L ỜI CẢM ƠN
3. ðỐ IT ƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIấN CỨU
3.3.1. Sơ ủồ nghiờn cứ u
ðỏnh giỏ khả năng sản xuất tinh ủụng lạnh của bũ Brahman tại Trạm nghiờn cứu và sản xuất tinh ủụng lạnh ủược thực hiện theo sơủồ sau:
Sơủồ 3.1. Sơủồ nghiờn cứu của ủề tài
3.3.2. Phương phỏp ủỏnh giỏ chỉ tiờu số lượng, chất lượng tinh dịch
- ðối tượng nghiờn cứu ủược chia làm 2 nhúm bũ (theo nguồn gốc giống): + Nhúm 1: 04 bũ ủực giống Brahman Cuba
+ Nhúm 2: 06 bũ ủực giống Brahman Australia - Phương phỏp ỏp dụng cho từng chỉ tiờu:
+ Thể tớch tinh dịch: Bằng quan sỏt trờn ống ủong cú chia vạch ml và ghi chộp vào sổ sỏch.
+ Màu sắc tinh dịch: Dựng mắt quan sỏt mầu sắc tinh dịch ngay sau khi lấy tinh và ghi chộp vào sổ sỏch.
Kết luận và ủề nghị Pha chế, sản xuất tinh ủụng lạnh cọng rạ Phõn tớch kết quả Khai thỏc tinh Bũ ủực giống Brahman Australia Bũ ủực giống Brahman CuBa Bũ ủực giống lấy tinh
ðỏnh giỏ, kiểm tra số lượng, chất lượng tinh dịch
+ Nồng ủộ tinh trựng: Bằng mỏy so màu Photomaster SDM4 của hóng MINITUB bằng cỏch dựng pipột hỳt 0,2 ml tinh dịch pha loóng trong 4 ml nước muối sinh lý 0,9%, hơi lắc nhẹ cho ủều và ủưa vào mỏy Photomaster SDM4. Chỉ số hiện trờn mỏy là nồng ủộ tinh trựng (tỷ/ml)
+ Hoạt lực tinh trựng: ðỏnh giỏ bằng kớnh hiển vi cú kết nối với màn hỡnh theo phương phỏp của Nhật Bản: lấy 0,1 ml tinh tươi + 0,9 ml mụi trường A rồi nhỏ lờn lam kớnh, ủậy la men lờn sau ủú ủưa lờn kớnh hiển vi cú gắn Camera phúng ủại 100 lần và ủỏnh giỏ hoạt lực theo thang ủiểm 10 của Milovanov, cụ thể như sau:
Bảng 3.1: Thang ủiểm ủỏnh giỏ hoạt lực tinh trựng
A(ủiểm) 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1,0 A(%) 5-15 15-25 25-35 35-45 45-55 55-65 65-75 75-85 85-95 95-100
+ pH tinh dịch: Đo pH tinh dịch bằng giấy đo pH của h!ng Merck-ðức + Tỷ lệ tinh trựng sống: Theo phương phỏp của Milovanov là nhỏ 1 giọt tinh dịch lờn lam kớnh lừm + 2 giọt Eosin 5%, ủảo nhẹ rồi sau ủú nhỏ 4 giọt Nogrosin 10%. ðảo nhẹ nhàng, ủể ấm 37oC trong 30 giõy. Lấy 1 giọt phết kớnh dàn mỏng ủều ủưa lờn kớnh hiển vi với ủộ phúng ủại 400 lần ủếm tổng số 500 tinh trựng rồi tớnh tỷ lệ %, bằng phộp số học thụng thường. Tinh trựng chết là những tinh trựng bắt màu ủỏ Eosin.
+ Tỷ lệ tinh trựng kỳ hỡnh (K): Bằng phương phỏp nhuộm xanh methylen 5% khoảng 5-7 phỳt hoặc ủỏ Fucsin 5% khoảng 5-7 phỳt và ủếm tinh trựng kỳ
hỡnh và tinh trựng bỡnh thường trờn kớnh hiển vi 500 tinh trựng rồi tớnh toỏn bằng phộp tớnh số học thụng thường.
Số lượng tinh trựng kỳ hỡnh
K (%) =
Tổng số tinh trựng bỡnh thường x 100 + Tổng số tinh trựng tiến thẳng trong tinh dịch (VAC): Bằng cỏch nhõn tớch số của V, A và C.
3.3.3. Phương phỏp ủỏnh giỏ khả năng sản xuất tinh ủụng lạnh
Tỷ lệ cỏc lần lấy tinh ủạt tiờu chuẩn (%): Ghi chộp tất cả cỏc lần lấy tinh và tớnh toỏn bằng phương phỏp số học thụng thường:
Số lần lấy tinh ủạt tiờu chuẩn Tỷ lệ cỏc lần lấy tinh
ủạt tiờu chuẩn (%) = Tổng số lần khai thỏc X 100
Số lượng tinh cọng rạ sản xuất ủược trong một lần khai thỏc tinh ủạt tiờu chuẩn (liều/lần khai thỏc): Ghi chộp số lượng lần khai thỏc ủạt tiờu chuẩn và số liều tinh sản xuất tương ứng.
Hoạt lực tinh trựng sau giải ủụng (%): Lấy ngẫu nhiờn 1-2 cọng rạ giải
ủụng ở nước ấm nhiệt ủộ 370C, thời gian 30 giõy theo từng ngày sản xuất của từng bũ ủực ủể ủỏnh giỏ hoạt lực tinh trựng sau ủụng lạnh của lụ sản xuất ủú bằng kớnh hiển vi cú kết nối với màn hỡnh.
+ Nếu hoạt lực sau giải ủụng ủạt A ≥ 40% thỡ lụ ngày sản xuất của ủực giống ủú ủạt tiờu chuẩn.
+ Nếu hoạt lực sau giải ủụng ủạt A < 40% thỡ lụ ngày sản xuất của ủực giống ủú khụng ủạt tiờu chuẩn và bị loại bỏ.
Tổng số liều tinh cọng rạ sản xuất ủạt tiờu chuẩn/con/năm: Ghi chộp tổng số liều tinh sản xuất ủạt tiờu chuẩn của từng bũ ủực giống/năm.
Nghiờn cứu khả năng sản xuất tinh bũ ủụng lạnh theo mựa vụ: Theo dừi thời tiết khớ hậu của từng thỏng trong năm và dựa vào ủặc ủiểm chia làm 2 mựa vụ là:
- Vụủụng xuõn gồm thỏng: 10, 11, 12, 1, 2 và 3.
- Vụ hố thu gồm thỏng: 4, 5, 6, 7, 8 và 9.
3.3.4. Sản xuất tinh bũ ủụng lạnh dạng cọng rạ
3.3.4.1. Tiờu chuẩn sản xuất tinh bũ ủụng lạnh ủược ỏp dụng theo tiờu chuẩn Nụng nghiệp Việt Nam 10TCN 531-2002 (Bộ Nụng nghiệp và PTNT,2003)[5], cụ thể:
+ Thể tớch tinh dịch ≥ 3ml. + Hoạt lực tinh trựng khai thỏc ≥ 70 %.
+ Nồng ủộ tinh trựng ≥ 0,8 tỷ/ml. + Thể tớch cọng rạ 0,25ml. + Tổng số tinh trựng sống/cọng rạ là 25.000.000 tinh trựng. + Tỷ lệ tinh trựng kỳ hỡnh < 20%. + Hoạt lực tinh trựng sau giải ủụng ≥ 40 %. 3.3.4.2. Quy trỡnh sản xuất tinh bũ ủụng lạnh dạng cọng rạ - Chuẩn bị õm ủạo giả: cỏc bộ phận của õm ủạo giả, ủó ủược khử trựng rồi lắp rỏp và bảo quản trong tủấm 42 0C trước khi lấy tinh.
- Chuẩn bị bũ ủực lấy tinh: những bũ ủực giống ủến ngày lấy tinh vào buổi sỏng sớm ủược tắm sạch sẽ và thụt rửa bao dương vật trước khi lấy tinh 30 phỳt bằng nước muối sinh lý 0,9%.
- Chuẩn bị bũ giỏ và giỏ nhảy nhõn tạo: chọn bũ giỏ thớch hợp, vệ
sinh sạch sẽ và cho vào giỏ. Vệ sinh giỏ nhảy nhõn tạo.
- Lấy tinh bằng õm ủạo giả: kớch thớch tớnh dục cho bũ ủực thật hăng, rồi cho nhảy giỏ và lấy tinh bằng õm ủạo giả (Mỗi bũ ủực chỉ lấy tinh một lượt).
- ðỏnh giỏ chất lượng tinh dịch gồm cỏc chỉ tiờu ( V, A, C, mầu sắc tinh dịch, pH, kỳ hỡnh, tỷ lệ tinh trựng sống)
- Chuẩn bị mụi trường pha loóng tinh dịch: mụi trường pha loóng tinh dịch ủó ủược pha chế sẵn theo cụng thức mụi trường của Nhật Bản (mụi trường A và B) và ủược bảo quản trong tủ bảo quản cú nhiệt ủộ 50C. Trước khi sử
dụng, mụi trường ủược lấy ra và ủặt trong Autobath cú nhiệt ủộ 350C ủể cõn bằng nhiệt ủộ với nhiệt ủộ tinh dịch.
- Pha loóng tinh dịch: nếu tinh dịch ủạt tiờu chuẩn 10TCN 531-2002 (Bộ
Nụng nghiệp và PTNT, 2003)[5] thỡ pha mụi trường A (khụng cú glycerol) vào tinh dịch với lượng bằng 50% tổng lượng mụi trường cần dựng.
- Bảo quản ở nhiệt ủộ 50C trong khoảng 1-2 giờ.
- Pha loóng với mụi trường B cú glyceryl bằng phương phỏp nhỏ giọt trong 3 giờ.
- In nhón mỏc lờn vỏ cọng rạ bằng mỏy in chuyờn dựng với cỏc chỉ số:
VN – BR 894 NSX : 20/5/2009 VINALICA
+ VN: là mó nước Việt Nam.
+ BR-894: là bũ ủực giống Brahman số hiệu 894. + NSX: là ngày sản xuất tinh.
+ VINALICA: là thương hiệu Trung tõm giống gia sỳc lớn Trung ương. - Nạp tinh và hàn ủầu cọng rạ bằng mỏy tựủộng.
- Cõn bằng ở 50 C: Cỏc cọng rạ ủựợc rải ủều một lớp trờn giỏ chuyờn dụng và ủặt trong buồng cú nhiệt ủộ 50 C trong 3 giờ.
- ðụng lạnh bằng mỏy ủụng lạnh chuyờn dụng, tựủộng ủiều khiển hạ nhiệt ủộ. - Kiểm tra hoạt lực tinh trựng sau ủụng lạnh: Sau khi ủụng lạnh 48 giờ, tinh cọng rạ ủược lấy mẫu ủiểm theo từng con ủực giống, giải ủụng và kiểm tra hoạt lực tinh trựng nếu hoạt lực A ≥ 40% thỡ ủạt tiờu chuẩn.
- Bảo quản: tinh cọng rạủạt tiờu chuẩn thỡ ủược ủúng vào ống 25 cọng rạ/ống và sắp vào cúng ủựng tinh theo từng ủực giống, từng ngày sản xuất (cú ghi sơ ủồ quản lý từng ngày sản xuất và của từng ủực giống) và bảo quản trong bỡnh chuyờn dụng chứa ủầy nitơ lỏng (-1960C).
3.3.5. Phương phỏp xử lý số liệu
- Cỏc số liệu thu thập ủược xử lý thống kờ theo nhõn tố nguồn gốc giống (nhúm bũ) và mựa vụ bằng phần mềm SAS 8.0 (2000).
- Cỏc tham số thống kờ ủược tớnh toỏn gồm: dung lượng mẫu (n), số trung bỡnh (Mean), sai số tiờu chuẩn (SE).
- So sỏnh sự sai khỏc cỏc giỏ trị trung bỡnh giữa hai nhúm bũ và mựa theo phương phỏp Duncan.
4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.1. Số lượng, chất lượng tinh dịch bũ ủực giống Brahman
4.1.1 Thể tớch tinh dịch
Thể tớch tinh dịch là lượng tinh dịch thu ủược trong một lần khai thỏc tinh (ml/lần) của mỗi bũ ủực giống. Chỉ số này cú ý nghĩa quan trọng khi kết hợp với nồng ủộ tinh trựng (C) và hoạt lực tinh trựng (A), giỳp ủỏnh giỏ khả năng sản xuất tinh của bũ ủực giống, cũng như tớnh ủược tổng số tinh trựng tiến thẳng/lần khai thỏc tinh, từủú cho phộp xỏc ủịnh ủược số liều tinh cọng rạ sản xuất ủược và lượng mụi trường pha loóng cần thiết của lần lấy tinh ủú.
Thể tớch tinh dịch chịu ảnh hưởng của nhiều yếu tố tỏc ủộng như tuổi, giống, nuụi dưỡng, kớch thước dịch hoàn, tần suất khai thỏc…nhưng yếu tố tỏc
ủộng lớn nhất là kỹ thuật kớch thớch tớnh hăng của ủực giống trước khi lấy tinh. Ngoài ra, khoảng cỏch lấy tinh cũng ảnh hưởng tới lượng tinh xuất: khoảng cỏch lấy tinh quỏ ngắn lượng xuất tinh ớt và khoảng cỏch lấy tinh dài lượng xuất tinh nhiều hơn (Cheng, 1992)[41]. Kết quả nghiờn cứu của chỳng tụi ủược trỡnh bày
ở Bảng 4.1 và Biểu ủồ 4.1.
