đời phát triển của chủng nấm Isaria javanica VN1482 trên sâu khoang
Đối với sâu khoang hại lạc thì thời gian từ khi nấm I.javanica VN1482 tiếp xúc xâm nhiễm đến khi làm sâu khoang chết trung bình ngắn nhất là 3,13 ± 0,45 ngày (ở độ ẩm 80%) và dài nhất là 3,50 ± 0,32 ngày (ở độ ẩm 90%). Thời gian trung bình đến khi nấm bắt đầu mọc ra bên ngoài xác sâu chết lớn nhất ở độ ẩm 90% và các nhiệt độ khác nhau là 3,33 ± 0,99 ngày và ngắn nhất ở ở độ ẩm 60% là 2,83 ± 0,25ngày , giai đoạn này kéo dài trong khoảng từ 2,83- 3,33 ngày.
Hình 3.22 Vòng đời phát triển của chủng nấm Isaria javanica VN1482 trên sâu khoang thí nghiệm nhiệt độ ổn định 250 và các độ ẩm khác nhau
Thời gian trung bình đến khi thấy nấm bao phủ hoàn toàn cơ thế mọt nhanh nhất là 2,23 ± 1,09 ngày (ở độ ẩm 90%) và chậm nhất 2,83 ± 0,14 ngày; thời gian trung bình đến khi bào tử nấm bắt đầu hình thành nhanh nhất là 2,40 ± 0,77ngày (ở độ ẩm 70%) và chậm nhất là 2.93 ± 0,31 ngày (ở độ ẩm 60%), thời gian giai đoạn bào tử nấm giải phóng khỏi xác mọt chết nhanh nhất là 2,37± 1,21 ngày (ở độ ẩm 90%) và chậm nhất 2,83 ± 1,09 ngày. Nấm I.javanica VN1472 hoàn thành vòng đời hay chu kỳ phát triển trên sâu khoang nhanh nhất là 12,93 ± 2,52 ngày (ở độ ẩm 60%) và chậm nhất là 15,13 ± 3,76 ngày (ở độ ẩm 90%) (bảng 3.3.12)
Bảng 3.3.11: Vòng đời phát triển của chủng nấm VN1472 thí nghiệm nhiệt độ ổn định 250 và các độ ẩm khác nhau
Công thức
Thời gian các giai đoạn phát triển của chủng nấm I. javanica VN1472 trên sâu khoang (ngày) (TB±SD) Vật chủ chết Sợi nấm bắt đầu mọc Nấm hình thành bào tử Nấm bao phủ cơ thể Bào tử nấm phòng thích Nồng độ bào tử Vòng đời của nấm CT1 3,25 ± 0,13a 2,24 ± 0,25a 2.91 ± 0,57a 2,56 ± 0,66b 2,42 ± 0,14ab 1,09 x 108 13,39 ± 1,75 CT2 3,59 ± 0,34a 2,18 ± 1,00a 2,71 ± 0,77a 2,35 ± 0,76b 2,41 ± 0,78b 3,38 x 108 13,24 ± 2,56 CT3 3,11 ± ,45a 2,63 ± 0,35a 2,72± 1,07a 2,86± 0,14ab 2,84± 1,09ab 1,90 x108 14,16 ± 3,10 CT4 3,12 ± 0,24a 2,41 ± 0,99a 0,15a ± 3,52 3,22 ± 1,09a 3,36 ± 1,21a x 1080,98 15,66 ± 1,90 LSD0,05 0,51 0,69 1,02 0,61 0,94 CV(%) 18,1 15,2 17,7 14,2 14,9
Bảng 3.3.12: Vòng đời phát triển của chủng nấm VN1482 thí nghiệm nhiệt độ ổn định 250 và các độ ẩm khác nhau
Công thức
Thời gian các giai đoạn phát triển của chủng nấm I. javanica VN1482 trên sâu khoang (ngày) (TB±SD) Vật chủ chết Sợi nấm bắt đầu mọc Nấm hình thành bào tử Nấm bao phủ cơ thể Bào tử nấm phòng thích Nồng độ bào tử Vòng đời của nấm CT1 (60%) 3,13 ± 0,90b 2,83 ± 0,25a 2.27 ± 0,57b 2,40 ± 0,66a 2,30 ± 0,14b 2,13 x 108 12,93 ± 2,52 CT2(70%) 3,37 ± 0,19a 2,90 ± 1,00a 2,23 ± 0,77b 2,03 ± 0,76a 3,07 ± 0,78a 1,39 x 108 13,60 ± 3,41 CT3(80%) 3,13 ± 0,45a 3,23 ± 0,35a 2,97± 1,07a 2,23 ± 0,14a 3,07 ± 1,09a 2,48 x108 14,63 ± 3,09 CT4(90%) 3,50 ± 0,32a 3,33 ± 0,99a 0,15a ± 2,97 2,40 ± 1,09b 2,93 ± 1,21a x 1082,10 15,13 ± 3,76 LSD0,05 0,69 0,90 0,54 0,45 0,56 CV(%) 10,5 14,7 10,3 9,8 8,8
Ghi chú: Các chữ cái a,b,c trong cột sai khác có ý nghĩa về mặt thống kê ở mức P<0,05
3.3.2.3. Ảnh hưởng của nhiệt độ ổn định 250 và các độ ẩm khác nhau đến vòng đời phát triển của chủng nấm Isaria javanica VN1487 trên sâu khoang
Qua kết quả thể hiện ở bảng 3.3.13 thì đối với sâu khoang hại lạc thời gian từ khi nấm I.javanica VN1487 tiếp xúc xâm nhiễm đến khi làm sâu khoang chết trung bình ngắn nhất là 3,10 ± 0,45 ngày (ở độ ẩm 80%) và dài nhất là 3,61 ± 0,34 ngày (ở độ ẩm 70%). Thời gian trung bình đến khi nấm bắt đầu mọc ra bên ngoài xác sâu chết lớn nhất ở ở độ ẩm 80% và các nhiệt độ khác nhau là 3,06 ± 0,35 ngày và ngắn nhất ở CT2 (ở độ ẩm 70%) là 2,06 ± 1,00 ngày , giai đoạn này kéo dài trong khoảng từ 2,06- 3,06 ngày.
Thời gian trung bình đến khi thấy nấm bao phủ hoàn toàn cơ thế mọt nhanh nhất là 2,36 ± 1,09 ngày(ở độ ẩm 90%), và chậm nhất là 2,44 ± 0,14; thời gian trung bình đến khi bào tử nấm bắt đầu hình thành nhanh nhất là 2,40 ± 0,77 ngày (ở độ ẩm 70%) và chậm nhất là 2.93 ± 0,31 ngày (ở độ ẩm 60%), thời gian giai đoạn bào tử nấm giải phóng khỏi xác mọt chết nhanh nhất là 2,37 ± 1,21 ngày (ở độ ẩm 90%) và chậm nhất là 2,83 ± 1,09 ngày. Nấm I.javanica VN1472 hoàn thành vòng đời hay chu kỳ phát triển trên sâu khoang nhanh nhất là 13,04 ± 3,64 ngày (ở độ ẩm 70%) và chậm nhất 14,09 ± 1,52 ngày (ở độ ẩm 60%) (bảng 3.1.13)
Ở vòng đời ngắn nhất thì thời gian nấm gây chết sâu khoang trung bình 3,60 ± 0,34 ngày, sau quá trình biến đổi bệnh bên trong thì trung bình sau 2,07 ± 1,00 ngày sợi nấm phát triển ra bên ngoài cơ thể và thời gian để hệ sợi nấm bao phủ cơ thể sâu khoang trung bình là 2,30 ± 0,78 ngày. Cùng với qúa trình hình thành sợi nấm thì cũng bắt đầu phát sinh bào tử nhanh, bào tử xuất hiện ngay cả khi sợi nấm mới bào phủ một phần cơ thể sâu khoang, nhưng sau 2,67 ± 0,76 ngày khi sợi nấm đã bao phủ hoàn toàn cơ thể sâu thì bào tử nấm mới hình thành nhiều và sau 2,40 ± 0,95 ngày tiếp theo thì bào tử nấm phóng thích lây nhiễm ra môi trường xung quanh.
