(1) Đặc điểm sinh học của nấm ký sinh côn trùng Isaria javanica
- Làm slide để quan sát cấu trúc dạng sinh sản vô tính gồm cấu trúc sinh bào
tử, tế bào mẹ sinh thành bào tử (conidiogenous cell), bào tử (conidia),....
- Quan sát, mô tả hình dạng, cấu trúc, màu sắc, đo đếm kích thước quả thể và
vật chủ; cấu trúc vi học dưới kính hiển vi.
- Theo dõi đặc điểm phát triển của nấm trên môi trường PDA
(2) Vòng đời gây bệnh của nấm ký sinh côn trùng Isaria javanica trên vật chủ sâu khoang (Spodoptera litura)
- Lây nhiễm nấm bệnh: Các mẫu vật chủ được lây nhiễm bằng cách phun bào
tử ở nồng độ nấm khoảng 107 - 109 bào tử/g, nuôi ở 25 ± 10C và độ ẩm 70 ± 2% trong
hộp nhựa và có thức ăn “sạch”.
- Sâu khoang sau khi lây nhiễm nấm bệnh, cá thể chết lấy ra để riêng trong từng đĩa petri có lót giấy thấm nước cất vô trùng giữ ẩm, ghi ký hiệu.
- Theo dõi từ 6, 12, 24 giờ sau khi nhiễm nấm, sau đó theo dõi hàng ngày (1 lần/ngày) cho đến khi nấm bao phủ và phát tán bào tử trên cơ thể sâu khoang; chụp ảnh, mô tả đặc điểm các giai đoạn phát triển (có các phiếu theo dõi).
- Các thí nghiệm được bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên với 3 lần lặp lại, 10 cá thể nhiễm nấm/lần lặp theo dõi
(3) Ảnh hưởng của các yếu tố nhiệt độ, độ ẩm đến khả năng gây bệnh của nấm ký sinh côn trùng Isaria javanica trên vật chủ sâu khoang (Spodoptera litura)
• Bố trí thí nghiệm
Các thí nghiệm được bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên với 3 lần lặp lại, 3 hộp/lần, đối chứng không phun nấm. Vật chủ côn trùng sau khi lây nhiễm nấm, cá thể chết lấy ra để riêng trong từng đĩa petri có lót giấy thấm nước cất vô trùng giữ ẩm, ghi ký hiệu; theo dõi các chỉ tiêu hàng ngày cho đến khi nấm hoàn thành chu kỳ phát triển; chụp ảnh, ghi lại các số liệu vào phiếu theo dõi.
Thí nghiệm 1: Xác định ảnh hưởng nhiệt độ đến khả năng gây bệnh của nấm
I. javanica trên sâu khoang được tiến hành theo 4 công thức nhiệt độ 200C, 250C,
300C, 350C; điều kiện độ ẩm 70 ± 2%. Sử dụng nấm Isaria javanica ở dạng dịch
lỏng nồng độ 107 - 108 bào tử/g, liều lượng 3 ml/hộp, số lượng 10 sâu khoang tuổi
3/hộp nhựa có lá lạc “sạch” (25 x 15cm). CT đối chứng (ĐC) phun nước cất
Công thức Nhiệt độ (0C) Liều lượng (ml/hộp)
CT1 20 3
CT2 25 3
CT3 30 3
CT1 35 3
Thí nghiệm 2 : Xác định ảnh hưởng của độ ẩm đến khả năng gây bệnh của
Isaria javanica trên sâu khoang: 4 công thức độ ẩm là 60, 70, 80, 90% RH; điều
kiện nhiệt độ 25 ± 10C. Sử dụng nấm Isaria javanica ở dạng dịch lỏng nồng độ 107 -
108 bào tử/g, liều lượng 3 ml/hộp, số lượng 10 sâu khoang tuổi 3/hộp nhựa có lá lạc
“sạch” (25 x 15cm). CT đối chứng (ĐC) phun nước cất.
Công thức Độ ẩm (%) Liều lượng (ml/hộp)
CT1 60 3
CT3 80 3
CT1 90 3
• Các chỉ tiêu theo dõi
- Số lượng (con) và tỷ lệ (%) sâu khoang chết theo thời gian sau phun nấm - Số lượng (con) và tỷ lệ (%) sâu khoang có nấm mọc theo thời gian sau phun nấm.
- Thời gian các giai đoạn phát triển (ngày): Bào tử nấm tiếp xúc vật chủ đến khi vật chủ chết, hình thành sợi nấm, sợi nấm bao phủ cơ thể, phát tán bào tử nấm, thời gian hoàn thành cả chu kỳ phát triển.
(4) Đánh giá khả năng sử dụng chủng nấm ký sinh côn trùng Isaria javanica phòng trừ sâu khoang (Spodoptera litura) trong điều kiện thí nghiệm
Phân tích kết quả nghiên cứu của 5 chủng nấm Isaria javanica về hiệu lực
phòng trừ, chu kỳ phát triển, mối quan hệ với các yếu tố liên quan (chủng nấm, vật
chủ, nhiệt độ, độ ẩm) để đánh giá khả năng sử dụng nấm ký sinh côn trùng Isaria
javanica phòng trừ sâu khoang (Spodoptera litura) trong điều kiện nghiệm
- Xác định chủng nấm có tỷ lệ % vật chủ chết, tỷ lệ % vật chủ nhiễm nấm đạt cao nhất. - Xác định chủng nấm có thời gian gây chết vật chủ, thời gian hoàn thành chu kỳ phát triển ngắn nhất.
- Mức nhiệt độ, độ ẩm thích hợp trong điều kiện thí nghiệm.