Phần 3 Đối tượng, vật liệu và phương pháp nghiên cứu
3.7. Phương pháp nghiên cứu
3.7.2. Phương pháp làm môi trường để nuôi cấy nấm
3.7.2.1. Môi trường Potato glucose agar (PGA)
Thành phần: Khoai tây: 200g; Agar : 20g;
Đường glucose : 20g; Nước cất : 1 lít.
Khoai tây gọt sạch vỏ, thái lát mỏng, đem đun sôi với nước cất 30 phút, sau đó lọc bằng vải mỏng qua phễu. Cho thêm nước cất đủ 1 lít đem đun sơi lại.
Cho lần lượt Agar, đường khuấy đều cho tan hết, sau đó đổ mơi trường vào bình tam giác, hay ống nghiệm có đậy nút bạc (bình tam giác, ống nghiệm, hộp Petri đã được rửa sạch và sấy khô ở nhiệt độ 1800C trong vịng 2 giờ ). Sau đó đem khử trùng trong nồi hấp ở áp suất 1.5 atm (1210C) trong 30 phút.
3.7.2.2. Môi trường Potato carrot agar ( PCA ) Thành phần: Khoai tây: 100g; Cà rốt : 100g; Agar : 20g; Nước cất : 1 lít.
Khoai tây, cà rốt gọt vỏ sạch, thái lát mỏng đem đun sôi với nước cất 30 phút, sau đó lọc bằng vải mỏng qua phễu. Cho thêm nước cất đủ 1 lít đun sơi và cho agar khuấy cho tan hết, sau đó đổ ra bình tam giác và khử trùng bằng nồi hấp ở áp suất 1.5 atm (121°C) trong 30 phút.
3.7.2.3. Môi trường PSA (Potato – Sugar – Agar) Thành phần: + Khoai tây: 200g;
+ Saccarose (đường ăn): 20g;
+ Agar: 20g;
+ Nước cất: 1000ml.
Cách làm: 200g khoai tây gọt sạch vỏ, cắt lát mỏng, luộc nhừ với 1 lít nước, sau đó lọc qua 4 lớp vải màn lấy nước trong. Cho nước khoai tây, đường ăn và agar vào xoong rồi khuấy đều. Cho xoong lên bếp, vừa đun vừa khuấy đều tay cho sôi đều rồi đổ vào chai thủy tinh, hấp khử trùng ở 121°C trong 15 phút, hấp xong cho môi trường vào hộp lồng và đậy nắp lại, khi môi trường nguội thì cấy nấm vào mơi trường. Nếu chưa dùng ngay thì cuốn màng chống nhện, cho các hộp này vào túi nilon trắng sạch, buộc miệng túi lại bằng dây chun để chống nhện nhỏ xâm nhập vào đĩa, để vào khay nhựa, cất vào tử để sử dụng dần trong 2 – 3 ngày sau.
3.7.2.4. Môi trường Water agar (WA) Thành phần: Agar : 20g Nước cất: 1 lít
Cách pha môi trường agar nước : Cho 20g agar vào 1 lít nước cất đun sơi khuấy đều rồi đem hấp khử trùng ở 121°C, 1 atm trong thời gian 15 phút sau đó cho vào đĩa petri, mỗi đĩa khoảng 15ml.