Theo Ross và Whittlestone (1983) [69] và Ross (1999) [71], các phương pháp huyết thanh học hữu ắch trong chẩn ựoán bệnh viêm phổi ựịa phương là:
- Phản ứng kết hợp bổ thể (Complement fixation Ờ CF)
- Phản ứng ngưng kết hồng cầu gián tiếp (Indirect hemagglutination Ờ IHA) - Phản ứng hấp thụ miễn dịch gắn enzym (enzyme-liked immunosorbent assays ỜELISA)
Phản ứng huyết thanh học xác ựịnh kháng thể chống MH không ựược khuyến cáo dùng trong phát hiện mầm bệnh nhưng hữu dụng trong ựiều tra tỷ lệ nhiễm, ựánh giá tình trạng phòng bệnh bằng vắc xin và tình trạng nhiễm bệnh của ựàn. Tuy nhiên, phương pháp này sẽ khó giải thắch các trường hợp phản ứng chéo, ựáp ứng kháng thể của vật chủ thấp và không phân biệt giữa kháng thể ựáp ứng với vắc xin hay do nhiễm trùng tự nhiên. Phản ứng CF ựược dùng ựể xác ựịnh kháng thể ựáp ứng trong giai ựoạn sớm, có thể phát hiện kháng thể ựối với cả ba loài Mycoplasma ở lợn và các lớp khác nhau của kháng thể. IHA là phản ứng chắnh dùng ựể xác ựịnh kháng thể ựáp ứng với MH ở giai ựoạn sau. Phản ứng ELISA có thể xác ựịnh kháng thể cả ở giai ựoạn sớm và muộn, tuỳ thuộc vào ựộ ựặc hiệu của cộng hợp kháng Ờ kháng thể. CF phát hiện ựược IgM và ELISA phát hiện ựược cả IgM và IgG.
Tuy nhiên, Freeman và ctv. (1984) [37], cho rằng phản ứng IHA thắch hợp cho việc xác ựịnh kháng thể chống MH thường gắn với lông rung của tế bào biểu mô ựường hô hấp, chưa xâm lấn vào nên kháng thể trong huyết thanh chống MH có thể biến thiên, do ựó dẫn tới âm tắnh giả. ELISA Tween 20 ựã ựược dùng phát hiện kháng thể chống MH trong sữa ựầu và sữa của lợn nái [92].
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 25
Mycoplasma khác trên lợn khi xét nghiệm bằng ELISA, Bolske và ctv. (1988) [28], ựã cho kháng nguyên chuẩn ựi qua cột sắc ký Sephadex G25 sau khi xử lý với Tween 20. Như vậy sẽ loại bỏ ựược phản ứng chéo giữa kháng thể của MH và M. hyorhinis nhưng vẫn còn phản ứng chéo với M. flocculare.
Theo Cassell và Brown (1983) [31], phản ứng ELISA xác ựịnh kháng thể chống Mycoplasma có ưu ựiểm vượt trội hơn các kỹ thuật xác ựịnh kháng thể khác về tắnh ựặc hiệu và ựộ nhạy. Hơn nữa, việc thực hiện phản ứng này không yêu cầu về trang thiết bị, giấy phép và cách tiến hành, ựặc biệt như xét nghiệm dùng chất phóng xạ, cũng không phải ựiều chỉnh số lượng
Mycoplasma trong các xét nghiệm dựa vào nuôi cấy. Mẫu sử dụng trong phản ứng chỉ cần một lượng rất nhỏ (10 - 100ộl) và không cần giết thú ựể lấy mẫu xét nghiệm. Mặt khác, phản ứng này ựược thực hiện ựơn giản, kinh tế, rất phù hợp với ựiều tra ựại trà, ựược xem là một kỹ thuật quan trọng dùng trong việc kiểm soát các bệnh do Mycoplasma ở ựộng vật.
Sử dụng phản ứng ELISA ngăn trở và ELISA Tween 20 [71], có thể tăng ựộ ựặc hiệu và tăng ựộ nhạy của phản ứng, hoặc dùng kháng thể ựơn dòng như bộ kit ELISA do công ty Hipra (Tây Ban Nha) sản xuất (bộ kit CIVTEST TM SUIS MH và DAKO ELISA). Phản ứng này có tắnh ựặc hiệu cao nhờ sử dụng kháng thể ựơn dòng kháng protein 74 KDa (epitop P74) của MH. M. flocculare
không có epitop này nên không xảy ra phản ứng chéo giữa hai loài.