Nấm gây bệnh và hoàn thành chu kỳ phát triển khá nhanh, nấm sinh trưởng mạnh và hình thành rất nhiều bào tử trên cơ thể vật chủ sâu khoang. Khi bào tử thành thục và phóng ra môi trường xung quanh là kết thúc một chu kỳ phát triển của nấm.
Hình 3.23: Vòng đời phát triển của chủng nấm VN1487 thí nghiệm nhiệt độ ổn định 250 và các độ ẩm khác nhau
3.3.2.4. Ảnh hưởng của nhiệt độ ổn định 250 và các độ ẩm khác nhau đến vòng đời phát triển của chủng nấm Isaria javanica VN1801trên sâu khoang
Sau khi phun chế phẩm I. javanica VN1801 lên sâu khoang hại lạc thì thời gian từ khi nấm tiếp xúc xâm nhiễm đến khi làm sâu khoang chết trung bình ngắn nhất 3,23 ± 0,34 ngày (ở độ ẩm 70%) và dài nhất 3,98 ± 0,45 ngày (ở độ ẩm 80%). Thời gian trung bình đến khi nấm bắt đầu mọc ra bên ngoài xác sâu chết lớn nhất ở ở độ ẩm 90% là 2,41 ± 0,99 ngày và ngắn nhất ở CT2 là 2,30± 1,00 ngày, giai đoạn này kéo dài trong khoảng từ 2,30- 2,41 ngày.
Thời gian trung bình đến khi thấy nấm bao phủ hoàn toàn cơ thế mọt nhanh nhất là 2,93 ± 1,09 ngày(ở độ ẩm 90%), và chậm nhất là 3,31 ± 0,14; thời gian trung bình đến khi bào tử nấm bắt đầu hình thành nhanh nhất là 2,36 ± 0,15 ngày (ở độ ẩm 70%) và chậm nhất là 2.93 ± 0,31 ngày (ở độ ẩm 60%), thời gian giai đoạn bào tử nấm giải phóng khỏi xác mọt chết nhanh nhất là 2,37 ± 1,21 ngày (ở độ ẩm 90%) và chậm nhất là 2,83 ± 1,09 ngày. Nấm I. javanica VN1472 hoàn thành vòng đời hay chu kỳ phát triển trên sâu khoang nhanh nhất là 12,41 ± 3,65 ngày (ở độ ẩm 70%) và chậm nhất là 14,89 ± 3,10 ngày (ở độ ẩm 80%) (bảng 3.3.14).
Ở vòng đời ngắn nhất thì thời gian nấm gây chết sâu khoang trung bình 3,60 ± 0,34 ngày, sau quá trình biến đổi bệnh bên trong thì trung bình sau 2,07 ± 1,00 ngày sợi nấm phát triển ra bên ngoài cơ thể và thời gian để hệ sợi nấm bao phủ cơ thể sâu khoang trung bình là 2,30 ± 0,78 ngày. Cùng với qúa trình hình thành sợi nấm thì cũng bắt đầu phát sinh bào tử nhanh, bào tử xuất hiện ngay cả khi sợi nấm mới bào phủ một phần cơ thể sâu khoang, nhưng sau 2,67 ± 0,76 ngày khi sợi nấm đã bao phủ hoàn toàn cơ thể sâu thì bào tử nấm mới hình thành nhiều và sau 2,04 ± 0,78 ngày tiếp theo thì bào tử nấm phóng thích lây nhiễm ra môi trường xung quanh.
Nấm gây bệnh và hoàn thành chu kỳ phát triển khá nhanh, nấm sinh trưởng mạnh và hình thành rất nhiều bào tử trên cơ thể vật chủ sâu khoang. Khi bào tử thành thục và phóng ra môi trường xung quanh là kết thúc một chu kỳ phát triển của nấm. Trong vòng đời thì giai đoạn nấm mọc và hình thành vào tử là ngắn nhất, bào tử hình thành nhanh và nhiều. Đặc điểm này thuận lợi cho quá trình gây bệnh, phát tán và lây lan bào tử nấm ra môi trường, nên tăng khả năng tiếp xúc và lây nhiễm sang cá thể xung quanh
Hình 3.24: Vòng đời phát triển của chủng nấm VN1801 thí nghiệm nhiệt độ ổn định 250 và các độ ẩm khác nhau
Bảng 3.3.13: Vòng đời phát triển của chủng nấm VN1487 thí nghiệm nhiệt độ ổn định 250 và các độ ẩm khác nhau
Công thức
Thời gian các giai đoạn phát triển của chủng nấm I. javanica VN1487 trên sâu khoang (ngày) (TB±SD) Vật chủ chết Sợi nấm bắt đầu mọc Nấm hình thành bào tử Nấm bao phủ cơ thể Bào tử nấm phòng thích Nồng độ bào tử Vòng đời của nấm CT1 (60%) 3,22 ± 0,13a 3,31 ± 0,25a 2,72 ± 0,66a 2,40 ± 0,14ab 2,43 ± 0,34a 2,10 x 108 14,09 ± 1,52 CT2 (70%) 3,61 ± 0,34a 2,06 ± 1,00b 2,68 ± 0,76a 2,29 ± 0,78b 2,40 ± 0,95a 1,45 x 108 13,07 ± 3,64 CT3 (80%) 3,10 ± 0,45a 3,06 ± 0,35a 2,44 ± 0,14a 2,56 ± 1,09a 2,83 ± 0,35a 3,01 x108 14,00 ± 3,24 CT4(90%) 3,13 ± 0,24a 2,94 ± 0,99a 2,36 ± 1,09a 2,45 ± 1,21ab 2,37 ± 0,98a x 1081,90 13,20 ± 2,09 LSD0,05 0,51 0,48 1,08 0,22 0,94 CV(%) 18,1 9,1 16,1 5,1 14,9
Bảng 3.3.14: Vòng đời phát triển của chủng nấm VN1801 thí nghiệm nhiệt độ ổn định 250 và các độ ẩm khác nhau
Công thức
Thời gian các giai đoạn phát triển của chủng nấm I. javanica VN1801 trên sâu khoang (ngày) (TB±SD) Vật chủ chết Sợi nấm bắt đầu mọc Nấm hình thành bào tử Nấm bao phủ cơ thể Bào tử nấm phòng thích Nồng độ bào tử Vòng đời của nấm CT1(60%) 3,26 ± 0,13b 2,41 ± 0,25ab 2.98 ± 0,57a 3,31 ± 0,66a 2,42 ± 0,14a 0,98 x 108 14,34 ± 1,76 CT2(70%) 3,23 ± 0,34b 2,29 ± 1,00b 2,98 ± 0,77a 3,06 ± 0,76a 2,04 ± 0,78a 1,04 x 108 13,60 ± 2,98 CT3 (80%) 3,98 ± 0,45a 2,56 ± 0,35a 2,64± 1,07a 3,07 ± 0,14a 2,32 ± 1,09a 2,19 x108 14,57 ± 3,10 CT4(90%) 3,97 ± 0,24a 2,41 ± 0,99ab 0,15a ± 2,36 2,93 ± 1,09a 2,439 ± 1,21a x 1082,87 14,06 ± 2,01 LSD0,05 0,54 0,18 0,62 0,55 0,45 CV(%) 10,3 3,4 11,3 8,8 9,8
Ghi chú: Các chữ cái a,b,c trong cột sai khác có ý nghĩa về mặt thống kê ở mức P<0,05.
3.3.2.5. Ảnh hưởng của nhiệt độ ổn định 250 và các độ ẩm khác nhau đến vòng đời phát triển của chủng nấm Isaria javanica VN1802 trên sâu khoang
Từ kết quả thể hiện ở bảng 3.3.15 thì thời gian nấm gây chết sâu khoang trung bình 3,30 ± 0,34 ngày, sau quá trình biến đổi bệnh bên trong thì trung bình sau, 3,07 ± 1,00 ngày sợi nấm phát triển ra bên ngoài cơ thể và thời gian để hệ sợi nấm bao phủ cơ thể sâu khoang trung bình là 2,03 ± 0,76 ngày. Cùng với qúa trình hình thành sợi nấm thì cũng bắt đầu phát sinh bào tử nhanh, bào tử xuất hiện ngay cả khi sợi nấm mới bào phủ một phần cơ thể sâu khoang, nhưng sau 2,30 ± 0,77 ngày khi sợi nấm đã bao phủ hoàn toàn cơ thể sâu thì bào tử nấm mới hình thành nhiều và sau 2,57 ± 0,78 ngày tiếp theo thì bào tử nấm phóng thích lây nhiễm ra môi trường xung quanh.
Sau khi bào tử nấm Isaria javanica VN1802 được xâm nhiễm vào bên trong cơ thể sâu khoang, trải qua quá trình ủ bệnh, biến đổi bệnh gây chết sâu khoang rồi phát triển bệnh và thể hiện triệu chứng ra bên ngoài đó là khả năng phát triển của hệ sợi nấm và bào tử đính conidia. Từ kết quả nghiên cứu trên có thể khái quát chu kỳ phát triển của nấm Isaria javanica VN1802 trên sâu khoang theo sơ đồ hình 3.3.1
Trường hợp phun nhiễm thì bào tử nấm Isaria javanica VN1802 được tiếp xúc với cơ thể côn trùng, gặp điều kiện thuận lợi thì sau khoảng 36-48 giờ sẽ nảy mầm tạo thành ống mầm đâm xuyên qua vỏ kitin (cuticun) bằng cách sử dụng phối hợp cả lực cơ lẫn cả các enzym phân hủy vỏ sâu khoang (lipaza, proteaza, chitinaza), chúng tấn công và hòa tan lớp vỏ. Sau khi xâm nhập vào bên trong cơ thể sâu khoang, bào tử tiếp tục nảy mầm thành sợi nấm, phát triển nhanh phân nhánh tạo nên hệ sợi nấm chằng chịt bên trong cơ thể sâu. Hệ thống miễn dịch của sâu khoang phải huy động hết các tế bào bạch huyết để chống đỡ, sử dụng các tế bào thực bào và tiết ra các chất đối kháng. Tuy nhiên khi đã ở trong cơ thể sâu khoang thì nấm gây ra các tác động làm rối loạn quá trình sinh lý, sinh hóa trong cơ thể sâu khoang.
Hình 3.25: Vòng đời phát triển của chủng nấm VN1802 thí nghiệm nhiệt độ ổn định 250 và các độ ẩm khác nhau
Bảng 3.3.15: Vòng đời phát triển của chủng nấm VN1802 thí nghiệm nhiệt độ ổn định 250 và các độ ẩm khác nhau
Công thức
Thời gian các giai đoạn phát triển của chủng nấm I. javanica VN1487 trên sâu khoang (ngày) (TB±SD) Vật chủ chết Sợi nấm bắt đầu mọc Nấm hình thành bào tử Nấm bao phủ cơ thể Bào tử nấm phòng thích Nồng độ bào tử Vòng đời của nấm CT1(60%) 3,20 ± 0,73b 3,33 ± 0,25a 2,41± 0,97b 2,40 ± 0,62a 3,13 ± 0,14ab 1,49 x 108 14,46 ± 2,71 CT2 (70%) 3,32 ± 0,34b 3,05 ± 1,00a 2,30 ± 0,77b 2,01 ± 0,76a 2,57 ± 0,78b 2,05 x 108 13,27 ± 3,24 CT3(80%) 3,74 ± 0,45a 3,08 ± 0,35a 2,59± 1,07a 2,33 ± 0,14a 3,13 ± 1,09ab 1,02 x108 14,81 ± 1,70 CT4 (90%) 3,40 ± 0,24ab 2,93 ± 0,99a 0,15b ± 2,37 2,41 ± 1,09a 3,50 ± 1,21a x 1082,89 14,63 ± 2,09 LSD0,05 0,34 0,55 0,16 0,45 0,69 CV(%) 6,7 8,8 3,4 9,8 10,5
Ghi chú: Các chữ cái a,b,c trong cột sai khác có ý nghĩa về mặt thống kê ở P< 0,05
Hình 3.26: Vòng đời phát triển của nấm chủng VN1802 thí nghiệm nhiệt độ ổn định 250 và các độ ẩm khác nhau
Sau khi sâu khoang chết thì cơ thể bị cứng lại do các sợi nấm đan xen lại với nhau, chuyển dần sang màu nâu đen. Sau 7 - 8 ngày thì hệ sợi nấm phát triển nhanh ra bên ngoài và bao phủ kín trên bề mặt cơ thể, sợi nấm có màu trắng sữa, sau 9 - 11 ngày bào tử hình thành nhiều, dạng bột màu nâu tím đến màu xám. Sâu khoang nhiễm nấmphản ứng chậm chạp với những kích thích từ bên ngoài các đốt co ngắn, màng ngăn giữa các đốt dày lên cứng lại, cơ thể mất nước dần, teo nhỏ lại và cứng toàn thân. Vị trí vi nấm xâm nhập vào cơ thể sâu ở lỗ thở; các ngấn đốt cơ thể là những nơi mà lớp vỏ cuticun mềm (không có protein biến tính và kitin) nên dễ xâm nhập qua hơn và độ ẩm ở đó cao thuận lợi cho quá trình bào tử nảy mầm. Đây cũng là những vị trí mà nấm sau khi phát triển bên trong cơ thể sẽ mọc ra bên ngoài.
(4) Hình thành bào tử 2,30 ± 0,77 ngày (3) Sợi nấm bao phủ 2,03 ± 0,76 ngày Tổng vòng đời của nấm I.saria trên sâu
khoang 13,27 ± 3,24 ngày (2)Sợi nấm bắt đầu mọc 3,07 ± 1,00ngày (5) Bào tử phóng thích 2,57 ± 0,78 ngày
(1) Thời gian gây chết 3,30 ± 0,34 ngày
Nấm gây bệnh và hoàn thành chu kỳ phát triển khá nhanh, nấm sinh trưởng mạnh và hình thành rất nhiều bào tử trên cơ thể vật chủ sâu khoang. Khi bào tử thành thục và phóng ra môi trường xung quanh là kết thúc một chu kỳ phát triển của nấm. Trong vòng đời thì giai đoạn nấm làm chết sâu khoang là ngắn nhất, bào tử hình thành nhanh và nhiều. Đặc điểm này thuận lợi cho quá trình gây bệnh, phát tán và lây lan bào tử nấm ra môi trường, nên tăng khả năng tiếp xúc và lây nhiễm sang cá thể xung quanh. Đây là những dẫn liệu đầu tiên làm cơ sở để đi sâu phân tích về cơ chế gây bệnh, xác định yếu tố quyết địch đến hiệu quả chế phẩm nấm và khả năng lây nhiễm bào tử từ các cá thể nhiễm ban đầu ra nhiều cá thể khác. Sức sống và khả năng lây nhiễm bào tử càng cao thì khả năng duy trì hiệu lực nấm càng dài. Nhờ khả năng