2.7.1. Các loại vacxin đƣợc dùng hiện nay
a-Vacxin sống
hoặc độc lực trung bình được tiêm vào cơ thể sẽ gây ra đáp ứng miễn dịch giúp cho cơ thể chống lại bệnh mà không giết chết vật chủ vì độc lực không đủ mạnh.
Hiện nay có tám dòng virus được sử dụng để chế vacxin sống:
Bảng 2.2. Dòng virus đƣợc sử dụng để chế vacxin Newcastle
Dòng Đặc điểm
F Độc lực yếu. Thường dùng cho gà nhỏ nhưng cũng phù hợp sử dụng làm vacxin cho gà ở mọi lứa tuổi
B1 Độc lực yếu nhưng mạnh hơn F. Được sử dụng làm vacxin cho gà mọi lứa tuổi
Lasota Độc lực yếu. Thường là tác nhân chính dùng trong tiêm phòng, sử dụng làm vacxin có hoạt lực mạnh hơn F, B1
V4 Không độc. Sử dụng cho gà mọi lứa tuổi
V4_HR Không độc. Bền nhiệt hơn V4, dùng làm vacxin chịu nhiệt, sử dụng cho gà mọi lứa tuổi
I-2 Không độc. Chịu nhiệt, sử dụng làm vacxin chịu nhiệt, cấp cho gà mọi lứa tuổi
Mukteswar Độc lực trung bình. Dòng lan rộng, sử dụng như là vacxin tăng hoạt, có thể là nguyên nhân kháng lại (mối nguy cho hệ hô hấp, gây giảm cân hoặc làm chết phôi) nếu được sử dụng làm vacxin cho gà. Thường được tiêm vào gà
Komarov Độc lực trung bình. Khả năng gây bệnh thấp hơn Mukteswar, được sử dụng như là vacxin tăng hoạt. Được cấp bằng đường tiêm
Sản xuất vacxin sống được sản xuất theo phương pháp truyền thống đó là sử dụng virus nhược độc hoặc virus có độc lực trung bình được làm yếu đi. Phân lập virus từ các nguồn nhiễm, nếu là virus độc lực trung bình thì cấy chuyển nhiều lần trên môi trường phôi trứng. Với mỗi lần như vậy, có khả năng sửa đổi gen của virus. Những thay đổi đó ảnh hưởng nhiều đến độc lực của virus, tính kháng nguyên và hiệu suất vacxin. Lựa chọn tách biệt có thể tách được giống gốc tốt, bảo quản giống gốc thường là giữ đông khô. Chuẩn bị trứng sạch bệnh. Tiêm khoảng 0,1ml virus giống gốc đã được pha loãng với nồng độ virus thích hợp đã được tính toán trước vào túi niệu mỗi trứng. Đặt trứng vào lò ấp trứng, kiểm tra nhiệt độ và độ ẩm. Kiểm tra sự phát triển bất thường nào của phôi trong mỗi 24 giờ. Sau 4 ngày lấy trứng ra khỏi lò ấp, để lạnh ít nhất 2 giờ. Thu hoạch dịch túi niệu trứng bằng 6 máy li tâm vô trùng, kiểm tra tổng quát sự nhiễm của vi khuẩn,
kiểm soát phẩm chất của vacxin.
Ứng dụng hiện nay sử dụng vacxin sống vẫn còn phổ biến, chủ yếu là từ các dòng B1, Lasota của virus Newcastle. Có nhiều sản phẩm được bày bán trên thị trường thuốc thú y. Các loại vacxin chủ yếu được sản xuất ở dạng đông khô. Ở đây chỉ nêu quy cách điển hình của vacxin virus sống. Một loại vacxin muốn lưu thông trên thị trường thế giới phải bao gồm đủ các phần sau.
