8. Cấu trúc luận văn
1.3. Các nghiên cứu về các biện pháp nuôi muỗi
Nayana Gunathilaka, et al 2017, khi nghiên cứu về hiệu quả của các
nguồn máu và các phương pháp cho ăn nhân tạo trong nuôi muỗi Aedes aegypti tại Sri Lanka [25]. Nghiên cứu cho thấy rằng, sự lựa chọn màng nhân
tạo và nguồn gốc của các loại máu là yếu tố được xem là quan trọng trong việc nuôi muỗi với số lượng lớn. Cụ thể như sử dụng tấm kính, tấm kim loại và màng Hemotek và ba nguồn máu như máu người, gia súc, máu gà được
đánh giá dựa vào tỷ lệ hút máu và khả năng sinh sản của muỗi Aedes aegypti. Kết quả cho thấy, có sự khác biệt đáng kể trong sử dụng các loại màng cho muỗi ăn nhân tạo (p < 0,05). Phương pháp cho ăn với tấm kim loại là đạt hiệu quả cao nhất và máu có tỷ lệ muỗi Aedes aegypti đốt cao nhất là máu người, sau đó là đến máu gia súc và máu gà.
Yi-Pey Luo, (2014), đã nghiên cứu một hệ thống cho ăn máu thông qua màng để điều tra và duy trì muỗi Ae. aegypti và Ae. albopictus [38]. Mục đích của nghiên cứu này là sử dụng các bữa ăn máu nhân tạo để thay thế việc cho muỗi đốt trực tiếp trên vật chủ sống và khám phá ứng dụng thực tế tiểu thuyết máu. Để đánh giá được hiệu quả khi sử dụng hệ thống cho ăn nhân tạo tác giả dựa trên các chỉ tiêu về tỷ lệ đốt máu, tỷ lệ sống, sự thuận lợi và phát triển ở thế hệ F1 của những con muỗi cái khi cho ăn qua hệ thống nhân tạo này, đồng thời so sánh khi cho muỗi đốt máu trực tiếp từ chuột. Nhiều loại màng đã được sử dụng trong kỹ thuật cho muỗi ăn thông qua màng nhân tạo như mô động vật, màng Parafilm và màng collagen. Nguồn máu được lấy từ những con heo vừa mới giết mổ và được xử lý với citrate phosphate dextrose (CPD) như một chất chống đông máu (CPD: máu = 1: 7) sau đó bảo quản ở nhiệt độ là 4oC trước khi sử dụng. Sử dụng nguồn máu heo toàn phần và huyết tương heo có thêm ATP. Máu dùng trong bữa ăn được duy trì ở nhiệt độ là 37oC. Đối với mỗi thí nghiệm cho ăn, bắt 15 con muỗi cái đưa vào một ống acrylic (45 mm ID x 120 mm) được trang bị lưới nylon tốt ở cả hai đầu. Một đầu của các ống nghiệm chứa máu heo có gắn nhiều loại màng nhân tạo khác nhau để muỗi hút máu. Cho ăn trực tiếp trên chuột ICR gây mê được thực hiện bằng cách đặt chuột vào lồng acrylic (20 x 20 x30 cm) với lô 20 con muỗi cái được cho ăn trong 30 phút. Số lượng muỗi no máu được tính sau 30 phút. Tỷ lệ muỗi đốt máu được tính là (số lượng muỗi ăn máu / số lượng muỗi được thử nghiệm) x 100%. Tỷ lệ sống sót của những con cái sau khi cho ăn nhiều
nguồn máu khác nhau được xác định vào ngày 10 (sau khi đã đẻ trứng) và ngày 30 sau khi cho ăn. Sau khi cho ăn, bắt 10 con cái ngẫu nhiên chuyển vào một lồng acrylic (20 x 20 x 30 cm) để đẻ trứng và cung cấp dung dịch sucrose 10%. Sau đó theo dõi số lượng trứng, tỷ lệ trứng nở bọ gậy, tỷ lệ bọ gậy nở quăng, tỷ lệ quăng nở muỗi. Mỗi bộ thí nghiệm được tiến hành ít nhất ba lần. Kết quả cho thấy rằng, tỷ lệ ăn máu của muỗi Ae. aegypti khi sử dụng nguồn máu heo qua màng Parafilm là 92,9%, qua màng collagen là 89,7%. Khi sử dụng máu heo toàn phần có thêm ATP qua màng collagen là 90,7%, huyết tương thêm ATP qua màng collagen là 91,5%, khi cho đốt trực tiếp từ chuột là 98%. Tuy nhiên, khi sử dụng huyết tương heo cho ăn qua màng collagen thì tỷ lệ là 0%. Tỷ lệ ăn máu của Ae. albopictus khi cho ăn trên máu heo toàn
