M u th t heo tươi có ngu n g c t 4 cơ s gi t m và 2 ch s trên ña bàn TP.HCM.
3.4.2. Ghi nh"n tình tr!ng v sinh t!i các ch s và cơ s& gi$t m#
Chúng tôi th c hi n cu c kh o sát này trong vòng 100 ngày, m0i cơ s chúng tôi kh o sát l*p l i 20 l n (quy ư c ch tiêu n ñnh n u có 15 l n l*p l i).
Đ i v i các ch s :
M0i l n chúng tôi ñ n các ch ñ theo dõi t lúc có xe ch th t ñ u tiên cho ñ n khi th t ñư c bán h t, qua kh o sát chúng tôi ghi nh n ñư c phương ti n v n chuy n th t heo t các nơi trong c n i thành l n ngo i thành, tình tr ng v sinh t i ch , m t ñ th t, nơi bày bán, quan sát tr ng thái c a th t khi bày bán trên s p.
Đ i v i các cơ s& gi$t m#:
− Chúng tôi theo dõi thơi gian nh p ñàn, th%i gian thú ngh ngơi trư c khi gi t m , v sinh thú trư c khi gi t m , s lư ng thú gi t m /ñêm, s heo t n l i hôm trư c.
− Tính m t ñ chu ng lưu (ño di n tích chu ng lưu và ñ m t ng lư ng heo). − Quan sát chu ng lưu có ñ'ng nư c hay không, phân b d m ñ p nhày nh a hay không, có x t nư c r(a thư%ng xuyên không.
− Quan sát t ng dây chuy n l y huy t n u cơ s có m t s dây chuy n th'c huy t trên n n hay c(a chu ng lưu thì xem như cơ s ñó th'c huy t trên sàn không th'c huy t trên b .
− Đ i v i ñ b o h công nhân chúng tôi ghi nhân t khi b!t ñ u gi t m cho t i khi k t thúc. N u có s sơ sót nhi u thì ñánh giá không ñ t tiêu chu n b o h lao ñ ng.
− Chúng tôi ño kho ng cách t khu v c l y lòng t i v trí có th treo qu y th t. N u kho ng cách dư i 5m quy ư c là g n ngư c l i n u trên 5m thì coi như có s ngăn cách.
− Theo dõi ngu n nư c s( d ng l y t ñâu, hàng ngày có x( lý b ng hoá ch t gì hay không sau khi bơm vào b n ch a.
− Đ i v i t ng cơ s , công su t gi t m tùy theo quy mô cũng như m c ñ tiêu th hàng ngày và ñư c ki m soát b i Chi C c Thú Y Thành Ph . D a vào ñó chúng tôi ghi nh n cơ s gi t m vư t m c quy ñ nh ho*c s n xu t bình thư%ng.
3.4.3. MBu ki2m tra vi sinh Cách b trí l5y mBu
− T i cơ s gi t m : 4 cơ s , m0i cơ s l y kho ng 20 m u. − T i ch s : 2 ch , m0i ch l y kho ng 20 m u.
− T ng s : 120 m u th t heo tươi.
Phương pháp l5y mBu
− M u ki m tra vi sinh: M u th t tươi ñư c l y t i các cơ s gi t m và ch s , m u ph i mang tính ñ i di n cho qu y th t (các thao tác ph i vô trùng).
− Kh i lư ng m u ñư c l y kho ng 600g (m u th t ñư c l y trong vòng 15 phút sau khi gi t m ).
− Cách l y m u: Dùng dao vô trùng c!t t i 3 v trí (cơ ñùi, cơ hoành cách mô, cơ vai) cho vào túi nilon 2 l p có ghi mã s ñ vào gi$a 2 l p nilon. C t ch*t, ñ vào thùng ñá b o qu n nhi t ñ kho ng 0 – 40C chuy n ngay v phòng Vi Sinh – tr m Ch n Đoán Xét Nghi m và Đi u Tr – Chi C c Thú Y Thành ph H Chí Minh và ti n hành xét nghi m trong vòng 8 gi%.
Phương pháp phân tích mBu th9t tươi
Phương pháp phân tích m u th t tươi ñ ki m tra vi sinh v t ñư c th c hi n theo quy trình c a Phòng Xét Nghi m Vi Sinh – Tr m Chu n Đoán – Xét Nghi m Và Đi u Tr – Chi C c Thú Y Thành ph H Chí Minh.
3.4.3.1. Ki2m tra t#ng s vi khu%n hi$u khí
− Nguyên t!c: ñ m s khu n l c m'c trên môi trư%ng th ch dinh dư&ng t m t lư ng m u xác ñnh trên cơ s m0i khu n l c ñư c hình thành t m t t bào vi sinh v t.
− Môi trư%ng: PCA (Plate Count Agar), nư c peptone ñ m. − Ti n hành:
+ Pha loãng m u (nư c peptone ñ m) 3 n ng ñ liên ti p (ví d 10-4,10-5, 10-6) tuỳ theo m c ñ v sinh d ki n m u, m0i ñ pha loãng l y 1ml cho vào ñĩa petri r i thêm vào kho ng 10 – 15ml môi trư%ng th ch dinh dư&ng (PCA) ñã vô trùng.
+ Tr n ñ u b ng cách dùng tay xoay tròn ñĩa xuôi và ngư c nhi u l n m t cách nh; nhàng, sau ñó ñ ñông t nhiên.
+ Sau ñó l t úp ñĩa, và ñ trong t m nhi t ñ 370C/24h – 48h. − Đ'c k t qu : ñ m s khu n l c m'c trên các ñĩa nuôi c y, ch'n các ñĩa có
s khu n l c t 15 – 300 (TCVN 7046 – 2002) ñ tính giá tr trung bình c a các n ng ñ pha loãng và quy ra s lư ng vi khu n có trong 1g m u.
− T ng s vi khu n hi u khí trong 1g m u ñư c tính theo công th c:
N = ∑∑∑∑C / V (n1 + 0,1n2)d
Trong ñó:
∑C: T ng các khu n l c ñ m ñư c trên t t c các ñĩa ñư c gi$ l i t hai n ng ñ pha loãng liên ti p.
V: Th tích dung d ch m u c y trên m0i ñĩa (ml). n1: S ñĩa c a ñ pha loãng th nh t ñư c gi$ l i. n2: S ñĩa c a ñ pha loãng th hai ñư c gi$ l i.
d: H s pha loãng tương ng v i ñ pha loãng ñư c gi$ l i. Tóm t!t quy trình xét nghi m t ng s vi khu n hi u khí.
Sơ ñ4 3.1: Quy trình xét nghi m t ng s vi khu n hi u khí.
M u
25g m u +225ml dung d ch peptone ñ m (10-1)
Đ ng nh t m u
Pha loãng (10-2, 10-3, 10-4, 10-5, 10-6)
C y 1ml dung d ch m u vào ñĩa petri
Cho 10-15ml môi trư%ng PCA vào ñĩa petri
Đ'c k t qu
Hình 3.1: Khu n l c vi khu n hi u khí trên môi trư%ng PCA (khu n l c màu tr!ng). 3.4.3.2. Ki2m tra vi khu%n E. Coli
− Nguyên t!c: Đ m s khu n l c (màu tím ánh kim và màu ñ)) m'c trên môi trư%ng chuyên bi t Rapid’s E. coli.
− Môi trư%ng: Rapid’s E. coli, nư c peptone ñ m. − Ti n hành:
+ Pha loãng m u (dùng nư c peptone ñ m) 3 n ng ñ liên ti p
(ví d 10-1, 10-2, 10-3) tuỳ theo m c ñ v sinh d ki n m u, m0i ñ pha loãng l y 1ml cho vào ñĩa petri r i thêm vào kho ng 10 – 15ml môi trư%ng chuyên bi t Rapid’E. coli ñã vô trùng.
+ Tr n ñ u b ng cách dùng tay xoay tròn ñĩa xuôi và ngư c nhi u l n m t cách nh; nhàng, ñ ñông t nhiên. Sau ñó l t úp ñĩa, và ñ trong t m nhi t ñ 440C/24h – 48h.
− Đ'c k t qu : Đ m khu n l c có màu tím ánh kim và ñ) ñ tính giá tr trung bình c a các n ng ñ pha loãng và quy ra s lư ng khu n l c có trong 1g m u.
− S lư ng E. coli trong 1g m u th t ñư c tính theo công th c:
N = ∑∑∑∑C / V (n1 + 0,1n2)d
Trong ñó:
∑C: T ng các khu n l c ñ m ñư c trên t t c các ñĩa ñư c gi$ l i t hai n ng ñ pha loãng liên ti p.
V: Th tích dung d ch m u c y trên m0i ñĩa (ml). n1: S ñĩa c a ñ pha loãng th nh t ñư c gi$ l i. n2: S ñĩa c a ñ pha loãng th hai ñư c gi$ l i.
d: H s pha loãng tương ng v i ñ pha loãng ñư c gi$ l .i Tóm t!t quy trình xét nghi m vi khu n E. coli.
Sơ ñ4 3.2: Quy trình xét nghi m vi khu n E. coli.
M u
25g m u +225ml dung d ch peptone ñêm (10-1)
Đ ng nh t m u Pha loãng (10-2, 10-3)
C y 1ml dung d ch m u vào ñĩa petri
Cho 10-15ml môi trư%ng Rapid’s E. coli vào ñĩa petri
Đ'c k t qu
Hình 3.2: Khu n l c E. coli m'c trên môi trư%ng Rapid’s E. coli
(khu n l c màu tím).
3.4.3.3. Vi khu%n Staphylococcus aureus.
− Nguyên t!c: Xác ñnh trên cơ s th( ph n ng ngưng k t t khu n l c ñ*c trưng c a Staphylococcus aureus trên môi trư%ng phân l p BP.
− Môi trư%ng: BP (Baird Parker), nư c Peptone ñ m. − Ti n hành:
+ Pha loãng m u (nư c Peptone ñ m) n ng ñ 10-1, l y 0,1ml (kho ng 2 gi't) vào ñĩa petri có ch a môi trư%ng Baird Parker. Trang ñ u kh!p b m*t môi trư%ng b ng que c y th y tinh vô trùng.
+ Sau ñó l t úp ñĩa và ñ t m nhi t ñ 37oC/24h – 48h.
+ Đ m s khu n l c ch'n khu n l c ñ*c trưng có màu ñen nhánh, sáng tròn l i ñư%ng kính t 1 – 1,5mm ñư c bao quanh b i vòng sáng này.
+ Nh) 1 gi't thu c th( Staph Plus lên gi y th(. Dùng ñ u tăm vô trùng ch m vào khu n l c thu n và hòa tan vào gi't thu c th(. Ph n ng (+) là ph n ng t o k t t a heo c n.
− S lư ng vi khu n Staphylococcus aureus ñư c tính theo công th c:
N = ∑∑∑∑C / V (n1 + 0,1n2)d
Trong ñó:
∑C: T ng các khu n l c ñ m ñư c trên t t c các ñĩa ñư c gi$ l i t hai n ng ñ pha loãng liên ti p.
V: Th tích dung d ch m u c y trên m0i ñĩa (ml). n1: S ñĩa c a ñ pha loãng th nh t ñư c gi$ l i. n2: S ñĩa c a ñ pha loãng th hai ñư c gi$ l i.
d: H s pha loãng tương ng v i ñ pha loãng ñư c gi$ l i. Tóm t!t quy trình xét nghi m vi khu n Staphylococcus aureus.
Sơ ñ4 3.3: Quy trình xét nghi m vi khu n Staphylococcus aureus.
< 370C/ 24 – 48h M u
25g m u +225ml dung d ch peptone ñ m (10-1)
Đ ng nh t m u
C y 0,1ml dung d ch m u vào ñĩa có ch a môi trư%ng Baird Parker (BP), trang ñ u
Ch'n khu n l c tròn ñen, có vòng sáng
Ghi k t qu
Hình 3.3: Khu n l c Staphylococcus aureus m'c trên môi trư%ng BP (khu n
l c màu ñen có vòng sáng halo).
Hình 3.4: Ph n ng ñông huy t tương c a vi khu n Staphylococcus aureus
(Staph. plus).
3.4.3.4. Vi khu%n Salmonella
− Nguyên t!c: Salmonella sau khi ñư c tăng sinh s1 ñư c xác ñnh b ng môi trư%ng chuyên bi t XLD và các ph n ng sinh hóa.
− Môi trư%ng: Rapaport Vassiliadis, XLD (Xylose Lysine Desoxycholate), TSI, nư c peptone ñ m.
− Ti n hành:
+ Ti n tăng sinh: Cân 25g m u + 225g nư c pepeptone ñ m, sau ñó ñưa vào máy d p m u r i ñem 370C/24h – 48h.
+ Tăng sinh: L!c k2 môi trư%ng ti n tăng sinh trư c khi c y chuy n 0,1ml canh này vào môi trư%ng tăng sinh (Rapaport Vassiliadis và nuôi
440C/24h – 48h).
+ Phân l p trên môi trư%ng XLD: Ch'n khu n l c ñi n hình (tròn, hơi l i, trong, ñôi khi có tâm ñen b% không ñ u).
+ Th( ph n ng sinh hóa: Salmonella ñư c xác ñnh là dương tính qua môi trư%ng TSI và các ph n ng sinh hoá khác.
Lactose (–) Sucrose (–) TSI Sinh H2S (+) Sinh hơi (+) Glucose (+) MR (+), VP (–); Urease(–); Indol(–); LDC(+)
Tóm t!t quy trình xét nghi m vi khu n Salmonella.
Sơ ñ4 3.4: Quy trình xét nghi m vi khu n Salmonella.
M u
(25g m u + 225ml dung d ch peptone ñêm)
Đ ng nh t m u
C y 0,1ml dung d ch m u + 10ml dung d ch Rappaport Vassiliadis
C y vào môi trư%ng XLD
Ch'n khu n l c ñen, tròn, bóng 37oC/24 – 48h 44oC/24 – 48h 37oC/24 – 48h Th( sinh hóa: TSI (Đ)/vàng) H2S(+) MR(+) VP(–) Indol(–) Urease(–) LDC(+) Ghi k t qu
Hình 3.5: Vi khu n Salmonella m'c trên môi trư%ng XLD (khu n l c màu
ñen), m'c trên môi trư%ng TSI (ñ)/vàng, sinh hơi), Urea (–), LDC (+: màu tím), MR– VP (–).
3.5. X0 LÝ S LI U
Ph n m m excel.
Phân tích ANOVA v i m u hoàn toàn ng u nhiên 1 y u t ñ i v i s khu n l c trung bình/gam m u (các s li u ñư c chuy n ñ i sang logarit th p phân trư c khi x( lí th ng kê).
Các t l ñư c so sánh b ng tr!c nghi m χ2 (s( d ng ph n m m Minitab 13 for Window).
(Ngu n: www.vfa.@.vfa.gov.vn).
T l m u ñ t yêu c u (%) S m u ñ t tiêu chu n v sinh T ng s m u kh o sát
Chương 4
K T QU VÀ TH O LU N
4.1. KH O SÁT TÌNH HÌNH V SINH 4.1.1. T!i ch 4.1.1. T!i ch
Qua kh o sát t i 2 ch s chúng tôi nh n th y tình hình v sinh chưa t t, còn nhi u nơi dơ b n, nư c th i còn ñ'ng l i, m t s công nhân chưa th c hi n ñ ng b ñ b o h lao ñ ng, nơi bày bán th t dơ b n, công nhân ñi trên bàn nơi bày bán th t m t v sinh, th t x p ch ng lên nhau (ch có ch An L c).
Cán b thú y th c hi n ñ y ñ vi c ki m tra th t c ñ u vào và ñ u ra: gi y ch ng nh n ki m d ch s n ph m ñ ng v t, tình tr ng qu y th t, ngu n g c, s lư ng, ki m tra các phư%ng ti n ra vào ch .
B ng 4.1: M t s ch tiêu theo dõi t i các ch s .
STT Ch tiêu theo dõi Ch An L!c Ch Ph!m Văn Hai
1 Tình tr ng v sinh Dơ b n S ch s1
2 Đ b o h lao ñ ng Có có
3 Công nhân ñi trên bàn Có Không
4 Cán b thú y Đ y ñ Đ y ñ
5 Đ a ñi m G n khu dân cư G n khu dân cư
6 M t ñ bày bán Đông V a
T k t qu trên b ng 4.1, trong 6 ch tiêu theo dõi chơ An L c ñ t 4 ch tiêu, v sinh t i ch r t dơ b n, n m sát khu dân cư gây n ào cho ngư%i dân, công nhân ñi trên bàn làm m t v sinh góp ph n tích c c cho s v y nhi m vi sinh v t vào th t, m t ñ bày bán quá ñông và ch t h;p. Đ i v i ch Ph m Văn Hai, ch có m t ch tiêu là không ñ t, ñó là ch n m sát khu dân cư. Qua so sanh, chúng tôi nh n th y ch Ph m Văn Hai có tình hình v sinh t t hươn ch An L c.
Hình 4.1: Th t x p ch ng lên nhau, công nhân ñi trên bàn ñ th t.
4.1.2. T!i các cơ s& gi$t m#
V sinh trư c và sau khi gi t m ñ u th c hi n ñ y ñ , s ch s1, không gian phù h p phân bi t t ng khu ñ m b o quy ñnh theo quy ñnh v sinh thú y, tiêu ñ c kh( trùng thư%ng xuyên trung bình m t tu n m t l n, ngu n nư c s( d ng ph n l n là nư c gi ng ñã ñư c x( lý ñ m b o tiêu chu n.
Tuy nhiên, cũng còn m t s h n ch mà cơ s gi t m thư%ng g*p: như thân th t chưa r(a s ch t o môi trư%ng thu n l i cho cho vi sinh v t phát tri n, d ng c còn ñ dư i sàn d làm v y nhi m vi sinh v t vào th t, gi t m không ñúng k2 thu t d n ñ n làm m t màu t nhiên c a qu y th t,….
B ng 4.2: M t vài ch tiêu ñu c kh o sát t i các cơ s gi t m .
Qua k t qu trên b ng 4.2:
Đ i v i cơ s gi t m TT Qu n 12, chúng tôi ñánh giá tình tr ng v sinh x u nh t vì trong 9 ch tiêu kh o sát có ñ n 4 ch tiêu không ñ t. Chu ng lưu quá dơ b n, m t ñ thú quá ch t h;p, công nhân không m*c ñ b o h lao ñ ng, ch0 làm lòng quá g n v i qu y th t.
Đ i v i cơ s gi t m Phư c Ki n, ch ñư c ñánh giá t t hơn cơ s TT Qu n 12. Trong 9 ch tiêu trên có 3 ch tiêu chưa ñ t như v sinh chu ng lưu quá b n, ch0 làm lòng quá g n v i qu y th t, m t ñ lưu nh t quá ch t.
Đ i v i cơ s Bình Chi u, ñư c ñánh giá là t t hơn cơ s TT Qu n 12 và Phư c Ki n, s ch tiêu ñ t 8/9, ch có 1 ch tiêu chưa ñ t ñó là khu v c làm lòng quá g n v i qu y th t.
Cơ s& gi$t m# STT Ch tiêu theo dõi Bình
Chi2u An H! PhưKi2n c
TT Qu"n
12
1 Thú ngh ngơi ñtrư c khi gi t m y ñ Có Có Có Có