Vacxin Newcastle (dòng Lasota) điều trị và áp dụng trên gà. Nhà sản xuất: Merial select (MS)
-Thành phần hoạt động Vacxin có chứa chủng Lasota của virus Newcastle disease. Virus thu được từ sự nhiễm vào trứng sống sạch bệnh. Khả năng gây đáp ứng miễn dịch của vacxin đã được kiểm tra bởi kì kiểm tra tổng thể giống gốc. Vacxin này có thể gây ra các kích ứng miễn dịch nhẹ. Chứa streptomycin và penicillin như là chất ức chế vi khuẩn, chứa fungizone như là chất kìm hãm nấm. - Chú ý Vacxin đã trải qua kì kiểm tra về chức năng, độ an toàn, và các xét nghiệm về độ tinh khiết và tiêu chuẩn của MS và tiêu chuẩn của USDA.
- Chỉ dẫn của vacxin phòng bệnh Newcastle thích hợp dùng cho gà khỏe, không được cấp vacxin khi gà có các triệu chứng bệnh lí. Vacxin chỉ định sử dụng cho gà khỏe từ 14 ngày tuổi hoặc lớn hơn bằng cách thêm vào nước uống hoặc phun sương. Phun vacxin thì được chỉ định cho quá trình chủng lại tại thời gian 4 tuần và 16 tuần tuổi.
- Bào chế và quản lí vacxin bệnh Newcasle đây là dạng vacxin đông khô, có 2 cách chủng:
Chủng bằng đường uống
1. Không mở và trộn vacxin cho tới khi sẵn sàng chủng ngừa.
2. Vệ sinh chuồng trại, khử trùng nước uống 72h trước khi chủng ngừa. 3. Cung cấp đủ lượng nước để gia cầm có thể uống cùng lúc, súc rửa dụng cụ cho uống một cách kĩ lưỡng.
4. Không cho gia cầm uống nước từ 2-4 giờ trước khi chủng vacxin để kích thích khát.
5. Thêm sữa không béo vào nước theo tỉ lệ 1 ounce/gallon (1ounce =28,35g. 1 gallon = 4,54 l Anh hoặc 3,78 l Mỹ) trước khi trộn vacxin.
7. Cho vào chai vacxin đủ 2/3 nước đã chuẩn bị và trộn nhẹ nhàng. 8. Hòa tan vacxin với nước theo tỉ lệ ghi trên sản phẩm.
9. Phân phối vacxin trong dụng cụ đựng nước, tránh ánh sang trực tiếp. 10. Không cung cấp thêm bất kì loại nước uống nào khác cho đến khi vacxin được tiêu thụ hết.
Chủng bằng đường phun: chỉ sử dụng cho lần chủng lại trên gà khỏe 2 tuần tuổi hoặc lớn hơn. Không sử dụng cho lần chủng đầu tiên. Sử dụng vòi phun giống như bình phun sương để phân tách các dehydrated vacxin một cách nhanh chóng và đều đặn trong chuồng gà. Vacxin có thể gây viêm mí mắt ở người trong suốt 3 ngày. Nên thận trọng tránh làm vấy bẩn vacxin vào mắt, tay, quần áo. Khả năng của vacxin phụ thuộc vào nhiều yếu tố như: điều kiện bảo quản, lưu trữ và xử lí của người sử dụng, cách quản lí vacxin, tình trạng sức khỏe và khả năng đáp ứng miễn dịch của các loài… Không cấp vacxin 21 ngày trước khi giết mổ.
Ngoài ra còn nhiều loại vacxin sống được sản xuất từ công ty thuốc thú y trung ương Navetco.
Ưu điểm (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Kỹ thuật thấp
Tạo đáp ứng miễn dịch trong một thời gian dài Lượng kháng thể tạo ra cao
Hoạt hóa tất cả các thành phần của hệ thống miễn dịch Dễ vận chuyển
Nhược điểm: virus sống nên đôi khi bị biến chủng thành dạng cường độc do đó có nguy cơ nhiễm bệnh khi cấp vacxin.
Vacxin chết
Là vacxin mà hoạt lực của virus có thể bị bất hoạt bởi việc sử lý với hóa chất, bức xạ hoặc nhiệt độ. Vacxin này chỉ tạo ra kháng thể hưởng ứng. Sau khi bất hoạt có thể đưa vào các chất bổ trợ bao gồm: Alumium hydroxide gel; Alumium phosphate gel; Calcium phosphate gel và phèn.
Ứng dụng thông thường khi điều chế vacxin Newcastle chết thì sẽ trộn với một số loại khác như Hemophilus gallinarum chết và virus infections bronchitis dùng để chống lại các bệnh xâm nhiễm về đường hô hấp. Hemophilus gallinarum từ dòng 221, infectious bronchitis virus thì được chọn từ nhóm gồm
có dòng Beaudette 42, dòng kiểu Massachusettes và dòng kiểu Connecticut và virus chết Newcastle disease được chọn từ nhóm gồm có dòng Sato và dòng Miyadera. Sở dĩ chúng liên quan với nhau vì quá trình sản xuất chúng giống nhau. Việc sản xuất những loại vacxin trên ở dạng riêng lẻ thì rất đắc tiền vì phải tiêm chủng cho một lượng lớn gà. Khi phối trộn những tác nhân đã giết chết như vậy không gây ra ức chế lẫn nhau giữa các tác nhân gây bệnh. Sự phối trộn theo tỉ lệ sau: 5 đến 30 thể tích của Hemophilus gallinarum dòng 221 chết chứa từ 3.3×107-3.3×109 cells/ml, 5 đến 30 thể tích dòng Beaudette 42 của virus infectious bronchitis chứa khoảng 104 – 107EID50/ml, và 5 đến 30 thể tích virus chết dòng Sato Newcastle disease chứa khoảng 106.5-109.5EID50/ml trên 100 ml hỗn hợp sản phẩm được phối trộn. Ngoài các chất bổ trợ được nêu ở trên thì có thể bổ sung một số chất thêm vào để chống đóng vón như thimerosal, β- propiolactone, tylosin, salicylic acid, crystal violet, benzoic acid, các chất hoạt động bề mặt như benzethonium chloride, polymyxin, hoặc gramicidin. Hỗn hợp vacxin này có thể được tiêm vào cơ hoặc tiêm dưới da. Tạo ra lượng kháng thể khá cao nhưng tồn tại trong một thời gian ngắn.
Ưu điểm
- Có thể chủng ngừa cùng lúc nhiều bệnh trên một lần tiêm. - Kĩ thuật thấp
- Virus không thể phục hồi hoạt lực, tính an toàn cao.
- Kích thích cơ thể tạo đáp ứng miễn dịch tốt nếu được tiêm nhắc lại. - Dễ bảo quản và sử dụng
Nhược điểm
- Tạo kháng thể duy trì trong một thời gian ngắn nhiều cá thể không tạo đáp ứng miễn dịch.
- Phải tiêm nhắc lại thì bảo hộ mới bền.
- Không có khả năng sinh đáp ứng miễn dịch cục bộ. - Giá thành cao hơn loại vacxin nhược độc cùng loại. - Nếu vô hoạt không triệt để sẽ gây mất an toàn.
Vacxin chịu nhiệt
Là vacxin được cô lập từ virus tự nhiên bằng việc biến đổi tính chịu nhiệt của virus, ngày càng tăng dần mức độ chịu nhiệt bởi chọn lọc nhân tạo trong
phòng thí nghiệm tạo sức đề kháng khi được tiếp súc ở nhiệt độ cao. Nhiều loại vacxin chữa bệnh Newcastle thường giảm giá trị sau khi được lưu trữ trong kho từ 1 đến 2 giờ ở nhiệt độ phòng. Điều đó đã làm cho chúng không thích hợp sử dụng ở nông thôn nơi mà vacxin cần phải được vận chuyển trong nhiều giờ hoặc một số trường hợp là nhiều ngày ở nhiệt độ cao. Vacxin chịu nhiệt đã khắc phục được điều đó. Vacxin chịu nhiệt được lưu thong trên thị trường thế giới và Việt Nam đó là vacxin I-2 Newcastle.
