Có nhiều phương pháp chẩn đoán bệnh LMLM, nhưng phương pháp tương đối thông dụng hiện nay, cho kết quả nhanh và chính xác cao là phương pháp ELISA gián tiếp phát hiện kháng nguyên virus LMLM (Tô Long Thành, 2000).
-Phương pháp này thực hiện cần nhất phải là có một bộ KIT ELISA kháng nguyên, một số dung dịch bổ trợ khác và máy đọc ELISA.
-Kết quả chẩn đoán phụ thuộc vào một quá trình bao gồm: + Phương pháp lấy mẫu bệnh phẩm
+ Bảo quản và bao gói bệnh phẩm + Kỹ thuật xét nghiệm
Nguyên lý:
Phản ứng ELISA dùng kháng thể hoặc kháng kháng thể gắn enzym cho kết hợp trực tiếp hoặc gián tiếp với kháng nguyên, rồi cho cơ chất vào.
Nếu kháng thể tương ứng với kháng nguyên thì kháng thể hoặc kháng kháng thể gắn enzym không bị rửa trôi, enzym sẽ phân giải cơ chất tạo lên màu, khi có màu trong quang phổ kế thì sẽ định lượng được mức độ phản ứng.
Phân loại phản ứng ELISA
- Phản ứng ELISA trực tiếp (direct ELISA): dùng kháng thể gắn enzym để xác định kháng nguyên nghi cố định trên đĩa chuyên dụng.
- Phản ứng ELISA gián tiếp (indirect ELISA): dùng kháng nguyên chuẩn và kháng kháng thể gắn enzym để phát hiện kháng thể nghi.
- Phản ứng Sandwich ELISA gồm 2 loại:
+ Phản ứng Sandwich ELISA trực tiếp (direct Sandwich ELISA): kháng nguyên chuẩn được kẹp giữa kháng thể chuẩn và kháng thể gắn emzym.
+ Phản ứng Sandwich ELLISA gián tiếp (indirect Sandwich ELISA): kháng nguyên chuẩn được kẹp giữa kháng thể chuẩn và kháng thể nghi, sau đó kháng thể nghi được nhận diện bằng kháng kháng thể loài gắn enzym.
Ứng dụng phản ứng ELISA trong chẩn đoán bệnh LMLM:
Phản ứng ELISA phát hiện kháng nguyên virus LMLM:
Phương pháp ELISA thường được sử dụng để xác định sự có mặt của kháng nguyên virus LMLM trong mẫu bệnh phẩm lấy từ gia súc bị nghi ngờ nhiễm virus. Nếu mẫu được lấy từ nơi chứa ít virus hay chất lượng mẫu không đảm bảo thì trước khi định type virus bằng phương pháp ELISA sẽ tiến hành nuôi cấy virus trên môi trường tế bào sau đó phân lập virus từ môi trường nuôi cấy.
Phản ứng ELISA phát hiện kháng thể kháng virus LMLM:
- Phương pháp ELISA cũng được sử dụng để phát hiện và giám định các serotype của virus LMLM trong huyết thanh gia súc. Trong phản ứng, mỗi đĩa ELISA chỉ làm với một type virus LMLM chuẩn, để phát hiện kháng thể nghi trong huyết thanh của gia súc cần chẩn đoán.
- Có thể sử dụng cả ba phương pháp ELISA để phát hiện kháng thể kháng virus LMLM. Nhưng hiện nay phương pháp Sandwich ELISA gián tiếp thường được sử dụng phổ biến hơn cả. Bởi vì, kĩ thuật ELISA này có thuận lợi hơn hẳn các phản ứng thông thường khác do có tính đặc hiệu rất cao, rất nhạy lại kinh tế vì nhiều ứng dụng.
- Trong chẩn đoán phát hiện bệnh, với phương pháp Sandwich ELISA gián tiếp chúng ta có thể phát hiện và định type kháng nguyên virus LMLM từ mẫu bệnh phẩm biểu mô, dịch tiết hay có thể phát hiện kháng thể và giám định serotype virus LMLM từ mẫu bệnh phẩm huyết thanh.
dịch của gia súc sau tiêm phòng cũng như hiệu quả sử dụng vacxin người ta cũng sử dụng phương pháp Sandwich LISA gián tiếp để định lượng kháng thể kháng virus LMLM.