3.1.1. Đối tượng nghiên cứu
Cây trà hoa vàng ở giai đoạn 3 năm tuổi, chiều cao trung bình 80 -100cm. Cây trà hoa vàng tại vườn ươm cây giống, chiều cao trung bình 25 - 30cm.
Mật độ tại vườn sản xuất Trà hoa vàng 3 năm tuổi 1m. Tại vườn ươm là 5cm.
3.1.2. Phạm vi nghiên cứu
Bệnh thán thư hại trà hoa vàng tại Huyện Ba Chẽ, Tỉnh Quảng Ninh.
3.2. Thời gian và địa điểm nghiên cứu
-Thời gian: 15/2/2020 – 31/5/2020.
-Địa điểm: Xã Đạp Thanh, Huyện Ba Chẽ, Tỉnh Quảng Ninh.
3.3. Nội dung nghiên cứu
- Điều tra, xác định thành phần bệnh hại trên cây trà hoa vàng tại Huyện Ba Chẽ, Tỉnh Quảng Ninh.
- Xác định nguyên nhân gây bệnh thán thư hại trà hoa vàng tại Huyện Ba Chẽ, Tỉnh Quảng Ninh.
- Nghiên cứu diễn biến bệnh thán thư hại trà hoa vàng tại Xã Đạp Thanh, Huyện Ba Chẽ, Tỉnh Quảng Ninh.
- Đánh giá hiệu lực của một số loại thuốc hóa học đến tỉ lệ bệnh thán thư hại Trà hoa vàng tại Huyện Ba Chẽ, Tỉnh Quảng Ninh.
3.4. Phương pháp nghiên cứu
3.4.1. Nội dung 1. Điều tra, xác định thành phần bệnh hại trên cây trà hoa vàng tại Huyện Ba Chẽ, Tỉnh Quảng Ninh. vàng tại Huyện Ba Chẽ, Tỉnh Quảng Ninh.
Việc điều tra được tiến hành theo phương pháp của Viện Bảo vệ thực vật (1997), Quy chuẩn Quốc gia QCVN-01-38:2010/BNNPTNT ngày 12/10/2010 của Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn về điều tra và phát hiện dịch hại trên cây trồng, QCVN08927:2013/BNNPTNT và QCVN9228:2013/BNNPTNT dùng cho điều tra cây lâm nghiệp.
Tại Xã Đạp Thanh,Huyện Ba Chẽ. Thu thập các bộ phận của cây trồng điều tra có triệu chứng bị bệnh gây hại.
Trong quá trình điều tra, tiến hành quan sát triệu chứng của các loại bệnh hại sau đó thu thập riêng rẽ từng đối tượng cho vào túi thu mẫu đã chứa hóa chất loại trừ độ ẩm và ghi đầy đủ các thông tin cần thiết như vị trí bị hại, triệu chứng cây bị hại, ngày thu mẫu, người thu mẫu cho vào thùng mát có chứa đá gel mang về phòng thí nghiệm. Tại phòng thí nghiệm các loài bệnh hại sẽ được phân lập, làm thuần phục vụ công tác giám định bệnh hại.
Ngoài các điểm điều tra cố định, tiến hành điều tra bổ sung ở các điểm khác. Điều tra bổ sung được thực hiện vào các giai đoạn phát triển của cây hoặc thời gian phù hợp cho các loại bệnh hại phát sinh và gây hại.
Các thông tin cần thu thập phản ánh được hiện trạng trồng, sản xuất cũng như tình hình bệnh hại trên cây trà hoa vàng tại Ba Chẽ.
Thời gian và chu kỳ điều tra định kỳ 1 tháng/lần trên các vườn trà hoa vàng bị bệnh, Chỉ tiêu theo dõi được tính theo số lần điều tra.
3.4.2. Nội dung 2. Xác định nguyên nhân gây bệnh thán thư hại trà hoa vàng tại Huyện Ba Chẽ, Tỉnh Quảng Ninh. vàng tại Huyện Ba Chẽ, Tỉnh Quảng Ninh.
Phương pháp giám định tác nhân gây hại
Hoạt động chẩn đoán, giám định tên khoa học của các đối tượng dịch hại trên cây Trà hoa vàng sẽ được tiến hành tại Viện Bảo vệ thực vật bằng các phương pháp sau:
- Bằng phương pháp hình thái học: Các loài bệnh hại sẽ được giám định theo phương pháp hình thái học dựa trên các tài liệu tùy thuộc vào từng nhóm đối tượng dịch hại như: Barnett and Hunter, 1998; Bradbury, 1986; Burgess et al., 1994; Crous and Braun, 2003; Cummins and Hiratsuka, 1996; Drenth and Guesrt, 2004; Ellis, 1971, 1976; Roger 1954; Robert and Gunnell, 1992; Williams và Watson 1988, 1990; Watson, 2007, Williams 2004; Waterhouse, 1968; Đặng Vũ Thị Thanh và Hà Minh Trung, 1999, 2001b; Nguyễn Vũ Thanh và cộng sự, 1983; Nguyễn Vũ Thanh, 2002; Truong et al., 2008, 2010, v.v.
- Phương pháp xác định tác nhân gây bệnh (theo phương pháp của Burgess và cộng sự, 2008): Thu các mẫu có triệu chứng điển hình từ các vùng trồng Trà hoa vàng đem về phòng thí nghiệm, mẫu được rửa sạch, các bộ phân thân gốc bị bệnh được cắt thành các miếng nhỏ được khử trùng bằng ethanol và rửa sạch bằng nước vô trùng, cấy lên môi trường PDA, sau đó cấy truyền sang môi trường WA và PDA. Nấm được giám định dựa vào các đặc điểm hình thái, theo khóa phân loại của Domsch và cộng sự (2008).
- Lây nhiễm nhân tạo: Phân lập nuôi cấy vi sinh vật từ các mẫu cây Trà hoa vàng bị bệnh. Sử dụng các nguồn vi sinh vật đã phân lập được lây nhiễm cho cây con Trà hoa vàng khỏe. Thí nghiệm lây bệnh thực hiện trong nhà lưới của Viện Bảo vệ thực vật, mỗi một công thức là 50 cây. Tiến hành tưới vào gốc dung dịch 5 × 106 bào tử/ml cho 1 chậu, công thức đối chứng được lây bệnh bằng nước cất. Chăm sóc và theo dõi thí nghiệm hàng ngày, ghi nhận sự xuất hiện triệu chứng biểu hiện sau khi lây nhiễm nhân tạo 5, 10, 15, 20, 25 và 30 ngày. So sánh triệu chứng bệnh xuất hiện trong các công thức lây bệnh với triệu chứng bệnh thu thập được từ ngoài tự nhiên. Tái phân lập vi sinh vật từ cây biểu hiện triệu chứng bệnh và so sánh với vi sinh vật đã sử dụng lây nhiễm nhân tạo.
phương pháp bố trí thí nghiệm
Vườn Trà hoa vàng điều tra là những vườn đại diện cho từng tuổi cây và từng địa hình vườn trồng tại Huyện Ba Chẽ, Tỉnh Quảng Ninh:
-Vườn ươm -Vườn sản xuất
Mỗi vườn điều tra 5 điểm chéo góc trong 1 ô thí nhiệm.
-Trong mỗi điểm tại vườn sản xuất điều tra 1 cây, mỗi cây điều tra 4 hướng chéo nhau
-Tại vườn ươm mỗi điểm điều tra 10 cây Điều tra định kì 1 tháng 1 lần.
Chỉ tiêu theo dõi:
TLB (%) = × 100
Trong đó: TLB (%): Tỷ lệ bệnh. A: Tổng số lá biểu hiện triệu chứng. B: Tổng số lá điều tra
3.4.4. Nội dung 4. Đánh giá hiệu lực của một số loại thuốc hóa học đến tỉ lệ bệnh thán thư hại Trà hoa vàng tại Huyện Ba Chẽ, Tỉnh Quảng Ninh bệnh thán thư hại Trà hoa vàng tại Huyện Ba Chẽ, Tỉnh Quảng Ninh
Đất làm thí nghiệm
Khu đất thí nghiệm có hàm lượng dinh dưỡng trung bình, độ chua trung tính. Đất có tầng đất dày có chế độ thấm nước và thoát nước tốt, nhiều mùn, tơi xốp, đủ nước, nhiệt độ, không khí điều hoà thuận lợi cho các quá trình lý hoá xảy ra trong đất.Địa hình thí nghiệm tương đối đồng đều, ít bị tác động bởi các điều kiện ngoại cảnh bất thuận.