Quy trình sản xuất
Chuẩn bị giống gốc cho vacxin I-2 Giống gốc vacxin I-2 đã được nghiên cứu và có sẵn ở phòng thí nghiệm John Fransis Virology, School of Veterinary Science, University of Queensland. Dòng I- 2 được cô lập từ dòng virus không độc Australian ND, nó đã được chọn để phân lập tính kháng nguyên và tính chịu nhiệt. Hệ thống giống gốc của virus này đã nhận được từ dòng cha mẹ mà có khả năng sống được ở 560C trong 30 phút. Quá trình thí nghiệm kéo dài và đã có sự kiểm tra về tính an toàn cũng như tạo miễn dịch trên gà. Nó phù hợp dùng tiêm chủng cho đàn gà thả vườn, những ổ gà con cũng được tiêm chủng bởi vacxin này. Sức bảo vệ trên quần thể tạo mức kháng thể trong 9 tháng với lượng HI tăng đáng kể bởi việc chủng virus vào gà con. Vacxin I-2 được cung cấp bằng cách nhỏ vào mắt trên gà thả vườn có thể chặn đứng sự phát triển dòng virus cực độc địa phương cả trong nghiên cứu tại phòng thí nghiệm lẫn trên gà thả vườn dọc theo đất nước Việt Nam. Vacxin I-2 ND đang được biết đến và sản xuất tại nhiều quốc gia cho việc kiểm soát bệnh Newcastle trên gà thả vườn.
- Cung cấp và phân phối giống gốc I-2 10 được duy trì ở School of Veterinary Science tại University of Queensland. Nó được cung cấp cho các phòng thí nghiệm sản xuất vacxin tại các quốc gia phát triển sản phẩm theo chương trình kiểm soát bệnh ở gà thả vườn. Để giữ mức giá ổn định giống gốc được vận chuyển mà không bằng cách giữ lạnh cách nhanh nhất hiện nay là bằng đường hàng không, 3 ống giống gốc đông khô được gói lại bằng hệ thống đóng gói HAZPAK. Được thiết kế một cách đặc biệt cho sự vận chuyển vật liệu sinh học đông lạnh hoặc gói lạnh để giữ nhiệt độ trước khi phân phối. Vấn đề đã được dự đoán trong quá trình vận chuyển, tránh sự lây nhiễm giống gốc, vì thế cần thiết phải xác định thời gian vận chuyển đến nơi cần đến. Thông tin giống được cung cấp từ giống gốc, giống phải được khôi phục; xác định thời gian bảo quản của giống gốc.
- Chú ý bảo quản giống gốc tốt nhất ở -700C. Sử dụng kĩ thuật vô trùng khi mở lọ đông khô giống gốc I-2 và chuyển vào lọ chứa 1ml môi trường nghèo nước. Tốt hơn là hòa vào dung dịch muối phosphate đẳng trương hoặc môi trường kháng sinh (Peniciline-Streptomycin-Gentamicin) trong 20ml. Chuẩn bị khoảng 1ml giống gốc đã phục hồi, chuẩn bị 1 ống thủy tinh có nhãn và bảo quản phần còn lại ở -700C. Tăng sinh tạo giống vacxin I-2 từ giống gốc. Tính toán thể tích giống gốc cần pha loãng để tiêm vào trứng với 0,1ml/trứng. Lấy ra và rã đông giống gốc đang làm lạnh ở-700C, tốt hơn là pha loãng vacxin để đảm bảo 1 trứng có ít nhất là 102EID50 hoặc nhiều hơn là 103EID50 trên 0,1ml tiêm vào. Đánh dấu lại những giống gốc với ngày rã đông và ngày bỏ vào tủ lạnh để sử dụng tiếp theo. Nên nhớ rã đông và bảo quản lạnh có thể làm giảm đặc tính lây nhiễm của virus. Ghi lại những mẫu được lấy ra từ tủ lạnh nếu biểu lộ bất kì giảm tính lây nhiễm trong suốt quá trình làm đông hoặc rã đông. Soi những trứng và đánh dấu vị trí tiêm chủng tùy theo từng phương pháp. Lau vị trí tiêm bằng cồn 70 và tiêm vào 0,1ml dung dịch pha loãng giống gốc I-2 vào trong túi niệu mỗi trứng. Sau 24 giờ soi trứng 1 lần để phát hiển bất kì sự chết của phôi. Sau 4 ngày ấp trứng, chuyển trứng khỏi tủ ấp và để lạnh ít nhất 2 giờ, tốt hơn là để qua đêm. Kiểm tra sự đóng cục của tế bào máu ở mỗi trứng. Thu hoạch dịch túi niệu của trứng vôi trùng bằng máy li tâm. Kiểm tra tổng quát sự nhiễm của vi khuẩn. Li tâm đứng qua đêm ở 40C, gạn ra dịch lỏng túi niệu, đảm bảo sự đồng nhất của dịch túi niệu. Chuẩn bị khoảng 1ml trong môi trường vô trùng, ghi lại nhãn rỏ ràng ới nội dung và ngày tháng. Bảo quản ở -700C. Thiết lập chuẩn giống để định được mức lây nhiễm.
