3.3.4.1. Xác định độ ẩm bằng phương pháp sấy đến khối lượng không đổi theo TCVN 10788:2015 [4]
- Nguyên tắc: Dùng nhiệt để làm bay hơi nước có trong mẫu. Từ chênh lệch khối lượng trước và sau khi sấy, ta tính được độ ẩm của mẫu cam.
- Cách tiến hành:
Cân 10 g mẫu cam, sau đó cho vào đĩa petri và sấy ở nhiệt độ 105°C trong thời gian 3 - 5 giờ đến khi khối lượng không đổi sau 3 lần cân. Tiến hành 3 lần.
- Tính kết quả:
Hàm lượng nước (W) được xác định theo công thức sau: W = (M1− M2) . 100
M1 (%)
Trong đó:
+ M1 (g): Khối lượng cốc sứ và mẫu trước khi sấy. + M2 (g): Khối lượng cốc sứ và mẫu sau khi sấy
3.3.4.2. Phương pháp xác định hàm lượng chất khô hòa tan bằng chiết quang kế theo TCVN 4414 – 1987 [5]
- Nguyên tắc:
Dựa vào nguyên lý khúc xạ ánh sáng, khi ánh sáng đi từ môi trường không khí vào một môi trường khác (chất lỏng) tia sáng sẽ bị lệch đi (bị khúc xạ) nếu chất lỏng là một dung dịch nước hòa tan (đường, muối). Dựa trên độ lệch của tia sáng ta có thể xác định được nồng độ chất khô hòa tan. Đọc hàm lượng phần trăm trực tiếp trên thang chia độ của khác xạ kế ở 20oC.
- Dụng cụ và vật liệu: Khúc xạ kế phòng thí nghiệm, cân, chày cối sứ, pipet, nước cất.
- Cách tiến hành:
+ Trước khi tiến hành cần kiểm tra độ chính xác của khúc xạ kế: Điều chỉnh về điểm 0 của khúc xạ kế bằng nước cất. Lau khô mặt lăng kính và tiến hành đo mẫu.
+ Cân 2g mẫu bằng cân kĩ thuật và chuyển toàn bộ mẫu vào cối sứ. Thêm 16ml nước và nghiền cùng mẫu.
Lọc toàn bộ đung dịch thu được rồi nhỏ 2 - 3 giọt lên lăng kính và đo. Đọc kết quả và ghi lại. Lập lại thí nghiệm 2 lần.
- Tính kết quả:
Hàm lượng chất khô hòa tan (X) tính bằng % công thức: X = 9a
Trong đó:
+ 9: hệ số pha loãng.
+ a: chỉ số khúc xạ đo được.
Kết quả là trung bình cộng kết quả của 2 lần xác định song song. Chênh lệch kết quả giữa hai lần xác định không vượt quá 0,2%.
3.3.4.3. Phương pháp xác định hàm lượng vitamin C [17].
- Nguyên tắc: Acid ascorbic có tính khử mạnh được oxi hóa bằng dung dịch iot với chỉ thị là dung dịch tinh bột:
Chừng nào mà vitamin C còn hiện diện trong dung dịch, thì triiođua sẽ được chuyển thành ion iođua.
Tuy nhiên, khi tất cả vitamin C đã bị oxy hóa, thì iốt và triiođua sẽ hiện diện trong dung dịch và phản ứng với tinh bột tạo nên một hỗn hợp màu xanh đen. Màu xanh đen là điểm dừng cho phản ứng chuẩn độ.
- Chuẩn bị dung dịch:
Dung dịch chỉ thị tinh bột 0,5%:
+ Cho 0,5 g tinh bột hòa tan vào 100 ml nước cất nóng gần sôi. + Hòa tan hoàn toàn và để dung dịch nguội trước khi sử dụng. Dung dịch iốt:
+ Hòa tan 5g KI vào 1 ít nước, sau đó cho 0,635g I2 vào, lắc nhẹ. Sau đó định mức nước cất đến 500ml.
Dung dịch HCl 2%:
+ Lấy 10ml dung dịch HCl 37%, cho vào 185ml nước cất ta được dung dịch HCl 2% theo công thức C1V1 = C2V2
Dung dịch chuẩn vitamin C:
Cho vào cối sứ 2g nguyên liệu và 10ml HCl 2%, nghiền nhỏ, chất nước chiết. Cho thêm 10ml HCl 2% vào cối sứ, tiếp tục nghiền, chắt nước chiết sang cốc. Lập lại lần thứ 3. Sau đó, dùng 10ml HCl 2% tráng lại cối sứ. Dùng nước cất định mức đến 50ml. Để bình trong bóng tối khoảng 10 phút, sau đó lọc lấy dịch trong.
- Tiến hành:
+ Lấy 10ml dung dịch chuẩn vitamin C vào bình nón 100ml + Thêm 10 giọt dung dịch hồ tinh bột 0,5 %, lắc nhẹ.
+ Chuẩn độ dung dịch bằng I2 0,01N cho đến điểm dừng phản ứng, khi thấy dấu hiệu đầu tiên của màu xanh lam.
