O OAc NCS AcO AcO OAc + O OAc NH AcO AcO OAc C NH S N S N H2 R N S R Qui trỡnh phản ứng chung
Cho hỗn hợp 2,3,4,6-tetra-O-axetyl-β-D-glucopyranozyl isothioxyanat (0,005 mol) và 2-aminobenzothiazol thế (0,005 mol) trong 10 ml dioxan khan. Hỗn hợp phản ứng được đun hồi lưu trong lũ vi súng 20 - 35 phỳt ở chế độ Medium. Kết thỳc phản ứng cất loại dioxan, kết tinh lại phần cặn trong dung mụi hỗn hợp toluen:etanol (1:1).
Sau đõy là cỏc trường hợp cụ thể.
1) N-(2,3,4,6-tetra-O-axetyl-β-D-glucopyranozyl)-N’-(6-bromobenzothiazol- 2’-yl)-thioure (T1)
Từ 2,3,4,6-tetra-O-axetyl-β-D-glucopyranozyl isothioxyanat (0,005 mol; 1,945 g), 2-amino-6-bromobenzothiazol (0,005 mol; 1,145 g), hồi lưu trong 25 phỳt. Sản phẩm là chất rắn cú màu vàng nhạt, hiệu suất đạt 1,61 g (52 %), điểm núng chảy: 200 - 202ºC.
2) N-(2,3,4,6-tetra-O-axetyl-β-D-glucopyranozyl)-N’-(6-clorobenzothiazol-2’- yl)-thioure (T2)
Từ 2,3,4,6-tetra-O-axetyl-β-D-glucopyranozyl isothioxyanat (0,005 mol; 1,945 g), 2-amino-6-clorobenzothiazol (0,005 mol; 0,923 g), hồi lưu trong 20 phỳt. Sản phẩm là chất rắn cú màu trắng, hiệu suất đạt 1,58 g (55 %), điểm núng chảy 210 - 212ºC.
3) N-(2,3,4,6-tetra-O-axetyl-β-D-glucopyranozyl)-N’-(6-etoxybenzothiazol-2’- yl)-thioure (T3)
Từ 2,3,4,6-tetra-O-axetyl-β-D-glucopyranozyl isothioxyanat (0,005 mol; 1,945 g), 2-amino-6-etoxybenzothiazol (0,005 mol; 0,976 g), hồi lưu trong 25
31
phỳt. Sản phẩm là chất rắn cú màu trắng, hiệu suất đạt 1,92 g (66 %), điểm núng chảy: 202 - 204ºC.
4) N-(2,3,4,6-tetra-O-axetyl-β-D-glucopyranozyl)-N’-(6-metylbenzothiazol-2’- yl)-thioure (T4)
Từ 2,3,4,6-tetra-O-axetyl-β-D-glucopyranozyl isothioxyanat (0,005 mol; 1,945 g), 2-amino-6-metylbenzothiazol (0,005 mol; 0,821 g), hồi lưu trong 25 phỳt. Sản phẩm là chất rắn cú màu trắng, hiệu suất đạt 1,44 g (54 %), điểm núng chảy: 201 - 203ºC.
5) N-(2,3,4,6-tetra-O-axetyl-β-D-glucopyranozyl)-N’-(6- cacbometoxybenzothiazol-2’-yl)-thioure (T5)
Từ 2,3,4,6-tetra-O-axetyl-β-D-glucopyranozyl isothioxyanat (0,005 mol; 1,945 g), 2-amino-6-cacbometoxybenzothiazol (0,005 mol; 1,041g), hồi lưu trong 30 phỳt. Sản phẩm là chất rắn cú màu trắng, hiệu suất đạt 1,70 g (57 %), điểm núng chảy: 202 - 203ºC.
6) N-(2,3,4,6-tetra-O-axetyl-β-D-glucopyranozyl)-N’-(6- cacboetoxybenzothiazol-2’-yl)-thioure (T6)
Từ 2,3,4,6-tetra-O-axetyl-β-D-glucopyranozyl isothioxyanat (0,005 mol; 1,945 g), 2-amino-6-cacboetoxybenzothiazol (0,005 mol; 1,111 g), hồi lưu trong 30 phỳt. Sản phẩm là chất rắn cú màu trắng, hiệu suất đạt 1,47 g (48 %), điểm núng chảy: 203 - 205ºC
7) N-(2,3,4,6-tetra-O-axetyl-β-D-glucopyranozyl)-N’-(6-cacbopropoxybenzo- thiazol-2’-yl)-thioure (T7)
Từ2,3,4,6-tetra-O-axetyl-β-D-glucopyranozyl isothioxyanat (0,005 mol; 1,945 g), 2-amino-6-cacbopropoxybenzothiazol (0,005 mol; 1,181 g); hồi lưu trong 30 phỳt. Sản phẩm là chất rắn cú màu trắng, hiệu suất đạt 1,87 g (60 %), điểm núng chảy: 205 - 206ºC.
8) N-(2,3,4,6-tetra-O-axetyl-β-D-glucopyranozyl)-N’-(6- cacboisopropoxybenzo-thiazol-2’-yl)-thioure (T8)
Từ2,3,4,6-tetra-O-axetyl-β-D-glucopyranozyl isothioxyanat (0,005 mol; 1,945 g), 2-amino-6-cacboisopropoxybenzothiazol (0,005 mol; 1,181 g); hồi lưu trong 30 phỳt. Sản phẩm là chất rắn cú màu trắng, hiệu suất đạt 2,12 g (68 %), điểm núng chảy 212 - 214ºC.
9) N-(2,3,4,6-tetra-O-axetyl-β-D-glucopyranozyl)-N’-(6-cacbobutoxybenzo- thiazol-2’-yl)thioure (T9)
Từ 2,3,4,6-tetra-O-axetyl-β-D-glucopyranozyl isothioxyanat (0,005 mol; 1,945 g) 2-amino-6-cacbobutoxybenzothiazol (0,005 mol; 1,251 g), hồi lưu trong 30 phỳt. Sản phẩm là chất rắn cú màu trắng, hiệu suất đạt 2,81 g (88 %), điểm núng chảy: 197 - 198ºC.
32
10) N-(2,3,4,6-tetra-O-axetyl-β-D-glucopyranozyl)-N’-(4,6-
đimetylbenzothiazol-2’-yl)-thioure (T10)
Từ 2,3,4,6-tetra-O-axetyl-β-D-glucopyranozyl isothioxyanat (0,005 mol; 1,945 g), 2-amino-4,6-đimetylbenzothiazol (0,005 mol; 0,936 g), hồi lưu trong 30 phỳt. Sản phẩm là chất rắn cú màu trắng, hiệu suất đạt 2,21 g (78 %), điểm núng chảy: 206 - 208ºC.
2.4. THỬ NGHIỆM HOẠT TÍNH SINH HỌC 2.4.1. Chất liệu
Mụi trường: Mụi trường cơ bản dựng để kiểm tra tớnh nhạy cảm của vi khuẩn là Muller-Hinton (MH) để nuụi cấy vi khuẩn Gram-(–) và Gram-(+) cũn mụi trường Hansen để nuụi cấy nấm men.
Vi sinh vật: Cỏc vi sinh vật được chọn để nghiờn cứu khả năng ức chế của một số hợp chất 2-aminobenzothiazol thế và thioure chứa dị vũng benzothiazol thế là:
- Trực khuẩn Gram-(–) Klebsiella pneumonia (VTCC-B-0815-Việt Nam).
- Cầu khuẩn Gram-(+) Staphylococcus aureus (JCM2413-Nhật Bản).
- Nấm men Candida albicans (NBRC 1594 - Nhật Bản).
Do Trung tõm bảo tàng giống chuẩn vi sinh (VTCC) - Viện Vi sinh vật và Cụng nghệ Sinh học - ĐHQG Hà Nội cấp ngày 17 thỏng 7 năm 2009.
Đĩa Petri: Sử dụng đĩa cú đường kớnh 100 mm, chất liệu thủy tinh trung tớnh,
đỏy phẳng, trong khi đổ mụi trường, cỏc đĩa luụn được đặt trờn mặt phẳng ngang, bằng, đảm bảo cho độ sõu của thạch ở mọi vị trớ trong đĩa bằng nhau. Độ dày thớch hợp của lớp thạch là 4 mm ± 0,5 (tương ứng với 25 ml thạch trong một đĩa Petri).
2.4.2. Phương phỏp tiến hành
Chuẩn bị mụi trường: Cõn chớnh xỏc 18 g thạch và hũa tan vào 1 tớt nước cất Chỳ ý: cần duy trỡ mụi trường nuụi cấy ở nhiệt độ 37oC trong thời gian 15 giờ. Sau
đú phải sử dụng ngay để khụng làm giảm khă năng đệm của mụi trường.
Cấy vi khuẩn vào đĩa mụi trường: Sử dụng một que tăm bụng vụ trựng nhỳng vào chủng vi khuẩn rồi ria đi ria lại trờn khắp mặt đĩa trong khi đĩa xoay 180o. Lưu ý đĩa mụi trường phải hoàn toàn khụ, nếu khụng phải đặt chỳng vào tủ ẩm 15 phỳt trước khi nuụi cấy vi khuẩn..
Ủấm: cỏc đĩa này được ủấm trong tủở 37oC trong 18 - 22 giờ.
Đọc vũng ức chế: Sau khi ủ ấm qua đờm, đường kớnh của khu vực ức chế được đo từ mặt phớa sau của đĩa (tớnh bằng mm).
33
CHƯƠNG III. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.1. TỔNG HỢP 2-AMINOBENZOTHIAZOL THẾ
Phản ứng giữa cỏc anilin thế với muối amoni thioxyanat với tỉ lệ mol 1:2 xảy ra trong dung mụi axit axetic băng, cú mặt Br2 làm xỳc tỏc chuyển húa gốc SCN- thành phõn tử halogen giả (SCN)2. Phản ứng thế xảy ra theo cơ chế SE vào vị trớ
octo của alinin thế. Sự vũng húa xảy ra ở nhiệt độ thấp (khoảng 5°C). Trong suốt quỏ trỡnh phản ứng tuyệt đối khụng cú mặt của nước vỡ phản ứng cú tạo ra sản phẩm trung gian cú nhúm -SCN, bị thủy phõn ngay khi cú mặt vết nước. Cơ chế của phản
ứng cú thể mụ tả như sau: Br2 + 2 SCN-→ (SCN)2 + 2Br- NH2 + (SCN)2 NH2 S N N S NH2 R R R N S C N H H .. N+ S H H N: _ N S H NH N S NH2 R R R R
Cỏc 2-aminobenzothiazol thế thu được ở dạng muối amoni nờn tan tốt trong nước, trung hũa dung dịch này bằng amoniac 25% tới mụi trường pH = 8 - 9, khi đú sản phẩm 2-aminobenzothiazol tỏch ra, lọc và rửa nhiều lần bằng nước để loại cỏc muối amoni, kết tinh lại bằng etanol 96% thu được cỏc tinh thể màu trắng và tớm nhạt.
Cấu trỳc phõn tử cỏc amin đó tổng hợp được xỏc nhận bằng điểm núng chảy và một số được xỏc nhận bằng phổ IR. Trờn phổ cho thấy xuất hiện cỏc băng súng hấp thụ đỉnh nhọn ở vựng 3300 - 3400 cm─1, đặc trưng cho dao động húa trị của nhúm -NH2 của nhúm amin bậc 1, tớn hiệu ở vựng 1650 cm─1 đặc trưng cho dao
động biến dạng của nhúm -NH2 và băng súng hấp thụở vựng 1638 cm─1, đặc trưng cho dao động húa trị của nhúm C=N cựng với tớn hiệu hấp thụ ở vựng 1600 - 1500 cm─1, đặc trưng cho dao động húa trị của nhúm C=C vũng benzothiazol. Hiệu suất
Chuyển dịch proton
34
tổng hợp cỏc dẫn xuất của amin đạt từ 50 - 68 %. Cỏc kết quả thực nghiệm cụ thể được ghi lại trong bảng 3.1.
Bảng 3.1. Một số 2-amino benzothiazol thếđó tổng hợp
Đnc (°C) Hợp chất
Theo tài liệu Đo được
Hiệu suất (%) A1 208 - 209 210 - 212 58 A2 147 - 149 145 -146 60 A3 150 - 152 154 -155 64 A4 117 - 119 118 - 120 55 A5 193 192 - 193 56 A6 244 - 245 242 - 245 50 A7 208 - 209 208 - 209 74 A8 206 - 208 206 - 208 68 A9 206 - 208 205 - 206 66 A10 140 - 141 140 - 142 67 3.2. TỔNG HỢP 2,3,4,6-TETRA-O-AXETYL-β-D-GLUCOPYRANOZYL ISOTHIOXIANAT