Sau khi xử lý thống kờ toỏn học được phương trỡnh đường thờm chuẩn thể hiện sự phụ thuộc Ip vào nồng độ dung dịch chuẩn metrodinazole 0,02 mg/ml thờm vào:
Ip= 1381,3. Cmetro + 2,22 (3.2)
Tớnh toỏn kết quả: Cho phương trỡnh đường thờm chuẩn Ip bằng khụng (O) và giải tỡm Cmetro: 1381,3. Cmetro + 2,22 = 0
Cmetro = │ │ = 0,0016 mg/ml
éộ đỳng của phương phỏp được xỏc định bằng cỏch thờm dung dịch chuẩn metrodinazole ở 3 nồng độ chớnh xỏc khỏc nhau (0,0024mg/ml; 0,004mg/ml và 0,0072mg/ml) vào 3 dung dịch nền như nhau là mẫu thử. Cỏch tiến hành:
Chuẩn bị 5 cốc cú dung tớch 25 ml và cú vạch chia thể tớch và 5 bỡnh định mức 25 ml. Dựng pipột lấy chớnh xỏc và cho vào tất cả 5 cốc mỗi cốc 3ml dung dịch metrodinazole chuẩn 0,02 mg/ml. Thờm vào tất cả cỏc cốc (giống nhau): 5 ml dung dịch đệm (photphat), pH= 4,60, chỉnh pH và định mức bằng nước cất hai lần. éối với mức nồng độ 0,004mg/ml lấy 5ml dung dịch chuẩn metrodinazole 0,02mg/ml, mức nồng độ 0,0072mg/ml lấy 9ml dung dịch chuẩn metrodinazole 0,02mg/ml). Tiến hành pha tương tự
éo cực phổ:đem cỏc mẫu đó chuẩn bị đo với cỏc thụng số tối ưu cho mỏy đo như ghi trong bảng 3.6. Khi đo thu được chiều cao dũng khuếch tỏn giới hạn xung vi phõn của metrodinazole và nền (Imetro+nền) và ghi cỏc kết quả (Imetro+nền). Lấy hiờu: (Imetro+nền - Inền) = Imetro. Thực tế chỳng tụi lấy 5ml dung dịch đệm (photphat), + 20 ml nước cất hai lần được 25 ml đem đo thỡ thấy đường cong cực phổ xung vi phõn gần như nằm ngang và chiều cao dũng khuếch tỏn giới hạn xung vi phõn của nền (INền ≈ 0,) cho nờn khụng phải lấy hiệu (Imetro+nền - Inền).
Thay chiều cao dũng khuếch tỏn giới hạn xung vi phõn (Imetro) vào phương trỡnh đường chuẩn (3.1) và tớnh được nồng độ metrodinazole Cx. Tớnh giỏ trị trung bỡnh nồng độ tỡm lại trung bỡnh (theo đường chuẩn), độ lệch chuẩn (S) và độ lệch chuẩn tương đối (RSD %) của nồng độ metrodinazole bằng chương trỡnh toỏn học thống kờ đó được lập sẵn bằng ngụn ngữ lập trỡnh Turbo-Pascal thu được kết quả ghi trong bảng 3.13.
Bảng 3.13. Kết quả xỏc định độ đỳng của metrodinazole trờn thiết bị cực phổ đa năng VA_757
Nồng độ chuẩn thờm vào nền (mg/ml) Số mẫu (bỡnh) Nồng độ chuẩn tỡm lại (mg/ml) Nồng độ tỡm lại trung bỡnh (đường chuẩn) éộ lệch chuẩn tương đối RSD(%) Hệ số thu hồi H (%) 0,0024 1 0,002402 .100 RSD%=.100=3,43 99,25 2 0,002385 3 0,002362 4 0,002266 5 0,002494 0,004 1 0,003986 0,003989 0,38 99,72 2 0,003987 3 0,004015 4 0,003982 5 0,003975 0,0072 1 0,007294 0,00723 0,58 100,41 2 0,007248 3 0,007197 4 0,007211 5 0,007198
Bảng trờn cho thấy tỷ lệ thu hồi của metrodinazole là cao (99,25% - 100,41%), cho thấy phương phỏp cú độ đỳng cao, khả năng tỡm lại được khỏ tốt đối với hoạt chất metrodinazole trong cỏc thuốc nghiờn cứu.
III.2. Ứng dụng phương phỏp cực phổ xung vi phõn để xỏc định hàm lượng hoạt chất C6H9N3O3 (metrodinazole) cú trong thuốc khỏng sinh do
một số Cụng ty Dược phẩm bỏn trờn thị trường Hà Nội
Trờn thị trường Hà Nội mẫu thuốc cú nhiều dạng khỏc nhau như: viờn nộn, viờn nộn bao phim, dạng bột trong viờn nang, dạng nhóo trong viờn nang hay dạng lỏng .Chỳng tụi phõn tớch thuốc metrodinazole dạng bột trong viờn nang Mẫu thuốc dạng bột hoặc viờn nộn cú thể chỉ chứa một loại hoạt chất (metrodinazole) và cỏc tỏ dược khỏc, cũng cú thể đi kốm với cỏc chất khỏc.
III.2.1. Xỏc định hàm lượng hoạt chṍt C6H9N3O3 (metrodinazole) trong viờn nang 250 mg do Cụng ty Dược phẩm Sanofi-Aventis Việt Nam sản xuṍt
Chuẩn bị mẫu: lấy 10 viờn nộn thuốc metrodinazole, đem cõn trờn cõn phõn tớch được m = 3848mg (Suy ra khối lượng trung bỡnh của một viờn là 3848: 10 = 384,8mg). Nghiền 10 viờn thành bột mịn, trộn đều. Cõn chớnh xỏc trờn cõn phõn tớch 3 mẫu được khối lượng: M1= 6,47mg;M2= 10,65mg; M3=13,2mg.
Cho lượng cõn mẫu1: 6,47mg vào cốc thờm vào 2ml HAc khan với 20ml nước cất 2 lần dựng đũa thủy tinh khấy cho đều thuốc tan hết. Chuyển toàn bộ hỗn hợp dung dịch sang bỡnh định mức 100ml, trỏng cốc bằng nước cất 2 lần cũng cho vào bỡnh định mức, thờm nước cất 2 lần đến vạch 100ml lắc kỹ.
III.2.1.1. Xỏc định hàm lượng hoạt chất metrodinazole bằng phương phỏp cực phổ xung vi phõn - éường chuẩn
Chuẩn bị dung dịch đo: Lấy chớnh xỏc 1,0 ml dung dịch nghiờn cứu chứa hoạt chất metrodinazole (Cx) của mẫu M1 cho vào cốc cú dung tớch 25 ml và cú vạch chia thể tớch, + 5ml dung dịch đệm photphat (pH= 4,60) ; thờm nước cất hai lần gần đến vạch 25 ml, đem hỗn hợp dung dịch đi kiểm tra pH cú thay đổi khụng (nếu cú thay đổi phải chỉnh lại), sau đú chuyển toàn bộ hỗn hợp dung dịch vào bỡnh định mức 25ml, thờm nước cất tới vạch định mức, lắc kỹ cho đều dung dịch.
Đo cực phổ: Rút dung dịch vừa pha vào cốc của mỏy đo cực phổ đa năng 757VA Computrace, đặt cỏc thụng số tối ưu cho mỏy đo (như ghi trong bảng 3.6.) Cho mỏy chạy, khi đó đo xong, đường cong cực phổ xung vi phõn hiện trờn màn hỡnh, nhỏy vào mục tỡm kiếm (search peak) sẽ hiện cỏc thụng số thế ứng với đỉnh pic (Ep), chiều cao dũng khuếch tỏn giới hạn xung vi phõn (Ip)...ghi kết quả chiều cao dũng khuếch tỏn giới hạn xung vi phõn (Ip(x)). éo
lặp lại 3 lần, lấy trung bỡnh cộng chiều cao Ip 3 lần đo ta được : Ip1= 2,053.10- 8A: 0 -100m -200m -300m -400m -500m -50.0n -40.0n -30.0n -20.0n -10.0n 0 I (A )
Hỡnh 3.11. Cực phổ đồ của mẫu thu được từ viờn metrodinazole- Sanofi- Aventis
Nhận xột: từ hỡnh 3.11 ta thấy 3 đường cực phổ của mẫu thuốc metrodinazole tương đối trựng nhau, chứng tỏ độ lặp của phộp đo tốt.
Thay Ip1= 2,053.10-8A vào phương trỡnh đường chuẩn (3.1) và tớnh nồng độ metrodinazole Cx .
C1 = = = 1,55.10-3 mg/ml
Nồng độ metrodinazole (Cx) ban đầu cú trong 25ml: Cx = = 0,03873mg
Tớnh hàm lượng hoạt chất metrodinazole so với trờn nhón:
Số mg hoạt chất metrodinazole cú trong 100ml hay trong mẫu: M1= 6,47mg: 0,03873mg x 100 = 3,873mg
Số mg hoạt chất C6H9N3O3 metrodinazole cú trong một viờn thuốc do Cụng ty Dược phẩm Sanofi-Aventis Việt Nam sản xuất
= 230,34mg
Hàm lượng(%) hoạt chất metrodinazole so với trờn nhón: x 100 % = 92,14%
III.2.1.2. Xỏc định hàm lượng hoạt chất metrodinazole bằng phương phỏp cực phổ xung vi phõn - Thờm chuẩn
Cỏch tiến hành và tớnh toỏn như mục: 2.1.1, tớnh toỏn thu được kết quả dưới đõy. 0 -100m -200m -300m -400m -500m -80.0n -60.0n -40.0n -20.0n 0 I (A )
Hỡnh 3.12. Cực phổ đồ thờm chuẩn của dung dịch metrodinazole– Sanofi- Aventis Việt Nam
Mẫu M1 = 6,47mg.
Ghi chỳ : +) Đường 1 : peak của 3ml dd mẫu metrodinazole
+) Đường 2 : peak của 3ml dd mẫu + 1ml dd chuẩn metrodinazole +) Đường 3 : peak của 3ml dd mẫu + 2ml dd chuẩn metrodinazole +) Đường 4 : peak của 3ml dd mẫu + 3ml dd chuẩn metrodinazole +) Đường 5: peak của 3ml dd mẫu + 4ml dd chuẩn metrodinazole
4 5 3 1 2 61
Nhận xột : khi thờm dung dịch chuẩn thỡ Ipic tăng và tương đối tuyến tớnh, chứng tỏ Ipic phụ thuộc tuyến tớnh vào nồng độ của hoạt chất metrodinazole đường thờm chuẩn , cú hệ số tương quan R2 ≈ 1.
Tớnh nồng độ metrodinazole Cx:
Nồng độ metrodinazole (Cx) ban đầu cú trong 25ml dung dịch: . Cx = = 0,04mg/ml
Số mg hoạt chất metrodinazole cú trong 100ml hay trong mẫu M1= 6,47mg: 0,04mg x 100 = 4mg
Số mg hoạt metrodinazole cú trong một viờn thuốc do Cụng ty Dược phẩm Sanofi-Aventis Việt Nam sản xuất :
= 237,9mg
Hàm lượng(%) hoạt chất C6H9N3O3 metrodinazole so với trờn nhón: x100% = 95,16%
Sự sai khỏc giữa 2 phương phỏp thờm chuẩn và đường chuẩn: x100% = 3,17%
là 3,17% < 5%, kết quả này cú thể chấp nhận được. Ngoài ra cú thể sử dụng phương phỏp đường chuẩn để xỏc định hàm lượng hoạt chất metrodinazole trong cỏc loại thuốc do cỏc Cụng ty dược khỏc nhau sản xuất, cú thể phõn tớch nhanh, hàng loạt, tiết kiệm thời gian và húa chất nhưng vẫn đảm bảo tớnh chớnh xỏc.
Cỏc mẫu M2, mẫu M3 cũng tiến hành tương tự như mẫu 1 Cỏc kết quả phõn tớch xỏc định hàm lượng hoạt chất metrodinazole trong cỏc mẫu M1, M2 và M3 sau khi xử lý dựa trờn chương trỡnh toỏn học thống kờ đó được lập sẵn bằng ngụn ngữ lập trỡnh Turbo-Pascal thu được kết quả (ghi bảng 3.14).
Bảng 3.14Kết quả định lượng metrodinazole trong viờn nang
metrodinazole (250 mg) do Cụng ty Dược phẩm Sanofi-Aventis Việt Nam sản xuất Mẫu thử Hàm.lượng C6H9N3O3 trong 1 viờn metrodinazole (mg) Hàm lượng (%) so với trờn nhón. Sai số giữa thờm chuẩn và đường chuẩn (%) éường chuẩn Thờm chuẩn éường
chuẩn Thờm chuẩn M1 230,35 237,9 92,14 95,16 3,02 M2 233,92 246,07 93,57 98,43 4,86 M3 235,37 242,91 94,15 97,16 3,01 Trung bỡnh 233,21±6,33 242,29± 5,87 93,28±2,53 96,92±2,35 3,64 éộ lệch chuẩn 2,55 2,37 1,02 0,95 RSD(%) 1,09 0,98 1,09 0,99 (%) 1,47 1,37 0,59 0,55
Sai số tương đối 2,72 2,43 2,72 2,44
Như vậy hàm lượng C6H9N3O3 trong 1 viờn nang metrodinazole 250mg là (233,21±6,33) mg theo đường chuẩn và ( 242,29± 5,87 ) theo phương phỏp thờm chuẩn. Chiếm (93,28±2,53)% theo (đường chuẩn) và (96,92±2,35)% theo (thờm chuẩn) so với nhón mỏc ghi của nhà sản xuất. éộ lệch khỏi giỏ trị trung bỡnh nhỏ hơn 3 và sai số tương đối nhỏ hơn 5%. éộ lệch chuẩn tương đối (RSD%) của hàm lượng C6H9N3O3 trong 1 viờn metrodinazole hàm lượng (%) so với trờn nhón < 2% (theo tiờu chuẩn kiểm nghiệm của bộ Y tế).
Chứng tỏ thuốc metrodinazole do Cụng ty Dược phẩm Sanofi-Aventis Việt Nam sản xuất cú hàm lượng hoạt chất metrodinazole
chỉ cỡ (93,28±2,53)% đến (96,92±2,35)% so với ghi trờn nhón mỏc theo quy trỡnh chỳng tụi vừa nghiờn cứu.
III.2.2. Xỏc định hàm lượng hoạt chṍt metrodinazole trong viờn nang 250 mg do Cụng ty cổ phần dược phẩm Hà Tõy sản xuṍt.
-cỏch làm tương tự khi xỏc định hàm lượng hoạt chất metrodinazole trong viờn nang metrodinazole do cụng ty dược phẩm Sanofi-Aventis Việt Nam .kết quả thu được ghi ở hỡnh 3.13, hỡnh 3.14 và bảng 3.14.
0 -100m -200m -300m -400m -500m -50.0n -40.0n -30.0n -20.0n -10.0n 0 I (A )
Hỡnh 3.13. Cực phổ đồ của mẫu thu được từ viờn metrodinazole – Hà Tõy
Nhận xột :từ hỡnh 3.13 thể hiện 3 lần đo lặp của mẫu chuẩnmetrodinazole 0,02mg/ml, ta thấy 3 đường cực phổ tương đối trựng nhau,chứng tỏ độ lặp của
phộp đo tốt. Kết quả tớnh toỏn: xem bảng phụ lục
0 -100m -200m -300m -400m -500m -80.0n -60.0n -40.0n -20.0n 0 I (A )
Hỡnh 3.14. Cực phổ đồ thờm chuẩn của dung dịch metrodinazole –Hà Tõy Mẫu M1 = 16,4mg.
Ghi chỳ : +) Đường 1 : peak của 3ml dd mẫu metrodinazole
+) Đường 2 : peak của 3ml dd mẫu + 1ml dd chuẩn metrodinazole +) Đường 3 : peak của 3ml dd mẫu + 2ml dd chuẩn metrodinazole +) Đường 4 : peak của 3ml dd mẫu + 3ml dd chuẩn metrodinazole +) Đường 5: peak của 3ml dd mẫu + 4ml dd chuẩn metrodinazole
Nhận xột: khi thờm dung dịch chuẩn thỡ Ipic tăng và tương đối tuyến tớnh, chứng tỏ Ipic phụ thuộc tuyến tớnh vào nồng độ của hoạt chất metrodinazole đường thờm chuẩn thu được cú hệ số tương quan R2 ≈ 1. Kết quả tớnh toỏn (xem phụ lục).
1 2 3 4 5 65
Bảng 3.15 Kết quả định lượng hoạt chất metrodinazole trong viờn nang metrodinazole (250 mg) do Cụng ty cổ phần dược phẩm Hà Tõy sản xuất.
Mẫu thử Hàm lượng C6H9N3O3 trong một viờn metrodinazole (mg) Hàm lượng (%) so với trờn nhón Sai số giữa thờm chuẩn và đường chuẩn (%)
éường chuẩn Thờm chuẩn éường chuẩn Thờm chuẩn
M1 218,72 241,41 87,49 96,57 9,08 M2 224,73 239,71 89,89 95,88 5,99 M3 223,97 235,75 85,59 94,30 4,71 Trung bỡnh 222,47±7,60 238,9±7,21 88,82±3,33 95,58±2,89 6,76 éộ lệch chuẩn 3,27 2,9 1,34 1,16 RSD(%) 1,46 1,2 1,51 1,2 (%) 1,89 1,68 0,77 0,67
Sai số tương đối 3,42 3,02 3,75 3,02
Vậy hàm lượng C6H9N3O3 trong viờn nang metrodinazole 250mg do Cụng ty cổ phần Dược phẩm Hà Tõy sản xuất là (222,47±8,32)mg theo đường chuẩn và (238,9±17,21)mg theo phương phỏp thờm chuẩn. Chiếm (88,82±3,33)% theo (đường chuẩn) và (95,58±2,89)% theo (thờm chuẩn) so với nhón mỏc ghi của nhà sản xuất. éộ lệch khỏi giỏ trị trung bỡnh < 3% và sai số tương đối < 5%. éộ lệch chuẩn tương đối (RSD%) của hàm lượng C6H9N3O3 trong 1 viờn metrodinazole, hàm lượng (%) so với trờn nhón < 2% (theo tiờu chuẩn kiểm nghiệm của bộ Y tế). Chứng tỏ thuốc metrodinazole do Cụng ty cổ phần dược phẩm phẩm Hà Tõy sản xuất cú hàm lượng hoạt chất metrodinazole chỉ cú cỡ (88,82±3,33)% đến (95,58±2,89)% so với ghi trờn nhón mỏc theo quy trỡnh chỳng tụi nghiờn cứu được.
III.2.3. Xỏc định hàm lượng hoạt chṍt metrodinazole trong viờn nang 250 mg do Cụng ty Dược phẩm Unique pharmaceutical -Ấn Độ sản xuṍt
-Làm tương tự mục III.2.1 thu được kết quả hỡnh 3.15,hỡnh 3.16 bảng 3.15
0 -100m -200m -300m -400m -500m -50.0n -40.0n -30.0n -20.0n -10.0n 0 I (A )
Hỡnh 3.15. Cực phổ đồ của mẫu thu được từ viờn metrodinazole –
Unique pharmaceutical -Ấn Độ
Nhận xột: Từ hỡnh 3.15 thể hiện 3 lần đo lặp của mẫu chuẩn metrodinazole 0,02mg/ml, ta thấy 3 đường cực phổ tương đối trựng nhau, chứng tỏ độ lặp của phộp đo tốt.
0 -100m -200m -300m -400m -500m -60.0n -40.0n -20.0n 0 I (A )
Hỡnh 3.16. Cực phổ đồ thờm chuẩn của dung dịch metrodinazole
- Unique pharmaceutical -Ấn Độ (M1 = 11,4mg)
Ghi chỳ : +) Đường 1 : peak của 3ml dd mẫu metrodinazole
+) Đường 2 : peak của 3ml dd mẫu + 1ml dd chuẩn metrodinazole +) Đường 3 : peak của 3ml dd mẫu + 2ml dd chuẩn metrodinazole +) Đường 4 : peak của 3ml dd mẫu + 3ml dd chuẩn metrodinazole +) Đường 5: peak của 3ml dd mẫu + 4ml dd chuẩn metrodinazole
Nhận xột :
Ta thấy khi thờm dung dịch chuẩn thỡ Ipic tăng và tương đối tuyến tớnh, chứng tỏ Ipic phụ thuộc tuyến tớnh vào nồng độ của hoạt chất metrodinazole đường thờm chuẩn thu được cú hệ số tương quan R2 ≈ 1.
1 2
3
5 4
Bảng 3.16. kết quả xỏc định hàm lượng C6H9N3O3 trong viờn nang metrodinazole do cụng ty dược phẩm Unique pharmaceutical
-Ấn Độ sản xuất
Mẫu thử Hàm lượng C6H9N3O3 trong 1 viờn metrodinazole (mg) Hàm lượng (%) so với trờn nhón Sai số giữa thờm chuẩn và đường chuẩn (%) éường chuẩn Thờm chuẩn éường
chuẩn Thờm chuẩn M1 236,05 247,15 94,42 98,86 4,49 M2 240,85 247,85 96,34 99,14 2,82 M3 237,75 248,30 95,10 99,32 4,24 Trung bỡnh 238,20±6,04 247,77±1,44 95,29±2,42 99,11±0,58 3,85 éộ lệch chuẩn S 2,43 0,58 0,97 0,23 RSD(%) 1,02 0,23 0,59 0,24 (%) 1,40 0,33 0,56 0,13
Sai số tương đối 2,53 0,58 2,54 0,59
Vậy hàm lượng C6H9N3O3 trong viờn nang metrodinazole 250mg do cụng ty Dược phẩm Unique pharmaceutical-Ấn Độ sản xuất là (238,20±6,04)mg theo đường chuẩn và (247,77±1,44)mg theo phương phỏp thờm chuẩn. Chiếm
(95,29±2,42)% theo (đường chuẩn) và (99,11±0,58)% theo (thờm chuẩn) so
với nhón mỏc ghi của nhà sản xuất. éộ lệch khỏi giỏ trị trung bỡnh < 3 và sai số tương đối < 5%. éộ lệch chuẩn tương đối (RSD%) của hàm lượng C6H9N3O3 trong 1 viờn metrodinazole, hàm lượng (%) so với trờn nhón < 2% (theo tiờu chuẩn kiểm nghiệm của bộ Y tế). Chứng tỏ thuốc metrodinazole do Cụng ty Dược phẩm Unique pharmaceutical-Ấn Độ sản xuất cú hàm lượng hoạt chất metrodinazole chỉ cú cỡ (95,29±2,42)% đến (99,11±0,58)% so với ghi trờn nhón mỏc theo quy trỡnh chỳng tụi nghiờn cứu được.
Khi xỏc định hoạt chất trong viờn nang metrodinazole 250mg do 3 cụng ty Dược sản xuất trờn cho thấy phương phỏp thờm chuẩn tốt hơn phương phỏp đường chuẩn vỡ đó loại được sai số do nền vỡ trong viờn nang ngoài hoạt chất là metrodinazole cũn cú tỏ dược là những chất chống ẩm, chống mốc và cỏc chất độn khụng độc ,ảnh hưởng khụng nhỏ đến phương phỏp đường chuẩn. Nhưng sai số khi xỏc định hoạt chất metrodinazole trong viờn nang bằng hai phưong phỏp nhỏ hơn 10% nờn cú thể chấp nhận được. Vậy khi cần kết quả thật chớnh xỏc nờn dựng phương phỏp thờm chuẩn cũn khi cần độ chớnh xỏc vừa phải nờn dựng phương phỏp đường chuẩn cú thể kiểm nghiệm hàng loạt mẫu nhanh tiết kiệm được thời gian. éối với 3 loại thuốc metrodinazole 250mg do 3 cụng ty trờn sản xuất thỡ Cụng ty Dược phẩm Hà Tõy sản xuất cú hàm lượng hoạt chất metrodinazole kộm nhất chiếm (95,58±2,89)% sau đú đến Cụng ty Sanofi-Aventis Việt Nam chiếm (96,18±2,35)%. Hàm lượng metrodinazole cao nhất là thuốc do Cụng ty Dược phẩm Unique pharmaceutical-Ấn Độ sản xuất. (99,11±0,58)% so với hàm lượng hoạt chất metrodinazole ghi trờn nhón mỏc là 100%.
III.3. Nghiờn cứu xõy dựng quy trỡnh xỏc định hàm lượng hoạt chất
C15H14ClN3O4S.H2O trong thuốc khỏng sinh Cefadroxile
III.3.1 khảo sỏt xỏc định cỏc điều kiện tối ưu của mỏy cực phổ đa năng 757 computer
III.3.1.1. Nghiờn cứu xỏc định thời gian đuổi khớ
Tiến hành khảo sỏt tương tự như dung dịch metrodinazole chỳng tụi thu