Phương pháp bố trí thí nghiệm:
Thời gian bố trí phun thuốc vào ngày 9/3 tại vì trong thời gian này là có những đợt mưa xuân, nhiệt độ ẩm, lượng mưa khá nhiều, là thời điểm mà
bệnh thán thư hại Trà hoa vàng xuất hiện dày đặc và phát triển nhanh, do đó có thể thấy rõ hiệu lực của thuốc rõ nhất.
Thí nghiệm được bố trí theo khối ngẫu nhiên hoàn chỉnh, gồm 5 công thức, diện tích mỗi ô thí nghiệm là 120 m2 ( 10m x 12m), mỗi ô thí nghiệm có 30 cây, mỗi công thức thí nghiệm lặp lại 3 lần, tổng diện tích thí nghiệm là 1500 m2.Thí nghiệm thuốc được phun 1 lần vào ngày 9/3/2020. Các công thức thí nghiệm bao gồm:
CT1: Thiophanate methyl 70% (Top 70WP do Insecticides India Ltd Ấn Độ sản xuất, và Công Ty Cổ Phần Nông Dược HAI đăng kí và phân phối tại Việt Nam) liều lượng 320-400 lít nước thuốc/ha, phun ướt đều cây, nồng độ 0.3%.
CT2: Mancozeb+ Metalaxyl (Ridomil Gold 68WP do công ti sengeta sản xuất, phân phối bởi công ty cổ phần khử trùng VFC Việt Nam), Liều lượng 400-500 lit nước thuốc/ha, nồng độ 0.1%.
CT3: Valydamycin (Validacin 5L do hãng Arysta Life Science sản xuất), liều lượng 0,7-1L/ha (pha 10-15ml cho 10 lít nước, phun cho 180-200m²).
CT4: Chlorothalonil ( Daconil 500SC sản xuất bới SDS Biotech K.K Tokyo Japan. Được phân phối bởi Vithaco), liều lượng 400-600 lít nước thuốc/ha, nồng độ 0.1%.
CT5: đối chứng (phun nước lã).
Sơ đồ bố trí thí nghiệm NL1 CT1 CT2 CT4 CT3 CT5 NL2 CT3 CT4 CT5 CT2 CT1 NL3 CT1 CT3 CT4 CT2 CT5 GHI CHÚ: NL: nhắc lại CT: công thức
Hiệu lực của thuốc trừ sâu được tính theo công thức Henderson-Tilton
E= 1 Ta Cb Tb Ca -
Trong đó: E: hiệu lực của thuốc tính bằng %; Ta: Số cá thể sâu sống ở ô
thí nghiệm sau xử lý; Tb: Số cá thể sâu sống ở ô thí nghiệm trước xử lý; Ca:
Số cá thể sâu sống ở ô đối chứng sau xử lý; và Cb: Số cá thể sâu sống ở ô đối chứng trước xử lý.
Quy trình kỹ thuật: Việc điều tra được tiến hành theo phương pháp của Viện Bảo vệ thực vật (1997), Quy chuẩn Quốc gia QCVN-01- 38:2010/BNNPTNT ngày 12/10/2010 của Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn về điều tra và phát hiện dịch hại trên cây trồng, QCVN08927:2013/BNNPTNT và QCVN9228:2013/BNNPTNT dùng cho điều tra cây lâm nghiệp.
3.5. Phương pháp xử lý số liệu:
PHẦN 4
KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
4.1. Thành phần bệnh hại trà hoa vàng
Kết quả điều tra thành phần bệnh hại trên trà hoa vàng tại Xã Đạp Thanh, Huyện Ba Chẽ, Tỉnh Quảng Ninh, đã ghi nhận có 8 bệnh hại chính: bệnh bệnh thán thư, bệnh héo rũ chết vàng, bệnh đốm rong, bệnh khô đọt, bệnh khô đỏ lá, bệnh cháy nắng, bệnh héo rũ gốc mốc trắng, bệnh muội đen. Mỗi loại bệnh hại có mức độ gây hại khác nhau trong đó bệnh bệnh thán thư, có mức độ phổ biến nhất.