Sản xuất vacxin I-2 Như sản xuất giống, thông tin về sức khỏe của phôi là cần thiết đòi hỏi đánh giá chất lượng vacxin từ số lượng trứng được tiêm nhiễm với công tác giống. Nhiều trứng sẽ cung cấp trên 10ml dịch túi niệm. Mỗi ml có thể chứa hơn 109EID50 (khoảng 1000 liều vacxin điều đó nói lên rằng mỗi trứng có thể thu được ít nhất 104,5
EID50 trong khoảng 0,1ml giống tiêm vào. Sự pha loãng này của một trong 10000 giống chứa 3 x 109.5
EID50 virus/ 1ml. Như vậy cứ 1ml giống sẽ tiêm vào phù hợp với khoảng 100000 trứng.
1. Chuyển những ống gốc I-2 rã đông.
2. Pha loãng trong môi trường kháng sinh hoặc PBS đưa tất cả thể tích tiêm vào trứng khoảng 0,1ml.
3. Lau vị trí tiêm bằng cồn 70 và tùy theo vị trí của mỗi trứng. 4. Đặt trứng trong tủ ấp 4 ngày
5. Kiểm tra trứng sau mỗi ngày, phát hiện bất kì sự chết của phôi (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
6. Sau 4 ngày lấy trứng khỏi tủ ấp, thu hoạch túi niệu tùy theo phương pháp. Kiểm soát phẩm chất của vacxin I-2 ND Chất pha loãng bảo trợ vacxin nước. Pha loãng vào trong môi trường chứa 2% gelatin hoặc 4% sữa đã không béo đươc cung cấp bởi phòng thí nghiệm John Fransis Virology. Chuẩn vacxin uống I- 2 ND có thể pha loãng như sau: hòa một phần dịch túi niệu với một phần chứa 2% gelatin và 2 phần môi trường kháng sinh, chuyển 0,5% môi trường chứa gelatin mà đã lây nhiễm với virus còn lại sau khi cất giữ ở 40C trong 8 tuần (tất cả gelatin và môi trường sữa không kem có thể được chuẩn bị trong nước cất hoặc môi trường dung dịch muối phosphate đẳng trương và được tiệt trùng bằng nồi hấp.
Làm đông khô vacxin I-2 ND Quá trình đông khô vacxin được thực hiện tại trung tâm sản xuất vacxin đông khô với số lượng lớn sẽ mô tả làm thế nào để quản lí và sử dụng được dễ dàng. Bố trí cán bộ huấn luyện duy trì và sử dụng máy đông khô đòi hỏi phải có sự giám sát chặt chẽ.
Thương mại hóa vacxin Sau khi vacxin được thử nghiệm trong phòng thí nghiệm và trên thực nghiệm thì được thương mại hóa trên thị trường và bán cho nông dân. Phải có những thông tin cụ thể, rõ ràng về tính chất vacxin, nhà sản