2.2.1. Địa điểm nghiờn cứu
- Phõn viện nghiờn cứu nuụi trồng thủy sản Bắc Trung Bộ ( Nghệ An) - Tại gia đỡnh (Xúm 6 – Diễn Hạnh - Diễn Chõu - Nghệ An)
- Phũng thớ nghiệm Thực vật bậc thấp – Khoa sinh - Đại học Vinh
2.2.2. Thời gian nghiờn cứu
- Từ thỏng 4/2010 – 6/2010 nghiờn cứu sự sinh trưởng của tảo Nanochloropsis oculata trờn mụi trường F2.
- Từ 7/ 2010 – 9/2010 trồng tảo ngoài trời và thu sinh khối dịch tảo để bổ sung vào thức ăn nuụi gà Lương Phượng.
2.3. Phương phỏp nghiờn cứu
2.3.1. Phương phỏp trồng và thu sinh khối tảo Nanochloropsis oculata
2.3.1.1. Phương phỏp nuụi trồng tảo ngoài trời
Tảo Nanochloropsis oculata được Phõn viện nuụi trồng thủy sản Bắc Trung Bộ ( Nghệ an) cung cấp. Tảo sau khi lấy về được trồng trong mụi trường F/2.
Bảng 2.1. Thành phần mụi trường F/2 của Guillard (đó được sửa đổi từ tài liệu của Smith và tgk.1993a) [23]. Dung dịch 1 Cỏc thành phần. Số lượng (mg/ l) NaNO3 75 NaH2PO4 5 Na2SiO3.9H20 30 Dung dịch 2. Cỏc thành phần Số lượng (mg/l)
Na2EDTA 4,36 FeCl3.6H2O 3,15 CuSO4.5H2O 0,01 ZNSO4.H2O 0,022 CoCl2.6H2O 0.01 MnCl2.4H2O 0,18 Na2MoO4.6H2O 0.006 Vitamin Cỏc thành phần Số lượng (mg/l) Thiamin (B1) 0,1 Biotin (B6) 0,0005 Riboflavin (B12) 0,0005
* Bố trớ thớ nghiệm nuụi trồng tảo ngoài trời:
Tảo Nanochloropsis oculata được nuụi trồng với mật độ ban đầu là 450.104 tế bào/ml.Tảo Nanochloropsis oculata được nuụi trong điều kiện độ mặn 300
00, sục khớ 24/24 và nuụi trong tỳi nylon 10 lớt .
Để nuụi trồng 1 tỳi nilon 10 lớt (hay 104 ml) tảo Nanochloropsis oculata với mật độ ban đầu là 450.104 tế bào/ml thỡ lượng tảo giống ( mật độ 2900.104 tb/ml) cần cung cấp là: (450.104.104): (2900.104 ) = 1551,7 ml
* Thao tỏc tiến hành: Tỳi nylon → cấp 1551,7ml tảo giống (mật độ 2900.104
tb/ml) → cấp nước biển được lọc sạch (độ mặn 300
00) vào cho đến 10 lớt (được 10 lớt dịch tảo cú mật độ 450.104 tế bào/ml) → cấp mụi trường F/2 (10 ml dung dịch 1 + 10 ml dung dịch 2 + 10 ml vitamin)→ sục khớ → thu hoạch.
* Phương phỏp đếm số lượng tế bào
- Lấy mẫu tảo: mẫu được lấy vào lỳc 2 giờ chiều. Dựng ống hỳt tảo và hỳt vào ly đựng mẫu, lấy khoảng 25 ml. Mẫu tảo được thu vào cốc thủy tinh, pha loóng 6 lần bằng nước cất, lắc đều mẫu tảo sau đú dựng ống hỳt hỳt nhỏ một giọt dung dịch tảo vào buồng đếm, để vài phỳt cho tảo ổn định, sau đú dựng lamen đậy nhẹ nhàng, để lắng một lỳc rồi đưa vào kớnh hiển vi để đếm.