phần qua màng Parafilm (47,9%) và qua màng collagen là 42,3% không khác biệt đáng kể so với việc đốt máu trực tiếp từ chuột (51,1%). Tỷ lệ ăn máu khi nguồn máu heo có thêm ATP sử dụng màng collagen (84,4%) và huyết tương heo có thêm ATP sử dụng màng collagen (81,2%) cao hơn đáng kể so với đốt trực tiếp từ những con chuột (51,1%). Tỷ lệ cho ăn huyết tương heo qua màng collagen là 4,8%. Đến ngày thứ 7 sau khi cho ăn, Ae.aegypti khi cho đốt trực
tiếp từ chuột và cho ăn từ nguồn máu heo toàn phần và huyết tương heo có tỷ lệ sống tương đương nhau (100%). Đến ngày thứ 30 sau ăn, Ae. aegypti khi
đốt máu trực tiếp từ chuột tỷ lệ sống (97,5%) và nguồn máu heo toàn phần (96,7%) có tỷ lệ sống cao hơn đáng kể so với khi được nuôi bằng huyết tương heo (82,5%). Muỗi Ae. albopictus khi đốt máu trực tiếp từ chuột sống (94,5%) có tỷ lệ sống cao hơn những con sử dụng máu heo toàn phần (80,0%) và tỷ lệ cao hơn đáng kể so với những con cho ăn trên huyết tương heo (76,7%). Đến ngày thứ 30 sau ăn, Ae. albopictus khi đốt máu trực tiếp từ chuột sống (77,5%) và máu heo toàn phần (73,3%) có tỷ lệ sống cao hơn đáng kể so với những con đã sử dụng nguồn huyết tương heo (36,7%).
Luciana dos Santos Dias, Luíz Guilherme Soares da Rocha Bauzer và José Bento Pereira Lima, (2018). Khi nghiên cứu về sử dụng hệ thống cho ăn nhân tạo để duy trì họ muỗi Culicidae trong phòng thí nghiệm [29]. Việc duy trì họ muỗi Culicidae trong phòng thí nghiệm là việc làm cần thiết để tiến hành các nghiên cứu nhằm mục đích hiểu rõ hơn về khả năng truyền bệnh của muỗi. Muỗi cái cần đốt máu để cung cấp cho sự phát triển của noãn bào. Khi thực hiện phương pháp cho muỗi cái đốt máu trực tiếp từ động vật có vú đã gây mê là một nhược điểm khi so sánh với phương pháp cho muỗi ăn thông qua màng nhân tạo. Do đó, các phòng thí nghiệm trên toàn thế giới đã cố gắng cho muỗi cái ăn qua màng nhân tạo để thay thế cho ăn trực tiếp trên động vật có vú. Trong nghiên cứu này, các tác giả đã so sánh ảnh hưởng của việc cho ăn máu trực tiếp và cho ăn máu qua màng nhân tạo trên những đặc điểm sống quan trọng của ba loài trong họ Culicida (Aedes aegypti, Culex quinquefasciatus, Anopheles quasalis). Cho ăn nhân tạo được thực hiện bằng
cách sử dụng máu cừu được khử muối và máu thỏ được khử muối, thông qua màng Parafilm hình vuông có kích thước 5cm. Cho ăn trực tiếp được thực hiện bằng cách sử dụng lợn guinea gây mê làm nguồn máu. Kết quả chỉ ra rằng cho ăn nhân tạo bằng máu cừu là không đủ khả năng cho việc duy trì họ muỗi Culicidae trong phòng thí nghiệm. Tuy nhiên, cho ăn nhân tạo bằng máu thỏ duy trì tốc độ phát triển của muỗi. Các tác giả đã kết luận rằng cho ăn nhân tạo bằng máu thỏ có thể thay thế cho ăn trực tiếp trên động vật có vú làm giảm thiểu việc sử dụng động vật, loại bỏ sự cần thiết phải duy trì một bioterium trong phòng thí nghiệm và giảm chi phí trong các nghiên cứu khoa học liên quan đến vectơ Culicidae.