Theo bảng 4.1 cho thấy mức độ gây hại của các loại bệnh hại là khác nhau và có sự chênh lệch lớn. Mức độ gây hại của bệnh thán thư hại trà hoa vàng là bệnh nặng và nghiêm trọng. Trong thời tiết tháng 3, tháng 4 lượng mưa nhiều, kéo dài rất thích hợp cho nấm Colletotrichum camelliae phát triển và hoạt động mạnh, vì vậy mà cây trà hoa vàng mắc bệnh thán thư rất nhiều. Số lá bị bệnh tăng lên theo từng kì điều tra khá cao.
Ngoài bệnh thán thư hại Trà hoa vàng ra còn có một số bệnh mà trà hoa vàng có tỉ lệ mắc khá cao và phổ biến như: bệnh đốm rong, bệnh khô đọt, cùng có mức độ gây hại thuốc mức bệnh hại, nghiêm trọng. Bệnh khô đọt xuất hiện cũng rất phổ biến, nhất là trong những ngày cuối tháng 2 và cuối tháng 5.
Bảng 4.1: Thành phần bệnh hại trà hoa vàng tại Ba Chẽ, Quảng Ninh
Số thứ
tự
Tên bệnh Tác nhân gây bệnh Bộ phận bị bệnh Mức độ gây hại 1 Bệnh thán thư Colletotrichum camelliae Lá +++ 2 Bệnh héo rũ chết vàng Fusarium oxysporum Rễ + 3 Bệnh đốm rong Cephaleuros virescens Lá ++ 4 Bệnh khô đọt Phyllosticta gemmiphliae Mầm non +++ 5 Bệnh khô đỏ lá Guignardia camelliae Lá + 6 Bệnh cháy nắng Sunburn Lá ++ 7 Bệnh héo rũ gốc mốc trắng Sclerotium rolfsii Sacc. Thân +
5 Bệnh muội đen Meliola camelliae Lá, mầm non +
Ghi chú:
+++: bệnh nặng, nghiêm trọng ++: bệnh phát sinh mức độ vừa +: bệnh nhẹ hoặc ít gặp
4.2. Xác định nguyên nhân gây bệnh thán thư hại trà hoa vàng
Kết quả theo dõi cho thấy, hầu hết cây trà hoa vàng 3 năm tuổi đều bị bệnh thán thư. Lá bị bệnh nhiều nhất vào mùa mưa, mưa nhiều độ ẩm cao tạo
điều kiện cho nấm phát triển. Bệnh thán thư ở cây giống trong vườn ươm tỉ lệ mắc bệnh ít hơn tuy nhiên đa số các cây đều bị.
4.2.1. Triệu chứng bệnh thán thư hại trà hoa vàng
Bệnh phổ biến gây hại trên lá, cũng có thể gây tác hại nhất định với chồi non, chồi và nụ hoa. Trường hợp nghiêm trọng có thể khiến chồi bị khô chết. Bệnh thường bắt đầu ở đầu lá, mép lá và lan dần vào giữa lá. Các tổn thương ban đầu có màu nâu, sau chuyển nâu xám sang màu trắng, với các hạt nhỏ màu nâu sẫm (thân nấm gây bệnh) rải rác ở mặt trước của lá.
Hình 1: Lá trà hoa vàng bị bệnh thán thư
4.2.2. Nguyên nhân gây bệnh thán thư
Trong nghiên cứu, nấm Colletotrichum sp đã được xác định là nguyên nhân gây bệnh thán thư trên cây Trà hoa vàng ở Việt Nam. Nấm
Colletotrichum sp gây bệnh phổ biến trên lá, cũng có thể gây bệnh đối với chồi non, chồi và nụ hoa. Bệnh thường bắt đầu ở đầu lá, mép lá và lan dần vào giữa lá.