- Phũng đếm Goriarev cú 25 ụ lớn, mỗi ụ cú 16 ụ nhỏ. Một ụ nhỏ cú diện tớch là 1 /400 mm2, độ sõu buồng đếm là 0,1 mm. Thể tớch mỗi ụ nhỏ: V = 1/(4.106) cm3 . Thể tớch toàn buồng đếm là V = 1/104 cm3 .
- Cỏch đếm: thứ tự cỏc ụ được đếm theo đường ziczỏc, tiến hành đếm những tế bào nằm trong khi cú cỏc tế bào nằm trờn một cạnh của ụ thỡ đếm những tế bào nằm ở cạnh trờn và những tế bào nằm ở cạnh bờn phải.
- Mật độ được tớnh theo cụng thức: MĐ = m.104 tế bào/ ml Trong đú: MĐ: là mật độ tế bào
m : tổng số tế bào đếm được trong 25 ụ vuụng lớn. Mỗi mẫu đếm 3 lần, kết quả là giỏ trị trung bỡnh của 3 lần đếm
2.3.1.3.Phương phỏp xỏc định cỏc yếu tố mụi trường
Đo pH : dựng test pH độ chinh xỏc 0,5 đo hàng ngày vào lỳc 8 giờ và 14 giờ
Đo nhiệt độ : dựng nhiệt kế thuỷ ngõn độ chớnh xỏc 10C đo hàng ngày vào lỳc 8 giờ và 14 giờ.
Độ mặn : dựng tỷ trọng kế độ chớnh xỏc 10
00 đo khi chuẩn bị nước và hàng ngày vào lỳc 8 giờ và 14 giờ.
2.3.1.4. Phương phỏp thu hoạch và bảo quản tảo (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Bước 1: Thu hoạch tảo bằng phương phỏp để lắng trong tủ lạnh. Bước 2: Dung dịch tảo đậm đặc được bảo quản trong tủ lạnh.
2.3.2. Phương phỏp chế biến thức ăn cho gà.
Lấy 2 lớt dịch tảo (mật độ 2900.104 tế bào/ml, độ mặn 30 0
00) bảo quản trong tủ lạnh, sau 1 ngày tảo lắng thu được 25 ml dịch tảo đậm đặc (mật độ 232. 107 tế
bào/ml, độ mặn 30 0
00), dịch tảo đậm đặc này được bổ sung vào khẩu phần thức ăn cho gà. Lượng dịch tảo (mật độ 232. 107 tế bào/ml, độ mặn 30 0
00), bổ sung vào thức ăn cho gà dựa trờn hàm lượng muối cú trong dịch tảo. Lượng muối bổ sung vào thức ăn tương ứng với cỏc lụ thớ nghiệm Lụ 2 : Lụ 3 : Lụ 4 = 0.1% : 0.15% : 0.2%
Ở lụ 2, lượng muối bổ sung vào 100g thức ăn (tấm gạo) cho gà là 0,1g. Do đú, lượng dịch tảo (mật độ 232. 107 tế bào/ml, độ mặn 30 0
00) bổ sung vào 100 g tấm gạo là (0,1 x 1000):30 = 3,33 ml.
Ở lụ 3, lượng dịch tảo (mật độ 232. 107 tế bào/ml, độ mặn 30 0
00) bổ sung vào 100 g thức ăn (tấm gạo) là 3,33 x 1,5 = 5 ml.
Ở lụ 4, lượng dịch tảo (mật độ 232. 107 tế bào/ml, độ mặn 30 0
00) bổ sung vào 100 g thức ăn (tấm gạo) là 3,33 x 2 = 6,66 ml.
2.3.3. Phương phỏp bố trớ thớ nghiệm nuụi gà.
Bố trớ thớ nghiệm nuụi gà trong 4 ngăn lưới sắt mắt cỏo tương ứng với 4 lụ thớ nghiệm ( lụ 1; lụ 2; lụ 3; lụ 4). Kớch thước mỗi ngăn 1m x 1m x 1m. Mỗi ngăn nuụi đều cú mỏng ăn, mỏng uống nước, búng điện sưởi ấm.
