Isomerase chalcone (CHI) là enzyme thứ hai trong con đường sản sinh flavonoid và xúc tác chuyển đổi 1 chalcone 1 flavanone – là nguyên liệu để tạo ra flavonoid và isoflavonoid [8]. Enzym CHI phân lập từ thực vật không thuộc cây họ đậu không thể sử dụng isoliquiritigenin như một chất nền vì vậy CHI được phân thành hai loại chính là loại I và loại II [16]. Loại I, CHI có thể xúc tác cho 6-hydrox-chalcone tạo thành (2S)–flavonoid hoặc (2S)–5- desoxidation flavonoid. Loại I, CHI đã được tìm thấy trong hầu hết các loại thực vật cả thực vật họ đậu cũng như không thuộc họ đậu có thể kể đến như lúa mạch,
Arabidopsis và lúa [6]. Loại II, CHI chủ yếu tìm thấy trong cây họ đậu có thể xúc tác cho cả 6-hydrox-chalcone và 6-deoxidation-chalcone vào (2S)-flavonoid hoặc (2S)-5-desoxidation flavonoid [9].
Kết quả nghiên cứu năm 1994, Heather và Ann H đã phân lập được hai gen
CHI ký hiệu là CHI1, CHI2 với kích thước lần lượt là 666 bp và 845 bp từ
cDNA của cỏ linh lăng (Medicago sativa L.) [13]. Sau đó Grotewold và Peterson đã phân lập được gen CHI từ cây ngô và thấy rằng các gen mã hóa một sản phẩm ZmCHI1 có trọng lượng phân tử là 24,3 kDa. Gen CHI1 ngô này có cấu trúc
phân đoa ̣n và gồm 4 exon [11]. Năm 2003, Norimoto và cs đã phân lập được 3 gen: CHI1, CHI2 và CHI3 từ cDNA của cây Lotus japonicus và công bố trên
GenBank; gen CHI1 mang mã số AB054801, chiều dài 681 bp, mã hóa cho
chuỗi polypeptide 226 amino acid (24,4 kDa); gen CHI2 mang mã số
AB054802, chiều dài 666 bp, mã hóa cho chuỗi polypeptide 221 amino acid (23,9 kDa) và CHI3 với mã số AB073787, chiều dài 678 bp, mã hóa cho 225
amino acid (24,2 kDa) [20]. Năm 2005, Ralston đã phân lập gen CHI1A từ
mRNA cây đậu tương và thấy gen có chiều dài 1157 bp, mã hóa cho 128 amino acid [22]. Đến năm 2010, Soderlund cũng đã phân lập được 1 gen CHI1 từ
mRNA của cây ngô với chiều dài 1080 bp [27]. Terai và cs đã nghiên cứu phân lập được gen CHI từ cDNA của cây sắn dây Pueraria lobata với kích thước gen
là 675 bp mã hóa một polypeptide 225 amino acid, trọng lượng phân tử 23,8kDa. Gen CHI (cDNA) đã được gắn vào vector biểu hiện pET-3d và biểu thành công trong Escherichia coli [28]. Gen CHI cũng được phân lập từ mRNA lá cây nho (Vitis vinifera L.) bởi tác giả Gutha và cs, kích thước của gen là 979 bp, mã hóa cho 234 amino acid [12]. Năm 2015, Dastmalchi và cs đã chỉ ra rằng CHI
được xếp vào 4 phân họ dựa trên các trình tự tương đồng và các cơ chất đặc hiệu với enzyme CHI thuô ̣c họ CHI [8].
Chƣơng 2. VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP