2007. Tính ñ$n ngày 15/08/2007 Tình hình ng=ñ=c th;c ph%m V 137 M!c 4101 Ch t 28
Nguyên nhân gây ng=ñ=c
th;c ph%m V> %
Vi sinh v t 53 38,6 Hóa ch t 04 2,9 Th c ph m có ñ c 43 31,4 Không rõ nguyên nhân 37 27,1
Tính ñ$n ngày 31/05/2007 Tình hình ng=ñ=c th;c ph%m
V 89
M!c 2337 Ch t 24
Nguyên nhân gây ng=ñ=c
th;c ph%m V> %
Vi sinh v t 32 35,9 Hóa ch t 04 4,5 Th c ph m có ñ c 28 31,5 Không rõ nguyên nhân 25 28,1
Tính ñ$n ngày 15/03/2007 Tình hình ng=ñ=c th;c ph%m
V 35
M!c 1050 Ch t 14
Nguyên nhân gây ng=ñ=c
th;c ph%m V> %
Vi sinh v t 07 20 Hóa ch t 01 2,8 Th c ph m có ñ c 15 42,9 Không rõ nguyên nhân 12 34,3
Tính ñ$n ngày 31/01/2007 Tình hình ng=ñ=c th;c ph%m
V 10
M!c 479 Ch t 00
Nguyên nhân gây ng=ñ=c
th;c ph%m V> %
Vi sinh v t 02 20 Hóa ch t 00 0 Th c ph m có ñ c 03 30 Không rõ nguyên nhân 05 50
Chương 3 N I DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP TI N HÀNH 3.1. TH I GIAN VÀ Đ A ĐI/M 3.1.1. Th@i gian T ngày 15/01/2008 ñ n 15/06/2008. 3.1.2. Đ9a ñi2m
• Đ9a ñi2m l5y mBu: T i 4 cơ s gi t m và 2 ch s trên ñ a bàn TP. HCM. • Đ9a ñi2m xét nghi m mBu: Phòng Vi Sinh – Tr m Ch n Đoán Xét Nghi m
và Đi u Tr - Chi C c Thú Y Thành Ph H Chí Minh.
3.2. V T LI U 3.2.1. Thi$t b9 và d>ng c> 3.2.1. Thi$t b9 và d>ng c> Thi$t b9 − Máy d p m u. − T m 370C và 430C. − T s y d ng c . − T l nh. − Cân kĩ thu t. − N i h p ti t trùng (autoclave). D>ng c> − Đèn c n. − Que c y, kéo. − Pipette (1ml, 5ml, 10ml,). − 8ng nghi m. − Đĩa petri. − Bông th m nư c.
3.2.2. Môi trư@ng nuôi c5y vi sinh v"t
− BP (Baird Parker): Môi trư%ng chuyên bi t nuôi c y Staphylococcus aureus.
− PCA (Plate Count Agar): Môi trư%ng nuôi c y dùng ñ m s khu n l c vi khu n hi u khí.
− XLD (Xylose Lysine Desoxycholate): Môi trư%ng phân l p Salmonella.
− TSI (Trillpe Sugar Iron): Ki m tra ñ*c tính lên men glucose, lactose, saccharose và sinh H2S c a vi khu n Salmonella.
− Pepton Glucose: Ki m tra ph n ng sinh hóa MR và VP c a vi khu n.
− LDC (Lysin Decarboxylase): Ki m tra ñ*c tính s( d ng lysin c a vi khu n
Salmonella.
− Pepton ñ m: Dùng pha loãng m u.
− RVS ( Rappaport Vassiliadis Broth ): Môi trư%ng dùng tăng sinh
Salmonella.
− Rapid’ E. Coli: Môi trư%ng nuôi c y dùng ñ m s khu n l c E. Coli.
3.2.2. Hoá ch5t
− Thu c th( Kowac’s.
− Thu c th( VP (Voges Proskauer): α – naphthol
KOH – 40%
− Thu c th( MR (Methyl Red).
3.3. N I DUNG Đ) TÀI N=i dung 1: N=i dung 1:
Kh o sát tình tr ng v sinh và công tác thú y t i 4 cơ s gi t m và 2 ch s trên ña bàn Thành ph H Chí Minh.
• T!i các cơ s& gi$t m# Ch tiêu theo dõi:
− Th%i gian thú ngh ngơi ch% gi t m . − M t ñ lưu nh t thú.
− V sinh chu ng lưu nh t.
− V sinh gia súc trư c khi gi t m . − Phương pháp l y huy t.
− Đ b o h lao ñ ng cho công nhân. − Kho ng cách nơi làm lòng và qu y th t. − Ngu n nư c s( d ng.
− S heo gi t m trong ñêm. • T!i các ch s
Ch tiêu theo dõi:
− Đa ñi m.
− M t ñ bày bán. − V sinh nơi bán. − Cán b thú y. − Đ b o h lao ñ ng. − Công nhân ñi trên bàn.
Đánh giá chung v tr ng thái c m quan m u th t theo tiêu chu n Vi t Nam (TCVN 7046 – 2002):
− Tr ng thái − Màu s!c − Mùi
N=i dung 2: Ki m tra các ch tiêu vi sinh theo tiêu chu n Vi t Nam (TCVN
7046 – 2002).
Ch tiêu theo dõi:
− Ch tiêu t ng s vi khu n hi u khí:
+ T ng s vi khu n hi u khí trên 1 gam th t heo tươi.
+ T l m u ñ t tiêu chu n v ch tiêu t ng s vi khu n hi u khí. − Ch tiêu vi khu n E. coli:
+ S lư ng vi khu n E. coli trên 1 gam th t heo tươi. + T l m u ñ t tiêu chu n v ch tiêu E. coli.
− Ch tiêu vi khu n Staphylococcus aureus:
+ T l m u ñ t tiêu chu n v ch tiêu Staphylococcus aureus. − Ch tiêu vi khu n Salmonella:
+ T l m u ñ t tiêu chu n ch tiêu vi khu n Salmonella.
− T l m u ñ t tiêu chu n 4 ch tiêu vi sinh (T ng s vi khu n hi u khí, E.
coli, Staphylococcus aureus, Salmonella).
3.4. PHƯƠNG PHÁP TI N HÀNH 3.4.1. Đ i tư ng kh o sát 3.4.1. Đ i tư ng kh o sát
M u th t heo tươi có ngu n g c t 4 cơ s gi t m và 2 ch s trên ña bàn TP.HCM.
3.4.2. Ghi nh"n tình tr!ng v sinh t!i các ch s và cơ s& gi$t m#
Chúng tôi th c hi n cu c kh o sát này trong vòng 100 ngày, m0i cơ s chúng tôi kh o sát l*p l i 20 l n (quy ư c ch tiêu n ñnh n u có 15 l n l*p l i).
Đ i v i các ch s :
M0i l n chúng tôi ñ n các ch ñ theo dõi t lúc có xe ch th t ñ u tiên cho ñ n khi th t ñư c bán h t, qua kh o sát chúng tôi ghi nh n ñư c phương ti n v n chuy n th t heo t các nơi trong c n i thành l n ngo i thành, tình tr ng v sinh t i ch , m t ñ th t, nơi bày bán, quan sát tr ng thái c a th t khi bày bán trên s p.
Đ i v i các cơ s& gi$t m#:
− Chúng tôi theo dõi thơi gian nh p ñàn, th%i gian thú ngh ngơi trư c khi gi t m , v sinh thú trư c khi gi t m , s lư ng thú gi t m /ñêm, s heo t n l i hôm trư c.
− Tính m t ñ chu ng lưu (ño di n tích chu ng lưu và ñ m t ng lư ng heo). − Quan sát chu ng lưu có ñ'ng nư c hay không, phân b d m ñ p nhày nh a hay không, có x t nư c r(a thư%ng xuyên không.
− Quan sát t ng dây chuy n l y huy t n u cơ s có m t s dây chuy n th'c huy t trên n n hay c(a chu ng lưu thì xem như cơ s ñó th'c huy t trên sàn không th'c huy t trên b .