Cụng thức thớ nghiệm: Thức ăn tương ứng với 4 lụ thớ nghiệm như sau:
Lụ TN Khẩu phần ăn
Lụ 1 (đối chứng) Gạo tấm (khụng bổ sung dịch tảo) Lụ 2 Dịch tảo (3.33 ml dịch tảo/ 100g tấm gạo)Nanochloropsis oculata + tấm gạo Lụ 3 Dịch tảo (5 ml dịch tảo/ 100g tấm gạo)Nanochloropsis oculata + tấm gạo Lụ 4 Dịch tảo (6.66 ml dịch tảo/ 100g tấm gạo)Nanochloropsis oculata + tấm gạo
2.3.4. Tiến hành nuụi và theo dừi
Chọn gà thớ nghiệm: gà Lương Phượng được chọn nuụi đảm bảo cỏc yờu cầu sau:
Nhanh nhẹn, mắt sáng, lụng mượt, bụng gọn, rốn kớn, chõn búng cứng cỏp mập, trọng lượng gà đạt 37.5 g/con. Tránh chọn con khụ chõn, vẹo mỏ, hở rụ́n, bụng xợ̀...
Thả giống: 10 cỏ thể/ lụ.
Hàng ngày theo dừi và cho gà ăn 5 lần/ngày (vào lỳc 7h, 10h, 13h, 5h, 8h, 11h). Theo dừi mức ăn của gà để đảm bảo gà ăn no.
Lụ 1 Lụ 2 Lụ 3 Lụ 4
Hỡnh 2.1. Sơ đồ chuồng nuụi gà.
2.3.5. Phương phỏp cõn trọng lượng gà
Sử dụng cõn bàn, ( max 2kg, sai số 1g) để xỏc định trọng lượng gà.
Cõn từng cỏ thể một, trước khi cõn, ngừng cho ăn 6 giờ (cõn vào buổi sỏng )
2.3.6. Phương phỏp xỏc định sinh trưởng tuyệt đối ( mức tăng trọng 1 ngày- 24 giờ) giờ)
A = (P2 – P1)/ t (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Trong đú: A là sinh trưởng tuyệt đối P2 là trọng lượng cơ thể cõn lần sau P1 là trọng lượng cơ thể cõn lần trước
t là khoảng thời gian giữa hai lần cõn ( ngày) [10].
* Xử lý số liệu theo trung bỡnh cộng
Chương 3
KẾT QUẢ NGHIấN CỨU
3.1. Sinh trưởng và phỏt triển của tảo Nanochloropsis oculata trong mụi trường
Bằng phương phỏp đếm Sinh trưởng của tảo Nanochloropsis oculata trong mụi trường F/2 ở ngoài trời được thể hiện như sau:
Bảng 3.1. Biến động mật độ của tảo Nanochloropsis oculata
Ngày nuụi Mật độ ( 104 tb/ml) 0 450 1 1480 2 2090 3 2900 4 2490 5 1400 6 450 7 100
Thớ nghiệm nhằm xỏc định sinh trưởng của quần thể tảo Nanochloropsis oculata trong tỳi nylon 10 lớt, được nuụi với mật độ ban đầu là 450.104 (tb/ml).
Kết quả được thể hiện qua hỡnh 3.1
Sau 7 ngày nuụi mật độ đạt cực đại vào ngày nuụi thứ 3, đạt 2900 .104 (tb/ml) và sau đú giảm dần qua cỏc ngày tiếp theo. Mức độ tăng mật độ của tảo là rất nhanh, chỉ sau 1 ngày mật độ tăng lờn 1480.104 (tb/ml), tăng gấp 3,29 lần so với mật độ ban đầu và chỉ sau 2 ngày mật độ đạt 2090 .104 (tb/ml), tăng gấp 4,64 lần so với mật độ ban đầu. Điều này chứng tỏ tảo Nanochloropsis oculata được nuụi với điều kiện mụi trường thuận lợi và mụi trường dinh dưỡng tốt.
Tuy nhiờn mật độ tảo cũn phụ thuộc vào nhiệt độ, ỏnh sỏng của từng vựng miền. Ở thớ nghiệm của chỳng tụi chỉ sau 3 ngày mật độ đó lờn đến cực đại là do tảo được nuụi trong điều kiện nhiệt độ cao, mụi trường dinh dưỡng tốt. Mặt khỏc cũn phụ thuộc vào mật độ ban đầu. Trong thớ nghiệm của chỳng tụi, nuụi cấy với
mật độ tương đối cao 450 . 104 tế bào/ml, điều này cú thể giải thớch tại sao mật độ tế bào tảo tăng lờn rất nhanh.
Hỡnh 3.1 Biến động mật độ của tảo Nanochloropsis oculata
Thời gian đạt mật độ càng nhanh thỡ sự tàn lụi của tảo càng diễn ra nhanh chúng. Qua hỡnh 3.1 sang ngày thứ 4 mật độ tảo bắt đầu giảm xuống 2490 .104 tb/ml), giảm 0,86 lần, và giảm xuống nhanh vào ngày nuụi thứ 5 (1400 .104 tb/ml) và chỉ giảm xuống chỉ cũn 100 .104 (tb/ml) vào ngày nuụi thứ 7 trước khi tảo tàn. Điều này cú ý nghĩa khi ta tiến hành cỏc biện phỏp kỹ thuật cấy pha loóng tảo và lấy tảo cho gà ăn. Giỏ trị dinh dưỡng của tảo sẽ cao hơn khi chỳng ta tiến hành thu tảo ở giai đoạn tăng mật độ tế bào và cũng trong giai đoạn này chỳng ta nờn tiến hành pha loóng tảo sang mụi trường mới bổ sung dinh dưỡng khi hàm lượng dinh dưỡng trong mụi trường đó sắp hết.
Từ kết quả nghiờn cứu trờn, chỳng tụi thu hoạch tảo vào 14h ngày thứ 3 sau khi cấy. Dịch tảo thu được một phần sử dụng bổ sung vào thức ăn cho gà, một phần làm giống để nuụi mẻ tiếp theo . Thao tỏc tiến hành như sau:
Buộc tỳi → cấp 1551,7 ml tảo giống với mật độ 2900.104 tế bào/ ml → cấp nước biển và mụi trường F/2 (10 ml dung dịch 1 + 10 ml dung dịch 2 + 10 ml vitamin) cho đủ 10 lớt → sục khớ → thu hoạch.
3.2 Sự biến động nhiệt độ của thớ nghiệm nuụi tảo Nanochloropsis oculata trong
mụi trường F/2
Bảng 3.2. Biến động nhiệt độ trong thớ nghiệm nuụi tảo Nanochloropsis oculata
Ngày nuụi Nhiệt độ ( 0C) ( sỏng) Nhiệt độ (0C) ( chiều)
1 27.7 30.6 2 28 31 3 28.1 31.3 4 27.6 30.6 5 27.5 30.5 6 28.3 31.2 7 28.5 31.7
Sự phỏt triển của mật độ tảo phụ thuộc vào biến thiờn nhiệt độ, nhiệt độ cao tảo phỏt triển tốt và ngựơc laị nhiệt độ thấp thỡ mật độ tảo phỏt triến chậm lại. Yếu tố nhiệt độ khú kiếm soỏt vỡ phụ thuộc vào điều kiện thời tiết, khớ hậu của từng địa phương. Trong thời gian thớ nghiệm nhiệt độ tương đối cao và ổn định cho nờn tảo phỏt triển rất mạnh. Nhiệt độ cao nhất vào buổi sỏng là 28.5oC, vào buổi chiều là 31.70C
Hỡnh 3.2. Biến động nhiệt độ trong thớ nghiệm nuụi tảo Nanochloropsis oculata
3.3. Biến động pH của thớ nghiờm nuụi tảo Nanochloropsis oculata trong mụi
trường F/2
Bảng 3.3. Biến động pH trong thớ nghiệm nuụi tảo Nanochloropsis oculata
Ngày nuụi Sỏng Chiều
1 8.1 8.8 2 8.2 8.7 3 8.4 9.1 4 7.7 8.8 5 7.8 8.9 6 7.7 8.9 7 8.0 9.0 (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Hỡnh 3.3. Biến động pH trong thớ nghiờm nuụi tảo Nanochloropsis oculata
Giỏ trị pH trong thớ nghiệm cú sự biến động lớn giữa buổi sỏng và buổi chiều. pH cú mối quan hệ chặt chẽ với nhiệt độ và mật độ tế bào. Thớ nghiệm của chỳng tụi, pH vào buổi chiều rất cao, cao nhất là 9,1 vào ngày nuụi thứ 3, lỳc này mật độ tảo cao nhất. Với điều kiện nuụi nhiệt độ cao kết hợp với mật độ tế bào tảo cao cú thể giải thớch được tại sao giỏ trị pH cao như vậy.
3.4. Thảo luận chung về sinh trưởng và phỏt triển của loài tảo Nanochloropsis
oculata
Dựa vào kết quả trờn cho thấy, thớ nghiệm của chỳng tụi nuụi tảo
Nanochloropsis oculata đạt mật độ cực đại ở mức tương đối cao và thời gian cực đại tương đối ngắn so với những kết quả thớ nghiệm của cỏc tỏc giả khỏc. Tuy nhiờn, mật độ tế bào tảo cũn phụ thuộc vào mật độ nuụi cấy ban đầu. Sự thay đổi mật độ cấy ban đầu ảnh hưởng đến số lượng tế bào tham gia phõn cắt nờn số lượng tế bào hỡnh thành trong từng thời điểm là khỏc nhau, nếu số lượng tham gia phõn cắt nhiều thỡ mật độ tế bào tảo tăng nhanh. Điều này cú thể giải thớch cho việc tăng mật độ nhanh chúng. Nhưng trong điều kiện sản xuất việc cần tảo liờn tục thỡ thời
gian đạt mật độ cực đại nhanh rất cú ý nghĩa để cung cấp tảo cho nhu cầu làm thức ăn cho cỏc đối tượng nuụi. Tuy nhiờn, sự tăng trưởng của tảo cũn phụ thuộc vào từng loài, nhiệt độ, độ mặn, ỏnh sỏng….Thớ nghiệm của chỳng tụi được thực hiện trong điều kiện nhiệt độ tương đối cao, cao nhất vào buổi sỏng là 28.50C , vào buổi chiều là 31.7 0C.
Tảo Nanochloropsis oculata phỏt triển tốt trong mấy ngày nuụi đầu tiờn, đến ngày nuụi thứ 4 mật độ bắt đầu giảm xuống là do điều kiện nhiệt độ tương đối cao do thời tiết nắng núng kộo dài, sự hạn chế ỏnh sỏng do hiện tượng tự che khuất khi mật độ tế bào cao sự suy giảm dinh dưỡng trong mụi trường nước.
Trong thực tế việc chỉ sử dụng sục khớ thụng thường thỡ khụng thể khụng chế được sự biến động của pH. Bởi CO2 là nhõn tố quan trọng chi phối sự tăng giảm pH, mà lượng CO2 trong khụng khớ chỉ chiếm 0,03%. Vỡ vậy, trong quỏ trỡnh quang hợp tảo sử dụng CO2 rất mạnh mẽ là nguyờn nhõn gõy ra pH tăng cao. Vỡ vậy phải cú biện phỏp điều chỉnh pH ổn định cho sự phỏt triển của tảo.
3.5. Ảnh hưởng của dịch tảo Nanochloropsis oculata lờn quỏ trỡnh sinh trưởng
của gà Lương Phượng
3.5.1. Ảnh hưởng của dịch tảo Nanochloropsis oculata lờn quỏ trỡnh sinh trưởng của gà Lương Phượng sau 2 tuần tuổi
Bảng 3.4. Trọng lượng gà của cỏc lụ thớ nghiệm sau 2 tuần tuổi. Lụ thớ
nghiệm
Lượng thức ăn ( từ 0- 2 tuần tuổi /1con)
Trọng lượng trung bỡnh (g) % so với lụ 1 Lụ 1 (đối chứng) 112g tấm gạo 92.5 100 Lụ 2 3.73 ml dịch tảo+ 112g tấm gạo 97.2 105.08 Lụ 3 + 112g tấm gạo5.6 ml dịch tảo 103 111.35 Lụ 4 + 112 g tấm gạo7.46 ml 114.0 123.24
Hỡnh 3.4. Biểu đồ so sỏnh trọng lượng gà của cỏc lụ thớ nghiệm sau 2 tuần tuổi Qua bảng 3.4 và biểu đồ hỡnh 3.4 cho thấy: sau 2 tuần tuổi thả gà giống, khối lượng trung bỡnh của gà ở cỏc lụ đều tăng bỡnh thường và ở cỏc lụ cú sự chờnh lệch nhau. Trọng lượng trung bỡnh của gà ở lụ 1 thấp nhất (92,5 g/ con), từ lụ 2- lụ 4 trọng lượng trung bỡnh của gà tăng tỉ lệ thuận với sự tăng hàm lượng dịch tảo được bổ sụng và cao nhất là lụ 4 (149 g/ con) đạt 123,24% (tăng 23,24 %) so với lụ đối chứng 1 (ăn tấm gạo)
3.5.2. Ảnh hưởng của dịch tảo Nanochloropsis oculata lờn quỏ trỡnh sinh trưởng của gà Lương Phượng sau 4 tuần tuổi
Qua bảng 3.5 và biểu đồ hỡnh 3.5 cho thấy: sau 4 tuần tuổi thả gà giống trọng lượng trung bỡnh của gà ở cỏc lụ đều tăng và ở cỏc lụ cú sự chờnh lệch nhau. Trọng lượng trung bỡnh của gà ở lụ đối chứng 1 thấp nhất (182 g/ con), từ lụ 2- lụ 4 trọng lượng trung bỡnh gà tăng tỉ lệ thuận với sự tăng hàm lượng dịch tảo và cao nhất là lụ 4 (230 g/ con) đạt 126,38% (tăng 26,38 %) so với trọng lượng gà lụ đối chứng 1.
Bảng 3.5. Trọng lượng gà của cỏc lụ thớ nghiệm sau 4 tuần tuổi. Lụ thớ nghiệm Lượng thức ăn ( từ 2-
4 tuần tuổi /1con)
Trọng lượng trung bỡnh (g) % so với lụ 1 Lụ 1( đối chứng) 230 tấm gạo 182 100 Lụ 2 7.59 ml dịch tảo +230g tấm gạo 198 108.79 Lụ 3 11.5 ml dịch tảo +230g tấm gạo 216 118.68 Lụ 4 15.3 ml dịch tảo +230g tấm gạo 230 126.38
Hỡnh 3.5. Biểu đồ so sỏnh trọng lượng gà của cỏc lụ thớ nghiệm sau 4 tuần tuổi Qua hỡnh 3.4; hỡnh 3.5 một điều dễ nhận thấy ở giai đoạn 1- 4 tuần tuổi trọng lượng trung bỡnh của gà ở cỏc lụ 1; 2; 3; 4 chờnh lệch nhau khụng đỏng kể. Điều
này chứng tỏ ở giai đoạn đầu (1- 4 tuần tuổi), dịch tảo chưa cú ảnh hưởng đỏng kể đến tăng trọng của gà .
3.5.3. Ảnh hưởng của dịch tảo Nanochloropsis oculata lờn quỏ trỡnh sinh