II. THỰC HÀNH 1 Dược liệu
4. Kiểm nghiệm Canh ki na
Bộ phận dùng là vỏ thân một số loài Canh ki na (Cinchona spp., Rubiaceae)
4.1. Bột dược liệu
Bột màu vàng đỏ hay nâu đỏ, vị đắng. Quan sát dưới kính hiển vi thấy:
- Sợi thuôn dài, hơi nhọn ở hai đầu, thành rất dày, có ống trao đổi - Mảnh bần màu nâu nhạt
- Mảnh mô mềm chứa tinh thể calci oxalat - Hạt tinh bột rất nhỏ
4.2. Định tính bằng các phản ứng đặc hiệu
Thử nghiệm Grahe:
Cho khoảng 0,5g bột Canh ki na (mịn, khô) vào một ống nghiệm lớn và khô. Đun nóng trên đèn cồn sẽ thấy khói màu đỏ tím bốc lên
Để nguội, hơi này sẽ ngưng tụ lại thành những giọt màu tím
3.2. Các phản ứng màu
3.2.1. Chiết xuất
Cho 2 g bột Canh ki na vào 1 erlen 100ml, làm ẩm vừa đủ bằng dung dịch NaOH 10%, để yên 15 phút, thêm vào erlen 20ml hỗn hợp ether-cloroform (3:1), lắc đều trong 15 phút; gạn và lọc lấy dịch chiết cho vào bình lắng gạn đã có sẵn 10ml H2SO4 0,5%. Lấy lớp dịch acid (dịch A) làm các phản ứng định tính.
Dung dịch muối quinin với acid có oxy sẽ cho huỳnh quang xanh dưới ánh sáng tử ngoại. sự hiện diện của các acid không có oxy sẽ làm mất huỳnh quang này.
Lấy 1ml dịch A pha loãng với 5ml nước cất trong một ống nghiệm lớn. Soi dưới đèn UV 365nm hay ánh sáng mặt trời trên nền đen, quan sát huỳnh quang theo hướng vuông góc với phương của ánh sáng tới. Ghi nhận màu sắc huỳnh quang.
Sau đó thêm 1 giọt HCl 10%, quan sát huỳnh quang sau khi thêm HCl.
3.2.3. Phản ứng Thaleoquinin
Cho 1ml dịch A vào ống nghiệm, pha loãng với 1ml nước cất nếu dịch chiết có màu sậm. Thêm từng giọt nước brom 10% (làm trong tủ hốt!) cho đến khi dung dịch vừa có màu vàng của nước brom dư. Thêm 1 lượng thừa NH4OH đậm đặc sẽ có màu xanh lục.
3.2.4. Phản ứng Erythroquinin
Tiến hành như trên cho đến khi dung dịch có màu vàng của nước brom dư. Thêm từng giọt kai ferocyanid 10% (khoảng chừng 1/3 lượng nước brom) cho tới khi dung dịch vừa chuyển sang màu vàng chanh.
Sau đó thêm NH4OH đến pH kiềm yếu, dung dịch chuyển thành màu nâu hồng đến đỏ đậm. Thêm 1ml CHCl3 và lắc đều. Để yên, lớp CHCl3 bên dưới sẽ có màu đỏ bền.