tƣơng (ĐT51, DT90, DT84)
Mầm hạt đậu tương nảy mầm 3 ngày tuổi được sử du ̣ng làm nguyên liê ̣u để chiết rút daidzein và genistein. Đi ̣nh lươ ̣ng daidzein và genistein theo phương pháp sắc ký HPLC.
Nguyên lý: Dịch chiết chứa daidzein và genistein được chiết từ mầm đậu
tương sử dụng dung môi thích hợp. Dịch chiết thu được sau đó được loại tạp, làm sạch mẫu qua hệ thống SPE. Dịch thu được sau đó được phân tích trên hệ thống HPLC.
Phương pháp phân tích đi ̣nh lươ ̣ng daidzein và genistein đươ ̣c thực hiê ̣n theo phương pháp AOAC Official 2006.07 và theo Hao Chen và cs (2001).
Cân chính xác 2g mẫu đã được ủ cho nảy mầm 3 ngày tuổi cho vào ống ly tâm 50ml có nắp kín, thêm 35 ml dung dịch chiết mẫu, đậy kín nắp, lắc đều. Thủy phân trong 2 giờ tại nhiệt độ 80o
C, sau đó để nguội và ly tâm 6000 vòng/phút trong 5 phút, gạn lấy phần dịch trong phía trên. Thêm 10 ml dịch chiết vào phần cặn, lắc đều trong 1 phút rồi đem ly tâm, gộp phần dịch trong cho vào bình định mức 50ml, định mức bằng acetonitril. Lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45 µm, phân tích trên HPLC.
HPLC là kỹ thuật tách trong đó các chất phân tích hòa tan trong pha động là chất lỏng và di chuyển qua cột chứa các hạt pha tĩnh. Tùy thuộc vào ái lực của chất phân tích với pha động và pha tĩnh mà các chất di chuyển với tốc độ khác nhau, do đó thứ tự khác nhau. Thành phần pha động đưa chất phân tích ra khỏi cột được thay đổi để rửa giải các chất với thời gian hợp lý [21].
Điều kiện sắc ký:
Pha tĩnh: Cột C18 Symmetry Waters (250mm x 4,6mm; 5µm)
Nhiệt độ cột: 40 oC, tốc độ dòng: 1,0 ml/phút, thể tích tiêm mẫu: 50µl Detector PDA quét phổ từ 200-400nm, định lượng ở bước sóng 260nm Pha động: gradient giữa methanol và dung dịch đệm format
Hình 2.2. Sơ đồ cấu tạo hệ thống HPLC