+ Ghi nhận vạch thể tích dung dịch iốt trên buret. Lượng iốt đã dùng cho chuẩn độ chính là thể tích dung dịch iốt ban đầu trừ đi dung dịch sau chuẩn độ.
+ Làm lại thí nghiệm chuẩn độ ít nhất 2 lần. Các kết quả chấp nhận sai khác 0,1 ml.
- Tính toán nồng độ vitamin C:
X = Vc . V . 0.00088 . 100 . 1000
Vf.g (mg%)
Trong đó:
X: Hàm lượng vitamin C có trong nguyên liệu (%mg) Vc: Số ml dung dịch I2 0,01N chuẩn độ.
Vf: Số ml dung dịch mẫu đem phân tích (10ml) V: Dung tích mẫu pha loãng (50ml)
g: Số gram nguyên liệu đem phân tích (2g)
0.00088: Số g vitamin C tương đương với 1ml I2 0,01N
3.3.4.4. Phương pháp xác định acid hữu cơ tổng số theo TCVN 4589:1988 [6]
- Phương pháp: Acid hữu cơ dễ hòa tan trong nước, vì vậy chuẩn độ trực tiếp các axit có trong mẫu bằng dung dịch natri hydroxit với chỉ thị phenolphtalein có thể tính được lượng axit hữu cơ có trong mẫu.
- Hóa chất: Natri hydroxit 0,1N, phenolphtalein 0,1% trong cồn 60o.
- Dụng cụ: Cân phân tích, chày cối sứ, bình định mức, bình tam giác, buret, pipet. - Cách tiến hành:
+ Pha dung dịch NaOH 0,1N từ NaOH rắn 96%. Cân 2,083g NaOH, dùng nước cất định mức lên 500ml. Ta thu được dung dịch NaOH 0,1.
+ Pha 60ml cồn 96 và 40ml nước cất ta được cồn 600. Cân 0,1g phenolphtalein, cho vào 100ml cồn 60o, lắc nhẹ cho phenolphtalein tan hết. Ta thu được dung dịch phenolphtalein 0,1%.
+ Cân 10 - 20 g mẫu cam chính xác đến 0,001g. Dùng nước cất chuyển toàn bộ lượng mẫu vào bình tam giác vào bình tam giác dung tích 250ml, thêm nước đến khoảng 150ml, dùng bể ổn nhiệt đun cách thủy 15 phút. Sau 15 phút, làm nguội, thêm nước đến vạch 250ml, lắc kỹ, để lắng. Lọc mẫu thu dịch lọc.
+ Hút 25ml dịch lọc vào bình tam giác dung tích 100ml, thêm 3 giọt phenolphtalein 0,1%, sau đó chuẩn độ bằng NaOH 0,1N đến màu hồng nhạt bền vững trong 30 giây.
+ Tính kết quả là trung bình cộng 2 lần xác định song song. Tính chính xác đến 0,1%. Chênh lệch giữa kết quả 2 lần xác định song song không được lớn hơn 0,02%.
- Cách tính kết quả: X = V.K.V2.100 V1.m (mg%) Trong đó: + V: Là số ml NaOH 0,1N dùng để chuẩn độ; + V1: Là số ml dung dịch đã hút để chuẩn; + V2: Dung tích bình định mức (ml); + K: Là hệ số acid malic, K = 0,0067; + m: Là khối lượng mẫu đem chuẩn độ (g).
3.3.4.5. Phương pháp xác định hàm lượng đường tổng số theo phương pháp Bertrand TCVN 4074-2009 [7]
- Nguyên tắc: Chiết đường tổng từ mẫu bằng nước nóng, dùng axit clohydric thủy phân thành đường glucoza được xác định qua các phản ứng với dung dịch Fehling, sắt (III) sunfat và kali permanganat.
- Dụng cụ: Cân phân tích, chày cối sứ, bình định mức, bình tam giác, buret, pipet, dụng cụ đo nhiệt độ, bể ổn nhiệt.
- Hóa chất: KMnO4 0,02M, sắt (III) sulfat, Kẽm sulfat, NaOH 20%, NaOH 1%, NaOH 1M, HCl đậm đặc, phenolphtalein 1% trong cồn 60o, đồng sulfat, axit sulfuric, kali natri tartrat.
- Cách tiến hành:
+ Pha dung dịch KMnO4 0,02M: Cân 1,6g KMnO4 hòa tan trong 50ml nước nóng. Sau đó định mức lên 500ml. Dung dịch được bảo quản trong bình thủy tinh tối màu.
+ Pha dung dịch Fe2(SO4)3: Cân 25g Fe2(SO4)3 hòa tan trong 200ml nước cất, thêm từ từ 50ml H2SO4 đậm đặc, hòa tan, để nguội và thêm nước đến 500ml.
+ Dung dịch NaOH 20%: Cân 20g NaOH tòa tan trong nước cất, định mức lên 100ml.
+ Dung dịch NaOH 1%: Cân 1g NaOH hòa tan trong nước cất, định mức lên 100ml.