− Đ i v i ñ b o h công nhân chúng tôi ghi nhân t khi b!t ñ u gi t m cho t i khi k t thúc. N u có s sơ sót nhi u thì ñánh giá không ñ t tiêu chu n b o h lao ñ ng.
− Chúng tôi ño kho ng cách t khu v c l y lòng t i v trí có th treo qu y th t. N u kho ng cách dư i 5m quy ư c là g n ngư c l i n u trên 5m thì coi như có s ngăn cách.
− Theo dõi ngu n nư c s( d ng l y t ñâu, hàng ngày có x( lý b ng hoá ch t gì hay không sau khi bơm vào b n ch a.
− Đ i v i t ng cơ s , công su t gi t m tùy theo quy mô cũng như m c ñ tiêu th hàng ngày và ñư c ki m soát b i Chi C c Thú Y Thành Ph . D a vào ñó chúng tôi ghi nh n cơ s gi t m vư t m c quy ñ nh ho*c s n xu t bình thư%ng.
3.4.3. MBu ki2m tra vi sinh Cách b trí l5y mBu
− T i cơ s gi t m : 4 cơ s , m0i cơ s l y kho ng 20 m u. − T i ch s : 2 ch , m0i ch l y kho ng 20 m u.
− T ng s : 120 m u th t heo tươi.
Phương pháp l5y mBu
− M u ki m tra vi sinh: M u th t tươi ñư c l y t i các cơ s gi t m và ch s , m u ph i mang tính ñ i di n cho qu y th t (các thao tác ph i vô trùng).
− Kh i lư ng m u ñư c l y kho ng 600g (m u th t ñư c l y trong vòng 15 phút sau khi gi t m ).
− Cách l y m u: Dùng dao vô trùng c!t t i 3 v trí (cơ ñùi, cơ hoành cách mô, cơ vai) cho vào túi nilon 2 l p có ghi mã s ñ vào gi$a 2 l p nilon. C t ch*t, ñ vào thùng ñá b o qu n nhi t ñ kho ng 0 – 40C chuy n ngay v phòng Vi Sinh – tr m Ch n Đoán Xét Nghi m và Đi u Tr – Chi C c Thú Y Thành ph H Chí Minh và ti n hành xét nghi m trong vòng 8 gi%.
Phương pháp phân tích mBu th9t tươi
Phương pháp phân tích m u th t tươi ñ ki m tra vi sinh v t ñư c th c hi n theo quy trình c a Phòng Xét Nghi m Vi Sinh – Tr m Chu n Đoán – Xét Nghi m Và Đi u Tr – Chi C c Thú Y Thành ph H Chí Minh.
3.4.3.1. Ki2m tra t#ng s vi khu%n hi$u khí
− Nguyên t!c: ñ m s khu n l c m'c trên môi trư%ng th ch dinh dư&ng t m t lư ng m u xác ñnh trên cơ s m0i khu n l c ñư c hình thành t m t t bào vi sinh v t.
− Môi trư%ng: PCA (Plate Count Agar), nư c peptone ñ m. − Ti n hành:
+ Pha loãng m u (nư c peptone ñ m) 3 n ng ñ liên ti p (ví d 10-4,10-5, 10-6) tuỳ theo m c ñ v sinh d ki n m u, m0i ñ pha loãng l y 1ml cho vào ñĩa petri r i thêm vào kho ng 10 – 15ml môi trư%ng th ch dinh dư&ng (PCA) ñã vô trùng.
+ Tr n ñ u b ng cách dùng tay xoay tròn ñĩa xuôi và ngư c nhi u l n m t cách nh; nhàng, sau ñó ñ ñông t nhiên.
+ Sau ñó l t úp ñĩa, và ñ trong t m nhi t ñ 370C/24h – 48h. − Đ'c k t qu : ñ m s khu n l c m'c trên các ñĩa nuôi c y, ch'n các ñĩa có
s khu n l c t 15 – 300 (TCVN 7046 – 2002) ñ tính giá tr trung bình c a các n ng ñ pha loãng và quy ra s lư ng vi khu n có trong 1g m u.
