropolon. Trong tín hiệu vùng thơm xuất hiện cộng hưởng của 15 nguyên tử cacbon, trong đó có 4 tín hiệu đặc trưng của nhóm CH tại 123,9 ppm là của C-3’, 123,0 ppm được gán cho C-6’, 119,8 ppm được gán cho C-5’, tại 118,9 ppm được gán cho C-7’.
Còn lại là 11 tín hiệu đặc trưng của cacbon bậc 4 thơm trong đó tín hiệu cộng hưởng tại 156,7 ppm là đặc trưng của cacbon bậc 4 thơm liên kết với nhóm có chứa nguyên tử oxy như vậy tín hiệu này được gán cho vị trí C-3 trên khung tropolon; tín hiệu cộng hưởng tại 151,1 ppm và 148,3 ppm được gán cho vị trí C-2’ và C-9’ trên khung quinolin. Các tín hiệu của C bậc 4 liên kết với clo được xác định tương ứng ở các vị trí tương ứng trên vòng quinolin và vòng tropolon như 135,9 (C-7); 134,2 (C-6); 134,1 (C-4’); 130,7 (C-4); 128,5 (C-5). Các tín hiệu của cacbon vòng thơm chỉ liên kết với C được xác
1 2 3 4 5 6 7 2’ 3’ 4’ 10’ 5’ 6’ 7’ 8’ 9’
định là các tín hiệu 112,5 (C-8’); 110,7 (C-10’). Tín hiệu cộng hưởng nhóm metyl của quinolin tại 17,57 ppm.
Hình 3.3: Phổ 13C-NMR của hợp chất 5
Trên phổ MS của hợp chất 5 (HUNG3) xuất hiện tín hiệu của [M+HCl]+ = 469,9. Từ phân tích dữ liệu phổ 1H-NMR và 13C-NMR và MS trên cho phép chúng tôi khẳng định cấu trúc của hợp chất 5 (HUNG3) là 2-(4- Clo-8-metyl quinolin-2-yl)-4,5,6,7-tetraclo-1,3-tropolon. Hình 3.4: Phổ MS của hợp chất 5 1 2 3 4 5 6 7 2’ 3’ 4’ 10’ 5’ 6’ 7’ 8’ 9’
3.2.2. Kết quả phân tích cấu trúc của 2-(5-nitro-4-clo-8-metylquinolin-2-yl)-4,5,6,7- tetraclo-1,3-tropolon 4,5,6,7- tetraclo-1,3-tropolon
Trên phổ 1H-NMR của hợp chất 6 (HUNG4) xuất hiện đầy đủ tín hiệu cộng hưởng của các proton có mặt trên phân tử (hình 3.5). Giá trị cộng hưởng vùng trường cao tại 2,81 ppm là đặc trưng của nhóm metyl liên kết với nhân thơm được gán cho nhóm metyl ở vị trí số 8 trên vòng quinolin. Tín hiệu singlet ở vị trí 8,45 ppm được xác định của proton trên vòng quinolin ở vị trí số 3’. Tín hiệu cộng hưởng singlet tại vùng trường rất thấp 17,81 là đặc trưng của proton của nhóm OH enol có liên kết hydro bền vững.
Hình 3.5: Phổ 1H-NMR của hợp chất 6
Phổ 13C-NMR của hợp chất 6 (HUNG 4) xuất hiện đẩy đủ tín hiệu của các nguyên tử cacbon có mặt trong phân tử bao gồm tín hiệu của các nhóm cacbonyl, tín hiệu của nhóm bão hòa và nhân thơm. Tín hiệu cộng hưởng vùng trường thấp tại 173,8 ppm là đặc trưng của nhóm cacbonyl trên khung tropolon. Trong tín hiệu vùng thơm xuất hiện cộng hưởng của 15 nguyên tử
cacbon, trong đó có 3 tín hiệu đặc trưng của nhóm CH tại 124,1 ppm là của C-3’, 123,1 ppm được gán cho C-6’, 122,2 ppm được gán cho C-7’. Còn lại là 12 tín hiệu đặc trưng của cacbon bậc 4 thơm trong đó tín hiệu cộng hưởng tại 154,7 ppm là đặc trưng của cacbon bậc 4 thơm liên kết với nhóm có chứa nguyên tử oxy như vậy tín hiệu này được gán cho vị trí C-3 trên khung tropolon; tín hiệu cộng hưởng tại 151,6 ppm và 150,0 ppm được gán cho vị trí C-2’ và C-9’ trên khung quinolin. Các tín hiệu của C bậc 4 liên kết với clo được xác định tương ứng ở các vị trí tương ứng trên vòng quinolin và vòng tropolon như 138,5 (C-7); 136,1 (C-6); 133,1 (C-4’); 132,6 (C-4); 132,0 (C-5). Các tín hiệu của các bon vòng thơm chỉ liên kết với C được xác định là các tín hiệu 112,3 (C-8’); 110,7 (C-10’). Tín hiệu của cacbon ở 137,2 ppm được gán cho C-5’ trên vòng quinolin liên kết với Nitơ. Tín hiệu cộng hưởng nhóm metyl của quinolin tại 18,90 ppm.
Trên phổ MS của hợp chất 6 (HUNG4) có xuất hiện tín hiệu của [M+H]+ = 481,0.
Từ phân tích dữ liệu phổ 1H-NMR và 13C-NMR và MS trên cho phép chúng tôi khẳng định cấu trúc của hợp chất 6 (HUNG4) là 2-(5-nitro-4-Clo-8- metyl quinolin-2-yl)-4,5,6,7-tetraclo-1,3-tropolon.
Hình 3.7: Phổ MS của chất 6
3.3. Kết quả phân tích hàm lượng
Hàm lượng của chất chính trong mẫu nghiên cứu HUNG4 được phân tích trên máy HPLC của hãng Agilent 1260 Series Single Quadrupole LC/MS Systems sử dụng cột sắc ký Zorbax Eclipse XDB C18 (250 x 4.6 mm, 5μm) và cột bảo vệ C18 của hãng Agilent, dung môi sử dụng là MeOH/H2O chạy đẳng hệ với tỉ lệ là 92/8, lượng mẫu bơm 5 µL ở tốc độ dòng 1 mL/phút và bước sóng phát hiện chất tại 254nm. Kết quả phân tích cho biết mẫu nghiên cứu chất 6 (HUNG4) có 11 thành phần, trong đó thành phần chính chiếm 55,5% có thời gian lưu tại 6,68 phút, có 05 thành phần phụ lớn hơn 5% tại thời gian lưu là 2,81 phút, 2,99 phút, 4,69 phút, 5,34 phút và 8,08 phút.
Hình 3.8: Phổ đồ LC-MS của hợp chất 6
Thành phần chính được bắn phá bằng MS nhận được mảnh ion giả phân tử [M-H]- = 479,0 phù hợp với cấu trúc của chất 6 (HUNG4) đã phân tích trên phổ NMR.