2.4.1. Kỹ thuật thu thập số liệu
Lựa chọn đối tượng nghiên cứu, đối tượng ký vào bản cam kết đồng ý tham gia nghiên cứu
Phỏng vấn trực tiếp đối tượng nghiên cứu: thu thập các thông tin theo mẫu phiếu phỏng vấn.
Thực hiện xét nghiệm hóa sinh máu:
- Đối với nhóm bệnh: phần huyết tương còn lại của mẫu máu sau khi đã thực hiện xong chỉ định của bác sĩ tại Bệnh viện Da liễu Trung ương sẽ được tách và vận chuyển về khoa Hóa sinh Bệnh viện Bạch Mai lưu trữ.
- Đối với nhóm chứng: là những người được khám sức khỏe định kỳ hàng năm, có khám lâm sàng và phân tích các xét nghiệm cho thấy là người khỏe mạnh bình thường. Phần huyết tương còn lại của mẫu máu sau khi đã thực hiện xong chỉ định của bác sĩ sẽ được tách và lưu trữ tại khoa Hóa sinh Bệnh viện Bạch Mai.
- Huyết tương sau khi tách được bảo quản ở tủ âm sâu, nhiệt độ -350C. - Sau khi thu thập đủ số lượng mẫu nghiên cứu, rã đông mẫu huyết tương đã lưu trữ, tiến hành xét nghiệm.
Xét nghiệm định lượng 25(OH)D:
Định lượng 25(OH)D bằng kỹ thuật miễn dịch hóa phát quang trên máy xét nghiệm ARCHITECT i4000SR tại khoa Hóa sinh bệnh viện Bạch Mai.
+ Nguyên lý
Xét nghiệm 25(OH)D là xét nghiệm miễn dịch cạnh tranh một bước để định lượng vitamin D trong huyết thanh và huyết tương người bằng công nghệ CMIA với quy trình xét nghiệm linh hoạt.
Mẫu, dung dịch pha loãng xét nghiệm và vi hạt thuận từ phủ anti- vitamin D được kết hợp lại. 25(OH)D có trong mẫu được thay thế từ vitamin D gắn kết protein và gắn với anti - vitamin D phủ vi hạt thuận từ, hình thành phức hợp kháng nguyên - kháng thể.
Sau khi ủ, chất kết hợp gồm vitamin D có đánh dấu acridinium được thêm vào hỗn hợp phản ứng và gắn với các điểm anti - vitamin D trên vi hạt chưa có liên kết.
Sau khi ủ thêm và rửa, dung dịch Pre - Trigger và Trigeger được thêm vào hỗn hợp phản ứng. Kết quả của phản ứng hóa phát quang được tính bằng đơn vị ánh sang tương đối (RLU). Có sự tương quan giữa lượng 25(OH)D trong mẫu và RLUs được bộ phận quang học trong ARCHITECT phát hiện.
Kết quả được tính toán tự động dựa trên đường cong chuẩn đã được thiết lập trước đó.
- Các xét nghiệm khác cũng được tiến hành máy trên máy xét nghiệm ARCHITECT i4000SR tại khoa Hóa sinh bệnh viện Bạch Mai với các phương pháp đo khác nhau, cụ thể:
Xét nghiệm đo hoạt độ enzym AST và ALT: sử dụng phương pháp động học enzym.
Xét nghiệm định lượng PTH: sử dụng phương pháp miễn dịch hóa phát quang.
Xét nghiệm định lượng phospho: sử dụng phương pháp đo điểm cuối với ống trắng thuốc thử.
Xét nghiệm định lượng canxi, protein toàn phần, albumin: sử dụng phương pháp so màu.
Xét nghiệm định lượng cholesterol toàn phần, triglycerid: sử dụng phương pháp enzym so màu.
Xét nghiệm định lượng creatinin: sử dụng phương pháp động học hai điểm (Fix time).
2.4.2. Công cụ thu thập số liệu
Biểu mẫu thu thập số liệu