− T ng s vi khu n hi u khí trong 1g m u ñư c tính theo công th c:
N = ∑∑∑∑C / V (n1 + 0,1n2)d
Trong ñó:
∑C: T ng các khu n l c ñ m ñư c trên t t c các ñĩa ñư c gi$ l i t hai n ng ñ pha loãng liên ti p.
V: Th tích dung d ch m u c y trên m0i ñĩa (ml). n1: S ñĩa c a ñ pha loãng th nh t ñư c gi$ l i. n2: S ñĩa c a ñ pha loãng th hai ñư c gi$ l i.
d: H s pha loãng tương ng v i ñ pha loãng ñư c gi$ l i. Tóm t!t quy trình xét nghi m t ng s vi khu n hi u khí.
Sơ ñ4 3.1: Quy trình xét nghi m t ng s vi khu n hi u khí.
M u
25g m u +225ml dung d ch peptone ñ m (10-1)
Đ ng nh t m u
Pha loãng (10-2, 10-3, 10-4, 10-5, 10-6)
C y 1ml dung d ch m u vào ñĩa petri
Cho 10-15ml môi trư%ng PCA vào ñĩa petri
Đ'c k t qu
Hình 3.1: Khu n l c vi khu n hi u khí trên môi trư%ng PCA (khu n l c màu tr!ng). 3.4.3.2. Ki2m tra vi khu%n E. Coli
− Nguyên t!c: Đ m s khu n l c (màu tím ánh kim và màu ñ)) m'c trên môi trư%ng chuyên bi t Rapid’s E. coli.
− Môi trư%ng: Rapid’s E. coli, nư c peptone ñ m. − Ti n hành:
+ Pha loãng m u (dùng nư c peptone ñ m) 3 n ng ñ liên ti p
(ví d 10-1, 10-2, 10-3) tuỳ theo m c ñ v sinh d ki n m u, m0i ñ pha loãng l y 1ml cho vào ñĩa petri r i thêm vào kho ng 10 – 15ml môi trư%ng chuyên bi t Rapid’E. coli ñã vô trùng.
+ Tr n ñ u b ng cách dùng tay xoay tròn ñĩa xuôi và ngư c nhi u l n m t cách nh; nhàng, ñ ñông t nhiên. Sau ñó l t úp ñĩa, và ñ trong t m nhi t ñ 440C/24h – 48h.
− Đ'c k t qu : Đ m khu n l c có màu tím ánh kim và ñ) ñ tính giá tr trung bình c a các n ng ñ pha loãng và quy ra s lư ng khu n l c có trong 1g m u.
− S lư ng E. coli trong 1g m u th t ñư c tính theo công th c:
N = ∑∑∑∑C / V (n1 + 0,1n2)d
Trong ñó:
∑C: T ng các khu n l c ñ m ñư c trên t t c các ñĩa ñư c gi$ l i t hai n ng ñ pha loãng liên ti p.
V: Th tích dung d ch m u c y trên m0i ñĩa (ml). n1: S ñĩa c a ñ pha loãng th nh t ñư c gi$ l i. n2: S ñĩa c a ñ pha loãng th hai ñư c gi$ l i.
d: H s pha loãng tương ng v i ñ pha loãng ñư c gi$ l .i Tóm t!t quy trình xét nghi m vi khu n E. coli.
Sơ ñ4 3.2: Quy trình xét nghi m vi khu n E. coli.
M u
25g m u +225ml dung d ch peptone ñêm (10-1)
Đ ng nh t m u Pha loãng (10-2, 10-3)
C y 1ml dung d ch m u vào ñĩa petri
Cho 10-15ml môi trư%ng Rapid’s E. coli vào ñĩa petri
Đ'c k t qu
Hình 3.2: Khu n l c E. coli m'c trên môi trư%ng Rapid’s E. coli
(khu n l c màu tím).
