Số lượng phôi chết ở các thời điểm 24h, 48h và 72h sau khi phơi nhiễm với các nồng độ dịch chiết được thống kê và biểu diễn dưới dạng đường cong đáp ứng liều (Hình 18).
Hình 18 : Biểu đồ thể hiện tỷ lệ phôi chết khi phơi nhiễm với dịch chiết dành dành Nhìn chung, ảnh hưởng độc tính của dịch chiết dành dành lên phôi cá tăng dần theo thời gian và nồng độ. Sau 24 giờ phơi nhiễm, dịch chiết gần như không gây ảnh hưởng đến sức sống của phôi cá, không xuất hiện phôi chết ở cả 7 nồng độ thí nghiệm. Tại thời điểm 48 giờ, bắt đầu quan sát được những ảnh hưởng độc tính của dịch chiết ở các nồng độ cao 4, 8, 12 g/L, tỷ lệ phôi chết tăng dần theo nồng độ: 0% ở nồng độ thấp hơn 4 g/L, xấp xỉ 5% ở nồng độ 4 g/L và 55% ở nồng độ 12 g/L. Tại thời điểm kết thúc thử nghiệm (72 giờ), tỷ lệ tử vong tiếp tục tăng đều ở tất cả các nồng độ, ở nồng độ 12 g/L đạt tới 100%, nồng độ 8 g/L đạt 80% và nồng độ 2 g/L đã tăng tới 10%, ấu thể phơi nhiễm với nồng độ 0,1, 0,5 và 1 g/L không bị ảnh hưởng đáng kể lên sức sống. Bằng phần mềm Graphpad Prism, chúng tôi tính toán được LC50 tại thời điểm 72h của dịch chiết dành dành là 4,9 g/L. Hiện nay, đã có một số nghiên cứu in vivo và in vitro về độc tính của dịch chiết dành dành [4, 36], trong đó liều dùng trong các thử nghiệm dược tính của dịch chiết thường dao động từ 50 mg/kg – 200 mg/kg/ngày thấp hơn so với nồng độ không quan sát thấy ảnh hưởng trên phôi cá ngựa vằn (0,5 g/L) và thấp hơn rất nhiều liều bắt đầu gây chết
(2,0 g/L). Như vậy, có khoảng cách về liều mang hiệu quả dược tính và liều gây độc cấp tính, cho thấy dịch chiết tương đối an toàn. Tuy nhiên, vẫn cần thêm những nghiên cứu đánh giá về ảnh hưởng của dịch chiết khi sử dụng liên tục kéo dài ở liều cao, trong một nghiên cứu của Yutaka và cộng sự thực hiện khảo sát trên 52 bệnh nhân cùng sử dụng các sản phẩm chứa dịch chiết từ quả dành dành với liều lượng dao động từ 1-3 g trong thời gian dài (trung bình 11 năm), 10 người trong số đó mang chứng xơ cứng tĩnh mạch mạc treo tràng trên. Kết quả cho thấy nhóm mang bệnh sử dụng nhiều sản phẩm từ dịch chiết dành dành hơn hẳn so với nhóm không mắc bệnh, với lượng dịch chiết tích lũy ở nhóm mang bệnh 6539,0 g so với 997,5 g ở nhóm so sánh. Nhóm nghiên cứu đã đưa ra khuyến cáo rằng việc sử dụng liên tục dịch chiết dành dành ở liều cao trong thời gian dài có khả năng gây xơ cứng tĩnh mạch mạc treo tràng trên [23].
Trong nghiên cứu này chúng tôi sử dụng phôi cá ngựa vằn là đối tượng rất mẫn cảm với các độc tố từ môi trường sống. Những dấu hiệu bất thường về hình thái được quan sát sau mỗi 24 giờ cho tới thời điểm 72 giờ và được minh hoạ như ở hình 19 dưới đây. Sau khi phơi nhiễm với dịch chiết dành dành, trong 48 giờ đầu không quan sát được những thay đổi đáng kể về hình thái phôi cá ngựa vằn. Đến thời điểm 72 giờ, một số ấu thể cá ngựa vằn xuất hiện những bất thường về hình thái bên ngoài như: noãn hoàng đen, mất sắc tố, noãn hoàng chia cắt bất thường và tụ máu ở màng noãn hoàng. Những dị dạng này có phân bố theo nồng độ khác nhau: hiện tượng noãn hoàng chia cắt bất thường chỉ quan sát được ở các nồng độ khá thấp như 1-2 g/L trong khi đó ảnh hưởng lên sắc tố của cá lại chỉ quan sát thấy ở các nồng độ cao hơn như 4-12 g/L. Tụ máu và noãn hoàng đen là 2 dị dạng ít phổ biến hơn và không phụ thuộc nồng độ, có thể giả thiết rằng chúng là biểu hiện ảnh hưởng của hóa chất lên những cá thể nhạy cảm hơn trong quần thể. Như vậy, có thể thấy rằng sau thời gian 72 giờ khảo sát thử nghiệm, các nồng độ 0,1; 0,5 và 1 g/L là nồng độ an toàn đối với phôi cá ngựa vằn.
Hình 19: Hình ảnh dị dạng của phôi cá ngựa vằn ở thời điểm 72h khi phơi nhiễm với dịch chiết dành dành nồng độ trên 1g/L
A.Đối chứng; B,C: Noãn hoàng đen; D,E: Mất sắc tố; F: noãn hoàng phân cắt bất thường; G: Tụ máu; Mũi tên màu đen chỉ ra các điểm bất thường.