Để xác định nồng độ của các chất trong mẫu phân tích theo phương pháp đo phổ hấp thụ phân tử, ta có thể tiến hành theo phương pháp đường chuẩn.
Cơ sở của phương pháp là dựa trên sự phụ thuộc tuyến tính của độ hấp thụ quang A vào nồng độ của chất cần xác định trong mẫu.
Để dựng đường chuẩn, tiến hành pha chế một dãy dung dịch chuẩn có nồng độ chất chuẩn X tăng dần từ C1, C2,..Cn(M) (n nhỏ nhất bằng 3). Tiến hành đo độ hấp thụ quang của cả dãy dung dịch rồi lập đồ thị sự phụ thuộc của độ hấp thụ quang A của cả dãy dung dịch vào nồng độ C của chất X tức A=f(C) gọi là đường chuẩn. Để phân tích hàm lượng của chất X trong mẫu cần phân tích đem đo độ hấp thụ quang của chúng như đo với dãy dung dịch chuẩn được giá trị Ax. Dùng đồ thị đường chuẩn ta sẽ tính được Cx có trong mẫu.
MB là một phẩm nhuộm mang màu trong đó cường độ màu tỷ lệ với nồng độ của chất này trong dung dịch. Nồng độ của MB trong mẫu được xác định bằng phương pháp phổ hấp thụ phân tử trên máy.
(a) (b)
Hình 2.5. Cân điện tử cân điện tử 4 số Mettler Toledo (a) và máy đo phổ hấp phụ phân tử UV-vis (b)
Để dựng đường chuẩn của MB, tiến hành pha dãy dung dịch chuẩn như sau:
- Cân 0,1g MB trên cân điện tử 4 số Mettler Toledo. Pha lượng chất MB trên vào bình định mức 1000 ml ta được dung dịch gốc có nồng độ 100 (ppm). Từ dung dịch gốc trên, pha thành các dung dịch có nồng độ 2 ppm, 4 ppm, 6 ppm, 8 ppm, 10 ppm,15 ppm, 20 ppm.
Hình 2.6. Ảnh chụp dung dịch MB nồng độ khác nhau
- Đo độ hấp thụ quang của MB với các giá trị nồng độ dung dịch chuẩn khác nhau đã chuẩn bị ở trên tại bước sóng 664 nm theo thứ tự dung dịch có nồng độ từ thấp đến cao.
- Dựng đồ thị A = f(C), xác định đường chuẩn dùng phần mềm Origin. Để xác định nồng độ MB sau khi xử lý, tiến hành như sau:
+ Đo độ hấp thụ ứng với nồng độ Cx của dung dịch MB cần định lượng. + Dựa vào phương trình đường chuẩn suy ra Cx.