3.4.3.3. Vi khu%n Staphylococcus aureus.
− Nguyên t!c: Xác ñnh trên cơ s th( ph n ng ngưng k t t khu n l c ñ*c trưng c a Staphylococcus aureus trên môi trư%ng phân l p BP.
− Môi trư%ng: BP (Baird Parker), nư c Peptone ñ m. − Ti n hành:
+ Pha loãng m u (nư c Peptone ñ m) n ng ñ 10-1, l y 0,1ml (kho ng 2 gi't) vào ñĩa petri có ch a môi trư%ng Baird Parker. Trang ñ u kh!p b m*t môi trư%ng b ng que c y th y tinh vô trùng.
+ Sau ñó l t úp ñĩa và ñ t m nhi t ñ 37oC/24h – 48h.
+ Đ m s khu n l c ch'n khu n l c ñ*c trưng có màu ñen nhánh, sáng tròn l i ñư%ng kính t 1 – 1,5mm ñư c bao quanh b i vòng sáng này.
+ Nh) 1 gi't thu c th( Staph Plus lên gi y th(. Dùng ñ u tăm vô trùng ch m vào khu n l c thu n và hòa tan vào gi't thu c th(. Ph n ng (+) là ph n ng t o k t t a heo c n.
− S lư ng vi khu n Staphylococcus aureus ñư c tính theo công th c:
N = ∑∑∑∑C / V (n1 + 0,1n2)d
Trong ñó:
∑C: T ng các khu n l c ñ m ñư c trên t t c các ñĩa ñư c gi$ l i t hai n ng ñ pha loãng liên ti p.
V: Th tích dung d ch m u c y trên m0i ñĩa (ml). n1: S ñĩa c a ñ pha loãng th nh t ñư c gi$ l i. n2: S ñĩa c a ñ pha loãng th hai ñư c gi$ l i.
d: H s pha loãng tương ng v i ñ pha loãng ñư c gi$ l i. Tóm t!t quy trình xét nghi m vi khu n Staphylococcus aureus.
Sơ ñ4 3.3: Quy trình xét nghi m vi khu n Staphylococcus aureus.
< 370C/ 24 – 48h M u
25g m u +225ml dung d ch peptone ñ m (10-1)
Đ ng nh t m u
C y 0,1ml dung d ch m u vào ñĩa có ch a môi trư%ng Baird Parker (BP), trang ñ u
Ch'n khu n l c tròn ñen, có vòng sáng
Ghi k t qu
Hình 3.3: Khu n l c Staphylococcus aureus m'c trên môi trư%ng BP (khu n
l c màu ñen có vòng sáng halo).
Hình 3.4: Ph n ng ñông huy t tương c a vi khu n Staphylococcus aureus
(Staph. plus).
3.4.3.4. Vi khu%n Salmonella
− Nguyên t!c: Salmonella sau khi ñư c tăng sinh s1 ñư c xác ñnh b ng môi trư%ng chuyên bi t XLD và các ph n ng sinh hóa.
− Môi trư%ng: Rapaport Vassiliadis, XLD (Xylose Lysine Desoxycholate), TSI, nư c peptone ñ m.
− Ti n hành:
+ Ti n tăng sinh: Cân 25g m u + 225g nư c pepeptone ñ m, sau ñó ñưa vào máy d p m u r i ñem 370C/24h – 48h.
+ Tăng sinh: L!c k2 môi trư%ng ti n tăng sinh trư c khi c y chuy n 0,1ml canh này vào môi trư%ng tăng sinh (Rapaport Vassiliadis và nuôi
440C/24h – 48h).
+ Phân l p trên môi trư%ng XLD: Ch'n khu n l c ñi n hình (tròn, hơi l i, trong, ñôi khi có tâm ñen b% không ñ u).
+ Th( ph n ng sinh hóa: Salmonella ñư c xác ñnh là dương tính qua môi trư%ng TSI và các ph n ng sinh hoá khác.
Lactose (–) Sucrose (–) TSI Sinh H2S (+) Sinh hơi (+) Glucose (+) MR (+), VP (–); Urease(–); Indol(–); LDC(+)
Tóm t!t quy trình xét nghi m vi khu n Salmonella.