+ Dung dịch NaOH 1M từ NaOH rắn 96%: Cân 20,83g NaOH trong nước cất, định mức lên 500ml.
+ Dung dịch Phenolphtalein 1% trong cồn 60oC: Đong 60ml cồn 96oC với 40ml nước cất, rồi hòa tan cùng 1g phenolphthalein.
+ Fehling A: hòa tan 34,64g đồng sulfat vào nước cất bình định mức 500ml, thêm nước đến vạch. Nếu không tan hết cho thêm vài giọt acid sunfuric, lắc đều.
+ Fehling B: Cân 137g kali natri tartrat hòa tan với 200ml nước nóng. Cân 60g NaOH hòa tan với 100ml nước cất. Trộn 2 dung dịch với nhau, thêm nước cất lên đến 500ml.
+ Dung dịch kẽm sunfat (ZnSO4) 1M. Cân 28,7g ZnSO4 vào nước cất, định mức lên 100ml.
+ Chuẩn bị mẫu: Cân 2g mẫu cam chính xác đến 0,001g. Dùng nước cất chuyển toàn bộ lượng mẫu vào bình tam giác dung tích 250ml, thêm nước đến khoảng 150ml, dùng bể ổn nhiệt đun cách thủy 15 phút. Sau 15 phút, làm nguội, lắc kỹ, để lắng. Lọc mẫu thu dịch lọc. Để kết tủa loại bỏ những chất không phải là đường, thêm vào bình 10 ml dung dịch kẽm sulfat. Lắc đều, rồi cho tiếp một thể tích dung dịch natri hydroxit 1M để trung hòa thể tích dung dịch kẽm sulfat, sử dụng chất chỉ thị phenolphtaein trong một lần thử nghiệm riêng biệt. Lắc đều dung dịch trong bình và thêm nước đến vạch 250ml, lắc đều và để yên dung dịch 10phút rồi lọc qua giấy lọc khô, sạch. Loại bỏ phần dịch lọc ban đầu đã dùng để tráng rửa bình.
+ Lấy chính xác 50 ml dung dịch trên cho vào bình định mức dung tích 250 ml thêm 50 ml nước, 7 ml dung dịch axit clohydric. Cắm dụng cụ đo nhiệt độ vào bình và đem đun trong nồi cách thủy, giữ nhiệt độ dung dịch trong bình khoảng 700C trong 5 min. Lấy bình ra, làm nguội nhanh dưới vòi nước. Trung hòa dung dịch sau thủy phân bằng dung dịch natri hydroxit 20 % và NaOH 1% với chỉ thị phenolphtalein đến màu hồng. Thêm nước đến vạch, lắc đều.
+ Cho lần lượt 25 ml dung dịch Fehling A và 25 ml dung dịch Fehling B vào bình tam giác dung tích 250 ml lắc đều. Thêm chính xác 25 ml dung dịch mẫu, lắc đều, đun sôi 3 phút trên bếp điện tính từ lúc bắt đầu sôi. Lấy ra để lắng kết tủa. Dung
dịch trong bình phải có màu xanh đậm của đồng sulfat, nếu không phải thực hiện với lượng dung dịch mẫu ít hơn.
+ Khi kết tủa đồng oxit đã lắng xuống, thì lọc gạn phần nước trên kết tủa trong bình nón vào phễu lọc, sử dụng bình hút lọc chân không. Cho nước đun sôi vào bình nón và tiếp tục lọc gạn cho đến khi nước trong bình nón hết kiềm tính. Trong khi lọc luôn giữ một lớp nước trên mặt kết tủa để tránh đồng oxit tiếp xúc với không khí.
+ Cho vào bình nón khoảng 20 ml dung dịch sắt (III) sulfat để hòa tan kết tủa đồng oxit. Dùng đũa thủy tinh khuấy nhẹ cho tan kết tủa. Chuẩn độ lượng sắt (II) hình thành trong bình bằng dung dịch kali pemangnat 0,02M, cho tới khi dung dịch chuyển màu hồng sẫm bền vững trong 1 phút.
Tính kết quả:
X = 𝑚1 . 𝑉1 . 𝑉2 . 100
𝑚 . 𝑉3 . 𝑉4 . 1000(%)
Trong đó (phụ lục 2):
m1 là khối lượng glucoza tương ứng, tính bằng miligam (mg);
V1 là thể tích thể tích bình định mức để khử protit, tính bằng mililit (ml); (250ml)
V2 là thể tích thể tích bình đinh mức thủy phân, tính bằng mililit (ml); (250ml)
V3 là thể tích mẫu để lấy thủy phân, tính bằng mililit (ml); (50ml)
V4 là thể tích mẫu lấy đem phản ứng với fehling, tính bằng mililit (ml); (25ml)
m là khối lượng mẫu, tính bằng gam (g); 1000 là hệ số quy đổi gam thành miligam;
3.3.4.6. Tiến hành xử lý số liệu trên phần mềm SPSS 20.0: phương pháp phân tích
PHẦN 4
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN