không gây bệnh trên lá địa lan. Chỉ duy nhất có dòng EC06-8 gây bệnh. vết bệnh có màu vàng xanh, lan theo chiều rộng của phiến lá. Ranh giới giữa mô bệnh và mô khỏe có viền màu nâu đen (Hình 4.6.2).
Hình 4.6.2. Triệu chứng bệnh trên lá địa lan chủng vi khuẩn sau 10 ngày (ở 250C).
Sau đó, chúng tôi đã tiến hành phân lập lại từ lá địa lan chủng bệnh vi khuẩn có biểu hiện bệnh. Kết quả thu nhận đuợc vi khuẩn có hình thái, màu sắc khuẩn lạc giống với ban đầu (Hình 4.6.3).
Hình 4.6.3. Vi khuẩn phân lập từ lá địa lan bị bệnh sau khi chủng vi khuẩn 10 ngày trên môi trường PGA.
4.5. Ly trích DNA tổng số của vi khuẩn
DNA là vật chất cơ bản trong nghiên cứu di truyền phân tử. Do đó, chúng ta phải ly trích đuợc DNA tách khỏi tế bào và các chất nhu RNA, protein,.. .Có nhiều phuơng
a. Ranh giới giữa mô bệnh và mô khỏe có màu nâu đen.
b. Vùng bị bệnh có màu vàng xanh.
pháp ly trích DNA nhưng mục đích cuối cùng là làm sao thu được lượng
DNA đủ lớn và
đủ tinh sạch để tiến hành các thí nghiệm kế tiếp. Tuy giai đoạn tách chiết DNA
là một giai
đoạn khá đơn giản nhưng nó lại đóng vai trò vô cùng quan trọng.
Chúng tôi đã tiến hành ly trích một số dòng vi khuẩn. Sau khi ly trích xong, chúng tôi tiến hành điện di kiểm tra DNA. Kết quả ly trích được thể hiện ở hình 4.6.
Hình 4.7. Sản phẩm ly trích DNA tổng số của vi khuẩn.
1. EC06-1, 2. EC06-3, 3. EC06-5, 4. EC06-6, 5. EC06-7, 6. EC06-8, 7. EC06-9, 8. EC06-10. Điện
di trên gel agarose 0,8% ở hiệu điện thế 100V/15 phút trong dung dịch đệm TAE 0,5X, 3 pl mẫu/giếng.
Qua hình trên cho thấy các mẫu ly trích có độ tinh sạch chưa cao. Ngoài DNA tổng số còn có phần tạp (RNA và protein) ở phía dưới. Có thể loại bỏ được phần tạp này bằng cách sử dụng enzyme RNAse. Có một số mẫu DNA bị đứt gãy tạo thành vệt sáng dài. Tuy nhiên, DNA thu được tương đối sạch để thực hiện phản ứng PCR. Trước khi tiến hành thực hiện phản ứng PCR, chúng tôi tiến hành pha loãng DNA gốc trong nước cất vô trùng hoặc TE 1X. Do lượng DNA mẫu dùng trong phản ứng PCR khoảng từ 10 - 100 ng. Nếu lượng DNA mẫu quá cao sẽ tạo ra những sản phẩm phụ không mong muốn. Sau khi pha loãng, chúng tôi tiến hành điện di trên gel agarose để kiểm tra.
DNA tổng số