CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU
1.7. CÁC KỸ THUẬT ĐÁNH GIÁ SỰ NHẠY CẢM CỦA KSTSR VỚ
THUỐC ĐIỀU TRỊ
được thực hiện hàng năm theo kỹ thuật in vitro (thí nghiệm được tiến hành sử dụng KSTSR đã được phân lập từ môi trường sinh học thông thường của chúng để nuôi trong ống nghiệm) và in vivo (tác động lên KSTSR được thử nghiệm trên cơ thể con người). Các phương pháp này có vai trị quan trọng trong việc định hướng, lựa chọn các thuốc, các phác đồ điều trị, ngăn chặn sự lưu hành và gia tăng của SR kháng thuốc. Phương pháp này đã được thực hiện ở nhiều nước trên thế giới. Giám sát in vivo là phương pháp quan trọng nhất để quyết định phác đồ điều trị, phát triển và lựa chọn chính sách thuốc chống SR quốc gia. Việc giám sát in vitro, nhằm xác định độ nhạy cảm của KST với thuốc SR cung cấp những dấu hiệu dự báo sớm KST kháng thuốc và sự cần thiết thay đổi chiến lược dùng thuốc trên địa bàn.
1.7.1. Kỹ thuật in vivo
Đối với P. vivax đánh giá hiệu lực của thuốc CQ được thực hiện theo dõi trên lâm sàng là 28 ngày hoặc 42 ngày tùy theo điều kiện ở từng địa phương [43], [44].
*Thử nghiệm in vivo 28 ngày (WHO, 1981): Theo dõi KST các ngày D0 (trước khi uống thuốc), D1, D2, D3, D7, D14, D21 và D28. Thử nghiệm này được khuyến cáo vì nó cung cấp được nhiều thơng tin, tách được nhạy và kháng độ 1 hoặc xác định được theo dõi thất bại lâm sàng muộn/thời gian sạch KST/đáp ứng lâm sàng và KST đủ (LCF/ thời gian sạch KST/ACPR) thường hay áp dụng trong đánh giá hiệu lực các thuốc CQ, artesunat.
* Thử nghiệm in vivo 42/63 ngày (WHO, 2009): Theo dõi KST các
ngày D0 (trước khi uống thuốc), D1, D2, D3, D7, D14, D21, D28, D35, D42/D49, D56 và D63. Thử nghiệm này được áp dụng với các thuốc có thời gian bán hủy lâu như PQ (theo dõi đến D42), mefloquin (theo dõi đến D63).
Những thử nghiệm này phải tuân theo các bước: chọn bệnh nhân đúng tiêu chuẩn đề ra, cho bệnh nhân uống thuốc theo phác đồ chuẩn của
từng thuốc, theo dõi xét nghiệm KST theo thời gian quy định, ngăn ngừa tái nhiễm để xác định tái phát được chính xác. Quy trình bao gồm cả theo dõi đáp ứng KST và đáp ứng lâm sàng nhằm xác định hiệu quả thực tế của từng phác đồ thuốc, giám sát đáp ứng với thuốc và xây dựng chính sách thuốc quốc gia.
1.7.2. Kỹ thuật in vitro
* Kỹ thuật Macro test (1968)
Thử nghiệm in vitro (macro test) đã được thực hiện nhằm đánh giá tính nhạy cảm của KSTSR với CQ hoặc các thuốc chống SR khác. Kỹ thuật này dựa trên đánh giá sự ức chế thể tư dưỡng trẻ của KSTSR phát triển thành thể phân liệt trong môi trường ni cấy thích hợp của giếng chứng (khơng có thuốc) so với các giếng thuốc có nồng độ từ thấp lên cao.
Các nghiên cứu ban đầu cho thấy kỹ thuật này cho kết quả nhanh, đáng tin cậy dùng để dự đoán sự xuất hiện và lan tràn của kháng CQ trong điều kiện thực địa, vấn đề chính trong thực hiện thử nghiệm này là tìm được máu nhiễm KST có MĐKST phù hợp, khơng q nhiều hoặc quá ít KST hoặc KST quá trẻ, thử nghiệm đòi hỏi phải lấy máu tĩnh mạch [43], [45], [46].
* Kỹ thuật Micro test (1978)
Năm 1978, thử nghiệm in vitro khác được đưa ra là micro test (Rieckmann - 1978) và trở thành phương pháp chuẩn của WHO từ năm 1980 đến nay. Kỹ thuật này dựa trên nguyên tắc nuôi cấy P. falciparum trong môi trường RPMI 1640 [47]. Bộ micro test KIT của WHO có các nồng độ thuốc được gắn trên các giếng của phiến nhựa 96 giếng, chia làm 12 hàng, mỗi hàng 8 giếng: có 1 giếng chứng và 7 giếng có nồng độ thuốc khác nhau tùy thuộc mỗi loại thuốc thử nghiệm. Quy trình này để xác định sự nhạy cảm in vitro của P. falciparum với thuốc SR tại thực địa. Kỹ thuật này có ưu điểm áp dụng cùng một thời điểm trên nhiều bệnh nhân (trong
cùng 1 đĩa thử), kỹ thuật thử nghiệm trên in vitro cho biết kết quả nhanh hơn theo dõi in vivo, song lại có nhược điểm là chúng khơng thể thay thế được hoàn toàn kết quả in vivo mà chỉ mang tính chất bổ trợ kết quả đánh giá cho nhau và trang thiết bị đắt tiền [43], [45], [46], [48].
Đối với P. vivax, quy trình ni cấy thực địa tương tự như nuôi P.
falciparum nhưng môi trường ni cấy (BMM) là mơi trường McCoy trong đó đặc biệt chú trọng mẫu KST trước khi đưa vào nuôi cấy cần mật độ thể nhẫn non > 65% để nâng cao tỷ lệ thành cơng trong q trình ni cấy [49].
CHƯƠNG 2. NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU