CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.5.2. Đánh giá thành phần vitamin B
Chuẩn bị mẫu chuẩn vitamin B1 : Pha riêng dung dịch gốc chuẩn vitamin
B1 trong nước cất 2 lần để thu được dung dịch có nồng độ 100mg/L và lọc qua đầu lọc PTFE 0.45μm để tiến hành chạy HPLC.
Cách tiến hành: Mẫu chuẩn và mẫu thử nghiệm sau khi lọc sẽ được chuyển
vào các vial, phân tích dựa trên hệ thống HPLC bằng cách sử dụng Mô-đun tách Waters 2695 được trang bị máy dị UV bước sóng kép Waters 2487 được đặt
thành 210nm với đầu dò UV-DAD 1A, Ref = 360,16. Cột là một pha đảo ngược Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18 (4,6 x 150 mm, 5 μm) được gắn với một cột bảo vệ Agilent Eclipse XDB-C18. Nhiệt độ cột được duy trì ở 30oC. Chương trình thực hiện với pha động gồm nước - acid phosphoric 85% ( 1000:1), tốc độ dịng 1 – 1,5ml/ phút, bước sóng 210 nm, thể tích mẫu đo là 30μl và thời gian lưu là 5 phút.
Hàm lượng vitamin B1 được tính theo cơng thức sau:
Trong đó: ST là diện tích peak của vitamin B1 trong mẫu trà
SC là diện tích peak của vitamin B1 trong dung dịch chuẩn mC là khối lượng mẫu chuẩn đã cân (mg)
mT là khối lượng thô của mẫu trà (mg) C % là hàm lượng chuẩn tinh khiết
P là khối lượng của mẫu thô sau chiết (mg)
2.5.3. Đánh giá thành phần vitamin B6
Chuẩn bị mẫu chuẩn vitamin B6: Dung dịch gốc chuẩn vitamin B6 nồng độ
(100mg/L) thu được bằng cách hòa tan 0,1g vitamin B6 trong 1000ml nước cất 2 lần và lọc qua đầu lọc PTFE 0.45μm để tiến hành chạy HPLC.
Cách tiến hành: Mẫu chuẩn và mẫu thử nghiệm sau khi lọc sẽ được chuyển
vào các vial, phân tích dựa trên hệ thống HPLC bằng cách sử dụng Mô-đun tách
Waters 2695 được trang bị máy dị UV bước sóng kép Waters 2487 được đặt thành 210nm với đầu dò UV-DAD 1A, Ref = 360,16. Cột là một pha đảo ngược Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18 (4,6 x 150 mm, 5 μm) được gắn với một cột bảo vệ Agilent Eclipse XDB-C18. Nhiệt độ cột được duy trì ở 30oC. Chương trình thực hiện với pha động gồm methanol : acetonitril : nước = 90 : 5 : 5, tốc độ dòng 0,6ml/ phút, bước sóng 210 nm, thể tích mẫu đo là 30μl và thời gian lưu là 10 phút.
Hàm lượng vitamin B6 được tính theo cơng thức sau:
Trong đó: ST là diện tích peak của vitamin B6 trong mẫu trà
SC là diện tích peak của vitamin B6 trong dung dịch chuẩn mC là khối lượng mẫu chuẩn đã cân (mg)
mT là khối lượng thô của mẫu trà (mg) C% là hàm lượng chuẩn tinh khiết
P là khối lượng của mẫu thô sau chiết (mg)