4.3.Nghiên cứu các đặc điểm sinh học của bệnh thán thư (Colletotrichum camelliae) gây hại trên cây Trà hoa vàng
Các mẫu lá trà bị bệnh đem về phòng được phân lập trên môi trường WA (Water Agar) và được làm thuần trên môi trường PDA (Potato Dextrose
Agar) và điều kiện pH 6,0. Sau khi đã xác định được tác nhân gây hại chính trên lá trà hoa vàng là nấm Colletotrichum camelliae gây bệnh thán thư hại trên lá. Nguồn nấm sau khi làm thuần sẽ được nhân nuôi trên môi trường PDA trong điều kiện nhiệt đội 25-28o C và được chiếu sáng liên tục trong 7 ngày. Kết quả nghiên cứu về đặc điểm hình thái của bào tử và hình dạng tản nấm Colletotrichum camelliae (bảng 2) cho thấy. Bào tử nấm trong suốt, có hình trụ, hai đầu tù hơi tròn, kích thước dao động từ 10,9-13,6 x 3,4-4,9 µ. Màu sắc tản nấm có màu trắng hồng đến xám, hình tròn. Sơi nấm thon dài phân nhánh, không màu đến nâu đậm đường kính sợi nấm 2,0-2,5 µ. Hình ảnh nấm bệnh thán thư Colletotrichum camelliae (hình 1).
Bảng 4.2: Đặc điểm hình thái của nấm thán thư gây hại lá trà hoa vàng
Colletotrichum camelliae
Chỉ tiêu Bào tử Sợi nấm Tản nấm
Kích thước (µm)
10,9-13,6 x 3,4-4,9 2,0-2,5 -
Màu sắc Trong suốt Không màu đến
nâu đậm
Trắng hồng, xám
Hình dạng Trụ, 2 đầu hơi tù Sợi phân nhánh Hình tròn
a. Bào tử và tản nấm C. camelliae
b. Mặt trước đĩa petri tản nấm c. Mặt sau đĩa petri tản nấm
d. Sợi nấm và đĩa cành nấm
4.4. Nghiên cứu diễn biến của bệnh thán thư hại trà hoa vàng tại Huyện Ba Chẽ, Tỉnh Quảng Ninh Ba Chẽ, Tỉnh Quảng Ninh
Theo dõi diễn biến bệnh thán thư trên cây trà hoa vàng có thể thấy bệnh liên quan mật thiết đến nhiệt độ, độ ẩm. Thông thường nhiệt độ thích hợp cho bệnh phát triển là 25-28˚C khi nhiệt độ thích hợp, độ ẩm tăng, đặc biệt gặp mưa có thể thúc tiến sự lây lan và phát triển dịch bệnh.
Bệnh thán thư trên cây Trà hoa vàng có xu hướng tăng qua các tháng. tỷ lệ bệnh thán thư còn tăng nhanh không có xu hướng giảm qua các tháng vì vào mùa mưa ẩm độ không khí cao nên nấm Colletotrichum sp phát triển rất nhanh làm cho những vết bệnh đã có sẵn dễ dàng lây lan rộng. Đặc biệt ở vườn sản xuất tỉ lệ bệnh có xu hướng ngày càng tăng và tăng nhanh qua các tháng đặc biệt là các tháng có lượng mưa nhiều và mưa liên tục như tháng 3 và tháng 4. Trà hoa vàng ở trong vườn ươm có tỉ lệ mắc bệnh thấp hơn vườn sản xuất tuy nhiên cũng mắc bệnh ở mức cao. Tỉ lệ bệnh thán thư tăng qua các tháng tại vườn ươm cũng thấp hơn vườn sản xuất ( hình 3).
Từ hình 3 cho thấy tỉ lệ mắc bệnh ở tháng 5 là cao nhất ở cả 2 vườn ươm và vườn sản xuất, đối với vườn ươm là hơn 35%, vườn sản xuất là 40%. Tuy nhiên từ giữa tháng 4 đến cuối tháng 5 tỉ lệ bệnh mắc bệnh thán thư không tăng nhiều, do vào tháng 5 đã là mùa hè, nhiệt độ tăng lên, mưa cũng ít đi làm độ ẩm giảm dẫn tới bệnh thán thư không phát triển nhanh và mạnh như ở tháng 2 và tháng 3.
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 15/2 15/3 15/4 15/5 30/5 Vườn sản xuất Vườn ươm
Hình 3: Diễn biễn bệnh thán thư tại Quảng Ninh năm 2020 Chú thích:
Cột dọc: % Cột ngang: ngày
4.5. Kết quả nghiên cứu các biện pháp hóa học trong phòng trừ bênh thán thư (Colletotrichum camelliae) trên cây trà hoa vàng tại Huyện Ba Chẽ