4. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn
3.2.1. Kết quả tách dòng gen DREB6
Sản phẩm PCR đoạn gen GmDREB6 đã tinh sạch được sử dụng cho phản ứng gắn nối vào vector pBT (kích thước 2705 bp) để tạo vector tái tổ hợp pBT– GmDREB6. Vector tái tổ hợp được biến nạp vào vi khuẩn E.coli DH5α, các khuẩn lạc mang vector được chọn lọc trên môi trường kháng sinh Ampicillin, có chất cảm ứng IPTG và cơ chất X-Gal.
Theo lí thuyết, tế bào chứa plasmid sẽ phát triển được trên môi trường có chứa kháng sinh Ampicillin. Các tế bào mang plasmid tái tổ hợp có chứa đoạn chèn xen vào giữa gen LacZ sẽ không tạo ra protein LacZ để chuyển hóa cơ chất Xgal, các tế bào này phát triển thành khuẩn lạc trắng. Trái lại, các tế bào mang plasmid tự đóng vòng, có khả năng chuyển hóa cơ chất X-gal, với sự có mặt của chất cảm ứng IPTG sẽ phát triển thành khuẩn lạc xanh.
Năm dòng khuẩn lạc trắng được lựa chọn để tiến hành phản ứng colony- PCR kiểm tra sự có mặt của gen GmDREB6 trong E.coli. Kết quả điện di kiểm tra phản ứng colony-PCR được thể hiện trên hình 3.4.
0,75 kb 0,5 kb
0,69 kb
M 1 2 3 4 5
Hình 3.4. Kết quả điện di kiểm tra sản phẩm colony-PCR nhân bản gen
GmDREB6 từ 5 dòng khuẩn lạc màu trắng. M: Thang DNA 1 kb; Giếng 1, 3, 4, 5: sản phẩm colony-PCR; Giếng 2: không có sản phẩm colony-PCR
Theo kết quả thể hiện trên hình 3.4, các khuẩn lạc 1, 3, 4, 5 cho kết quả dương tính với phản ứng colony-PCR, sản phẩm PCR thu được một băng có kích thước như dự kiến là khoảng 0,69 kb. Khuẩn lạc số 2 không xuất hiện cho kết quả âm tính với phản ứng colony-PCR. Các dòng khuẩn lạc cho kết quả dương tính với phản ứng colony-PCR được nuôi tăng sinh và sử dụng để tách chiết plasmid phục vụ giải trình tự nucleotide.