Tác giả Cheong, H.T et al 2016, gây nhiễm thực nghiệm bằng cách cho
muỗi hút máu bệnh nhân nhiễm vius Dengue [19]. Cho muỗi cái Aedes aegypti từ 4-6 ngày tuổi đốt máu trực tiếp từ bệnh nhân trong 15 phút và cho đốt máu
bệnh nhân thông qua màng nhân tạo trong vòng 30 phút. Sau đó, bắt muỗi đã đốt máu cho vào lồng nuôi muỗi. Muỗi được lấy mẫu vào ngày thứ 13 sau khi cho ăn đem xác định nhiễm vius Dengue bằng kỹ thuật RT-qPCR và chuẩn độ vius. Kết quả thu được khi cho muỗi ăn trực tiếp qua da có tỷ lệ 93,3%-100% cao hơn khi cho muỗi ăn thông qua màng nhân tạo có tỷ lệ 48%-98,2%.
Pothikasikorn, Boonplueang. R, Suebsaeng.C, Khaen-graeng. R,
Chareonviriyaphap. T, (2010). Đã tiến hành nuôi giữ loài muỗi Ae. aegypti và An. dirus từ nguồn máu người đã quá hạn thông qua màng cho ăn nhân tạo [31] .
Máu người được thu thập từ nguồn máu đã quá thời hạn ở ngân hàng máu của Bệnh viện Ramathibodi, Bangkok, Thái Lan. Máu được lưu trữ trong dung dịch ACDvà làm lạnh ở 4oC cho đến khi sử dụng. Sử dụng phần da chuột sau khi đã loại bỏ tất cả các mô mỡ và mô kiên kết để làm màng cho ăn nhân tạo, sau đó được đông lạnh cho đến khi được sử dụng. Cho muỗi ăn máu vào các ngày 5, 15, 25 sau ngày máu hết hạn. Mỗi loài muỗi bắt 150 con cái chia thành 3 nhóm tiến hành cho ăn và theo dõi. Thời gian cho ăn kéo dài 30 phút với loài Ae. aegypti và 60 phút với loài An. dirus. Kết quả cho thấy rằng, Ae. aegypti có tỷ lệ ăn máu là 78,7% , 62%và 18% trong các khoảng thời gian tương ứng trong khi An. dirus có tỷ lệ 80%, 56,8% và 7,3%. Khi cho ăn trực tiếp trên chuột đồng sống Ae. aegypti có tỷ lệ ăn máu là 96% và An. dirus có tỷ lệ 90%.
Kristina K. Gonzales, Hitoshi Tsujimoto, Immo A. Hansen, (2015). Nghiên cứu sự ảnh hưởng của huyết thanh và BSA, tế bào hồng cầu và huyết sắc tố đến quá trình tạo tế bào trứng của loài muỗi Aedes aegypti
[28]. Muỗi Ae. aegypti là vectơ chính của sốt xuất huyết, sốt vàng và virut chikungunya. Việc nuôi giữ loài muỗi này rất quan trọng đối với các chiến lược phòng chống véc tơ truyền bệnh. Trong quá trình nuôi muỗi yếu tố dinh dưỡng có vai trò quan trọng trong quá trình hình thành trứng. Tuy nhiên, khi sử dụng nguồn máu từ người và động vật có xương sống gây trở
ngại về vấn đề phúc lợi động vật và chi phí cho thí nghiệm đáng kể. Do đó, chế độ cho ăn nhân tạo là việc làm cần thiết nhằm giải quyết vấn đề trên. Trong nghiên cứu này, tác giả đã so sánh các nguồn protein khác nhau trong chế độ ăn của muỗi. Các tác giả cũng đã thử nghiệm chế độ ăn nhân tạo được làm từ protein máu có bán trên thị trường (albumin huyết thanh bò (BSA) và huyết sắc tố). Kết quả cho thấy rằng Ae. aegypti đã đẻ trứng khi được truyền toàn bộ máu bò, huyết thanh hoặc chế độ ăn nhân tạo có chứa BSA. Ngược lại, khi cho ăn phần hồng cầu hoặc chế độ ăn nhân tạo chỉ chứa huyết sắc tố thì số lượng trứng giảm. Ngoài ra khả năng sống sót của trứng của muỗi được cho ăn huyết thanh tương đương với khi cho ăn máu toàn phần và một bữa ăn BSA bổ sung sắt tạo ra nhiều trứng hơn khi cho muỗi ăn chỉ có BSA. Kết quả chỉ ra rằng protein huyết thanh có thể thay thế máu của động vật có xương sống trong chế độ ăn nhân tạo qua màng Parafilm để nuôi muỗi hàng loạt.
Deng. L, Koou S.Y, Png A.B, Ng L.C, (2011). Đã nghiên cứu về một hệ thống cho ăn mới ở loài muỗi Ae. aegypti và Ae. albopictus [23]. Hệ thống này bao gồm một lớp màng collagen chứa đầy máu heo không chứa mầm bệnh và được làm ấm bằng một thiết bị sưởi ấm được thiết kế đơn giản. Đánh giá hiệu quả sử dụng hệ thống cho ăn này dựa trên các chỉ tiêu như: tỷ lệ đốt máu, số lượng trứng, tỷ lệ trứng nở khi cho các loài muỗi đốt máu qua màng collagen và đồng thời so sánh khi cho muỗi đốt máu trực tiếp từ chuột lang qua 3-8 thế hệ. Kết quả cho thấy rằng tỷ lệ ăn máu của Ae. aegypti qua màng collagen là 83,98% và phương pháp cho đốt trực tiếp từ chuột có tỷ lệ 96,2%, cho thấy có sự khác biệt đáng kể P = 0,012, số lượng trứng trung bình là 90 trứng/muỗi, tỷ lệ trứng nở 94,5%. Đối với loài Ae. albopictus, tỷ lệ muỗi đốt
máu qua màng là 81,86%, số trung bình trứng là 128 trứng/muỗi và tỷ lệ nở là 72,65%. Tác giả kết luận có thể dùng hệ thống cho ăn nhân tạo qua màng
collagen để sử dụng thay thế cho việc đốt máu trực tiếp từ chuột lang.
Andre´ Luis Costa-da-Silva và c.s, (2013). Đã tiến hành nuôi giữ véc tơ gây bệnh sốt xuất huyết, muỗi Ae. aegypti bằng thiết bị cho ăn nhân tạo được thiết kế đơn giản có dạng hình nón sử dụng glycerol và màng Parafilm [18]. Dựa trên nguyên tắc của máy cấp liệu kiểu Ruthledge, một ống hình nón thông thường, glycerol và Parafilm-M đã được sử dụng để tạo ra một thiết bị trung chuyển đơn giản. Hiệu quả cho muỗi ăn máu của thiết bị này được so sánh với khi cho muỗi đốt máu trực tiếp từ chuột và thấy rằng tỷ lệ muỗi ăn máu qua phương pháp nhân tạo là 51,3% và tỷ lệ ăn máu khi cho đốt trực tiếp từ chuột là 40,6% không có sự khác biệt đáng kể p = 0.1189. Thiết bị cho ăn đơn giản và hiệu quả này có thể được chế tạo bằng các vật liệu phòng thí nghiệm thông thường, do đó có thể sử dụng để nuôi giữ loài muỗi Ae. aegypti trong phòng thí nghiệm.
Finlayson. C, Saingamsook. J và Somboon. P, (2015). Đã tiến hành nghiên cứu phương pháp cho ăn qua màng ở loài muỗi Ae. aegpyti và An. minimus [24]. Các tác giả đã sử dụng phương pháp cho muỗi ăn qua màng để thay thế cho việc muỗi đốt máu trực tiếp từ vật chủ. Phương pháp cho ăn nhân tạo sử dụng nguồn máu bò có thêm chất Heparin để tránh hiện tượng đông máu, màng Parafilm và túi dầu thực vật để giữ ấm máu tất cả được đặt trong hộp xốp cách nhiệt có lỗ trống phía trên để muỗi đốt máu. Muỗi được cho ăn bằng phương pháp nhân tạo trong 15 phút mỗi lần. Tỷ lệ ăn máu và số lượng trứng của Ae. aegypti khi cho ăn qua màng nhân tạo được so sánh với muỗi đốt máu trực tiếp từ chuột. Tỷ lệ ăn máu và số lượng trứng của muỗi An. minimus so với muỗi đốt máu từ cánh tay của con người. Kết quả cho thấy rằng, muỗi Ae. aegypti được cho ăn bằng phương pháp nhân tạo và cho đốt máu chuột có tỷ lệ ăn máu lần lượt là là 38,2 ± 21,5% và 35,7 ± 18,2% và tổng số lượng trứng chênh lệch 1,5%. Muỗi An. minimus được cho ăn bằng phương pháp nhân tạo có tỷ lệ ăn máu là 52,0 ± 1,0% thấp hơn khi cho
muỗi đốt máu người (70,7 ± 20,2%) và tổng sản lượng trứng khi cho muỗi ăn bằng phương pháp nhân tạo giảm 40% so với khi cho muỗi đốt máu người, tuy nhiên số lượng trứng từ phương pháp nhân tạo là 1808 trứng trên 100 con muỗi vẫn chấp nhận được để duy trì loài muỗi. Ngoài ra, nghiên cứu cho thấy rằng tỷ lệ ăn máu và số lượng trứng của muỗi Ae. aegypti giảm khi cho ăn máu bằng phương pháp nhân tạo có sử dụng nguồn máu bảo quản lạnh quá 2 tuần. Kết luận, có thể sử dụng phương pháp cho ăn nhân tạo để thay thế cho việc đốt máu trực tiếp từ vật chủ và nên sử dụng nguồn máu bảo quản không quá 2 tuần để nuôi giữ các loài muỗi An. minimus và Ae. aegypti.
Mark G. Novak, William J. Berry, Wayne A. Rowley, (1991). Đã tiến hành nuôi dưỡng 4 loài muỗi Ae. aegypti, Ae. triseriatus, Culex pipiens và Cx. tarsalis, bằng phương pháp cho ăn nhân tạo trên 4 loại màng khác nhau
(da chuột, da chim cút, ruột cừu, bao cao su) [30]. Mục tiêu của nghiên cứu này là đánh giá khả năng đốt máu của muỗi qua các loại màng. Nguồn máu sử dụng trong phương pháp cho ăn nhân tạo là máu thỏ đã được xử lý hiện tượng đông máu bằng tác nhân cơ học và giữa ấm ở nhiệt độ 37-38oC. Cho muỗi đốt máu qua các loại màng trong các khoảng thời gian 5 phút, 10 phút, 20 phút. Kết quả cho thấy rằng, khi muỗi đốt máu qua màng cấu tạo từ da động vật có tỷ lệ đốt máu cao nhất, chẳng hạn hơn 50% loài muỗi Aedes đốt máu trong vòng 5 phút và khoảng 90% muỗi đốt máu trong vòng 20 phút khi cho muỗi ăn máu qua màng da chuột hoặc da chim cút.
Tseng. M, (2003), khi nghiên cứu phương pháp cho ăn qua màng Parafilm ở 2 loài muỗi Ae. aegypti và Ae. albopictus, nghiên cứu được duy trì trong 2 năm [33]. Nguồn máu được sử dụng là máu cừu được giữa ở nhiệt độ 40oC, cho muỗi đốt máu qua màng Parafilm trong vòng 30 phút ghi lại số
muỗi đốt máu, kết quả điển hình tỷ lệ đốt máu là 53 ±0,8% (SE) của
Doreen J. Siria, Elis P. A. Batista và c.s, (2018). Đã tiến hành đánh giá phương pháp cho ăn máu qua màng polytetrafluoroethylene (PTFE) ở các loài