3. Ý nghĩa của đề tài
3.2. Kết quả về số mẫu xét nghiệm và thu nhận ge nH của chó mắc bệnh Care
3.2.1. Kết quả tách chiết RNA tổng số từ các mẫu xét nghiệm
Với 161 mẫu bệnh phẩm là hỗn hợp gỉ mắt, gỉ mũi của chó mắc bệnh được thu bằng tăm bông vô trùng. Hỗn hợp này được thôi ra nước sạch trước khi tách chiết RNA tổng số.
Sau đó, chúng tôi đã tiến hành tách chiết RNA tổng số mang gen của các chủng CDV thu thập được theo quy trình của phòng Miễn dịch học - Viện Công nghệ sinh học như đã trình bày ở mục 2.3.2.4.
Kết quả điện di kiểm tra sản phẩm tách RNA trên gel agarose 1% được thể hiện qua hình 3.6.
Hình 3.6. Sản phẩm điện di RNA các chủng CDV thu thập được
M: Marker, Fermentas, Mỹ
Giếng số 1: RNA mang gen mã hóa của chủng CDV ký hiệu CDVHN6
Giếng số 2: RNA mang gen mã hóa của chủng CDV ký hiệuCDVHN7 Giếng số 3: RNA mang gen mã hóa của chủng CDV ký hiệuCDVHN9 Giếng số 4: RNA mang gen mã hóa của chủng CDV ký hiệuCDVHN15 Giếng số 5: RNA mang gen mã hóa của chủng CDV ký hiệuCDVHN16
Giếng số 7: RNA mang gen mã hóa của chủng CDV ký hiệuCDVHN36 Giếng số 8: RNA mang gen mã hóa của chủng CDV ký hiệuCDVHN64 Giếng số 9: RNA mang gen mã hóa của chủng CDV ký hiệuCDVHN66 Kết quả điện di cho thấy, 9 chủng CDV sử dụng trong phản ứng tách RNA tổng số đều thể hiện rõ nét ở tất cả các giếng. Tuy nhiên, tại vị trí giếng 1 và giếng 2 hiển thị độ sáng dàn đều (sáng nhất) chứng tỏ ở hai giếng này có rất nhiều đoạn RNA có độ dài ngắn khác nhau.
Sản phẩm này được chúng tôi đem tiến hành chuyển đổi từ RNA tổng số của virus sang sợi cDNA bằng mồi xác suất (hexamer) sử dụng bộ kit và enzyme Maxima Reverse Transcriptase của hãng Fermentas.
3.2.2. Kết quả lựa chọn sản phẩm và chuyển đổi sang sợi cDNA
Chúng tôi đã lựa chọn được 2 chủng CDV ở vị trí giếng 1 và giếng 2 hiển thị độ sáng sáng nhất (ký hiệu CDVHN6 và CDVHN7) để tiến hành tách chiết RNA như sau:
Bảng 3.7. Các mẫu virus CDV sử dụng trong nghiên cứu STT Tên mẫu Giống chó Địa điểm thu mẫu Tuổi Bệnh phẩm 1 CDVHN6 Becgie Hà Đông - Hà Nội 3 tháng Gỉ mắt + gỉ mũi 2 CDVHN7 Pitbull Nam Từ Liêm
- Hà Nội 6 tháng Gỉ mắt + gỉ mũi Các chủng lựa chọn được đặt tên là CDVHN6 và CDVHN7, đều là chó phát hiện nhiễm CDV ở lứa tuổi dưới một năm tuổi.
RNA tổng số sau khi tách chiết được bảo quản ở - 80°C cho tới khi được dùng làm khuôn cho phản ứng chuyển đồi cDNA. Trước khi thực hiện các thí nghiệm tiếp theo RNA tổng số được kiểm tra chất lượng bằng cách đo nồng độ axit nucleic bằng máy Nanodrop (Nhật Bản) với bước sóng 260nm. Hai mẫu
trong nghiên cứu này là 2 mẫu có chất lượng RNA tốt (nồng độ khá cao, ít tạp chất). Chất lượng RNA tổng số sau điện di được thể hiện ở bảng 3.8.
Bảng 3.8. Nồng độ RNA tổng sốđược đo bằng máy Nanodrop STT Tên mẫu Nồng độ (ng/µl) A260/A280
1 CDVHN6 165 1.93
2 CDVHN7 202 2.01