5.1. Phương pháp thu thập mẫu sàng lọc bệnh suy giáp trạng bẩm sinh
• Thời điểm thu thập mẫu
Thời điểm thu thập mẫu thường dựa vào thời điểm bà mẹ khi ra viện.
Thời điểm thu thập mẫu thông thường là 24 giờ sau sinh vì ở thời điểm này chuyển hoá của trẻ đã được thiết lập và cân bằng với môi trường mới [16]. Đặc biệt đối với sàng lọc suy giáp bẩm sinh, việc này sẽ làm tăng các trường hợp (+) giả do TSH tăng cao sinh lý trong 24 giờ đầu. Vì vậy thời điểm tốt nhất cho lấy
mẫu là từ 3-7 ngày tuổi (tối thiểu sau 48 giờ), không có nguyên tắc cứng nhắc cho thời gian tối đa thu thập mẫu, nhưng mẫu thu thập quá muộn sẽ làm hỏng mục đích của chương trình sàng lọc.
• Thẻ thu thập mẫu
Thẻ thu thập mẫu là loại giấy thấm để thu thập mẫu máu và phần điền các thông tin về hành chính và chuyên môn cơ bản để quản lý và để gọi lại khi mẫu nghi ngờ hoặc không đảm bảo chất lượng chuyên môn [12].
Điền thẻ cho kết quả tốt nhất nên dùng một bút mực bi màu xanh hoặc mực màu đen. Người điền mẫu phải điền đầy đủ các mục. Cách viết dễ đọc và điền các dữ kiện phải chính xác.
Thông tin cơ bản bao gồm: họ tên bé và ngày tháng năm sinh, chiều cao, cân nặng, dân tộc, họ tên mẹ, họ tên bố và địa chỉ, điện thoại nếu có. Chú ý phải ghi chính xác thời gian lấy mẫu và vị trí lấy mẫu. Ngoài ra cần ghi rõ tiền sử sản khoa, cách đẻ, trẻ sinh 1 hay sinh đôi, sinh ba, bú mẹ hay bú bình, có truyền máu hay thay máu không, số lượng là bao nhiêu? Cần mô tả tình trạng của trẻ lúc lấy mẫu, có dùng kháng sinh không? Nếu có thì liều lượng bao nhiêu?
Khi điền xong các thông tin vào mẫu, người thu thập tránh chạm tay vào các vòng tròn lấy máu hoặc để mẫu tiếp xúc với các chất như cồn, dầu.
5.2. Kỹ thuật lấy máu
Phương pháp lấy máu gót chân là phương pháp thuận tiện nhất đối với trẻ sơ sinh trong chương trình sàng lọc sơ sinh. Phương pháp này dễ ứng dụng và nguy cơ biến chứng thấp. Phương pháp được đào tạo và huấn luyện cho tất cả các cán bộ y tế của các cơ sở y tế. Các cán bộ có thể lấy mẫu máu tại gia đình, cộng đồng nếu trẻ đẻ tại nhà hoặc không được làm sàng lọc tại các cơ sở y tế.
Sau khi lấy mẫu máu, thẻ cần được để khô ngoài không khí ít nhất 4 giờ ở bề mặt phẳng và không thấm nước. Giá đỡ đặc biệt đã có sẵn cho mục đích này. Thẻ mẫu không cần cất trong tủ lạnh, chỉ cần giữ ở ngăn kéo hoặc ngăn tủ, đặt trong túi ni lông, không đuợc tiếp xúc với lò sưởi hoặc tiếp xúc trực tiếp với ánh sáng mặt trờì. Các thẻ cần tránh để gần với bất kỳ chất nào có mùi như sơn,vecni,các loại bình phun hoặc thuốc xịt côn trùng. Khi cầm các thẻ máu không chạm vào các cột máu hoặc làm bẩn chúng.
Thẻ điền xong phải gửi đến phòng xét nghiệm 24 giờ sau khi thu thập. Không lưu giữ mẫu máu đợi nhiều mới gửi vì điều này có thể làm chậm kết quả.Khi gửi các mẫu, các thẻ được gói trong giấy sạch và đặt so le sao cho các cột máu trong các mẫu liền kề không tiếp xúc với nhau. Các mẫu đặt trong phong bì chống ẩm và chuyển đến phòng xét nghiệm. Có thể vận chuyển mẫu bằng nhiều đường khác nhau:
• Theo đường bưu điện: ngoài phong bì ghi “chương trình sàng lọc” để nhân viên bưu điện hiểu và vận chuyển ưu tiên ngay đến trung tâm xét nghiệm.
• Vận chuyển trực tiếp bằng tay: hàng ngày có nhân viên của chương trình đi xe máy đến các nhà hộ sinh hoặc khoa sản trong phạm vi nhất định của tỉnh,khu vực (Quận,huyện…) lấy mẫu mang về trung tâm xét nghiệm.
• Để thích ứng với điều kiện chuyển mẫu trên, trung tâm xét nghiệm phải có người thường trục 24/24 giờ để nhận máu.
5.3. Phương pháp kỹ thuật sử dụng để xét nghiệm bệnh suy giáp trạng bẩm sinh
Đo nồng độ TSH bằng kỹ thuật ELISA sandwich [3].
Đây là kỹ thuật đáp ứng được mục tiêu của chương trình sàng lọc, nó mang lại hiệu quả kinh tế cao và đảm bảo được chất lượng xét nghiệm trên quy mô lớn. Vì vậy phương pháp sàng lọc sơ sinh sử dụng kỹ thuật ELISA đã được lựa chọn vì nó đã đáp ứng được mọi yêu cầu cơ bản đề ra.
• Cơ sở miễn dịch học :
Dựa trên phản ứng miễn dịch: phản ứng giữa kháng nguyên và kháng thể
đặc hiệu tương ứng.Trong các phuơng pháp miễn dịch đánh dấu,các chất định lượng (hocmon,thuốc…) được coi là các kháng nguyên, kháng thể là các chế phẩm được điều chế từ huyết thanh của động vật thí nghiệm hoặc bằng kỹ thuật của công nghệ sinh học hiện đại.
Các chất ghi dấu: trong các phương pháp miễn dịch đánh dấu, thành phần
được ghi dấu có thể là kháng nguyên hoặc kháng thể. Sau khi được ghi dấu các thành phần này không thay đổi về cấu trúc phân tử và hoạt tính sinh học (tính kháng nguyên,tính kháng thể). Chất ghi dấu có thể trực tiếp gây ra tín hiệu đo như trong phương pháp miễn dịch enzym ELISA [6].
• Kỹ thuật ELISA trong sàng lọc suy giáp bẩm sinh
Nguyên lý: test định lượng TSH Bio-Rad dựa trên nguyên tắc enzym-
immunoassay sandwich EIA.
Mẫu xét nghiệm được ủ dung dịch chứa kháng thể đơn dòng kháng TSH được đánh dấu bằng peroxidase trong khay vi thể được tráng kháng thể đơn dòng kháng TSH khác trên bề mặt. Sau khi ủ khay được rửa sạch các kháng thể kháng TSH được đánh dấu còn thừa. TSH trong mẫu được xác định bằng sản phẩm màu của phản ứng giữa chất cộng hợp với chất sinh màu. Nồng độ TSH trong mẫu tương ứng với màu được đo tại bước sóng 450nm. Đơn vị tính của TSH là µIU/ml máu toàn phần..
• Yêu cầu về kiểm chuẩn
Để đảm bảo chuẩn thực hành tốt phòng xét nghiệm các mẫu chuẩn mẫu TSH có nồng độ bình thường, bất thường luôn được thực hiện song song với mẫu
bệnh phẩm. Mỗi phòng xét nghiệm nên tự thiết lập một khoảng chấp nhận riêng của mình.
• Hướng dẫn tính kết quả
Sử dụng 6 chuẩn trong kit để dựng đường cong chuẩn logistic 4-parameter để tính kết quả [2].
Kết quả được xác định theo khoảng
Bình thường : 0-20µIU/ml
Bất thường : > 20µIU/ml
Giá trị này chỉ là hướng dẫn cho mỗi phòng xét nghiệm nên xây dựng giá trị cut off riêng cho mình.