CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU
2.3. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3.4. Xác định hàm lượng phenolic tổng
Nguyên tắc: Hàm lượng phenolic tổng được xác định dựa vào thuốc thử Folin-Ciocalteu và được hiệu chuẩn thông qua đường chuẩn axit galic [37].
Độ hấp thụ được đo ở bước sóng 765 nm. Hàm lượng phenolic tổng được thể hiện tương đương axit galic trên mẫu bột rau (mg GAE/g mẫu khô).
Tiến hành:
Dựng đường chuẩn axit galic
Pha dung dịch acid gallic theo dãy nồng độ 0, 20, 40, 60, 80, và 100 g/ml. Hỗn hợp phản ứng được chuẩn bị gồm 100 l dung dịch acid gallic theo từng nồng độ đã pha như trên và 500 l dung dịch thuốc thử Folin 10%, lắc đều và để yên 5 phút. Hỗn hợp sau đó được trộn với 400 l Na2CO3 7,5%, lắc đều và ủ trong tối 30 phút. Độ hấp thụ OD được xác định ở bước sóng 765nm.
Xử lý mẫu và xác định hàm lượng phenolic tổng trong cao chiết
Mẫu được cân chính xác với lượng 1,0g để hồ chung với 8ml ethanol. Sau đó, 100l mẫu được trộn chung với 500l thuốc thử Folin – Ciocalteu 10% và 400l dung dịch Na2CO3 7,5%. Hỗn hợp được ủ trong 30 phút trước khi độ hấp thu được đo ở bước sóng 765nm. Mẫu trắng được chuẩn bị tương tự nhưng thay dung dịch chiết bằng nước cất. Các thí nghiệm được thực hiện lặp lại 3 lần độc lập
Trong đó:
- A : Độ hấp thu của gallic acid ở bước sóng 765nm; - a : Độ dốc (slope) của đường chuẩn;
- b : Hệ số chắn (intercept) của đường chuẩn; - m : Khối lượng mẫu cao (mg);
- Vmẫu : Thể tích mẫu tham gia phản ứng (ml); - LOD : Độ hao hụt khối lượng (%);