Bảng 4.1. Thể tớch tinh dịch của bũ ủực giống Brahman (ml/lần)
V khai thỏc V ủạt tiờu chuẩn Nhúm bũ n Mean ± SE n Mean ± SE Tỷ lệủạt tiờu chuẩn (%) Brahman Cuba 425 6,66 ± 0,10 416 6,75 ± 0,09 97,88 Brahman Australia 607 6,89 ± 0,08 603 6,92 ± 0,08 99,34 Tổng 1032 6,79 ± 0,06 1019 6,85 ± 0,06 98,74
Thể tớch tinh dịch trung bỡnh một lần khai thỏc của bũ ủực giống Brahman Australia (6,89ml) cao hơn bũ Brahman CuBa (6,66 ml), song sự sai khỏc này khụng cú ý nghĩa thống kờ rừ rệt (P >0,05). 6,75 6,66 6,89 6,92 0 1 2 3 4 5 6 7 8
V khai thỏc V ủạt tiờu chuẩn
Brahman Cuba Brahman Australia
Biểu ủồ 4.1. Thể tớch tinh dịch của bũ ủực giống Brahman (ml/lần)
Thể tớch tinh dịch khai thỏc trung bỡnh của bũ ủực giống Brahman nuụi tại Mụncaủa là 6,79 ml cao hơn kết quả 5,3 ml của MiChael và CS (1982)[54] trờn cựng giống bũ Brahman tại Florida, Mỹ; 6,6ml tại nghiờn cứu của Brito và CS (2002)[37] trờn cựng giống bũ Brahman nuụi tại Brazil; 3,2-5,3ml/lần của Bajwa (1986)[35] trờn cỏc giống bũ Zờbu (Redsinhi, Sahiwal) nuụi tại Pakistan.
Trong sản xuất tinh ủụng lạnh, chỉ những lần khai thỏc cú thể tớch ủạt từ
3 ml trở lờn mới ủưa vào sản xuất. Kết quả nghiờn cứu của chỳng tụi cho thấy thể tớch tinh dịch ủạt tiờu chuẩn trung bỡnh của bũ Brahman Australia (6,92ml) cao hơn bũ Brahman Cuba (6,75 ml), song sự sai khỏc này khụng cú ý nghĩa ở mức thống kờ (P>0,05). Thể tớch tinh dịch ủạt tiờu chuẩn của bũ Brahman trung bỡnh một lần khai thỏc là 6,85ml, với tỷ lệ ủạt tiờu chuẩn cao trung bỡnh 98,74%. Kết quả này ủạt tiờu chuẩn Nụng nghiệp Việt Nam 10TCN 531-2002 (≥ 3ml).
Ở Miền Bắc Việt Nam, thời tiết khớ hậu bốn mựa Xuõn, Hạ, Thu và
ðụng rừ rệt, nhưng mựa Hố - Thu cú thời tiết nắng núng và mựa ðụng- Xuõn cú thời tiết ớt nắng và cú nhiệt ủộ thấp hơn nờn số lượng và chất lượng tinh dịch cũng khỏc nhau. Qua nghiờn cứu, thể tớch tinh dịch của giống bũ Brahman nuụi tại Mụncaủa theo mựa vụ ðụng - Xuõn và Hố - Thu cho kết quả trong Bảng 4.2 và Biểu ủồ 4.2.
Bảng 4.2. Thể tớch tinh dịch của bũ ủực giống Brahman theo mựa vụ (ml/ lần)
Brahman Cuba Brahman Australia Chỉ tiờu
ðụng-Xuõn Hố - Thu ðụng-Xuõn Hố - Thu
n 208 217 308 299 V khai thỏc Mean ± SE 6,70 ± 0,14 6,62 ± 0,13 6,89 ± 0,11 6,90 ± 0,11 n 205 211 306 297 V ủạt tiờu chuẩn Mean ± SE 6,76 ± 0,14 6,73 ± 0,13 6,91 ± 0,11 6,93 ± 0,11 Tỷ lệủạt tiờu chuẩn % 98,56 97,24 99,35 99,33
Qua kết quả trờn, thể tớch tinh dịch bỡnh quõn của nhúm bũ Brahman CuBa trong vụ ðụng - Xuõn (6,70ml) cao hơn trong vụ Hố - Thu (6,62ml). Trong lỳc ủú, thể tớch tinh dịch của nhúm bũ Brahman Australia ở vụ ðụng - Xuõn (6,89ml) tương ủương vụ Hố - Thu (6,90ml).
Thể tớch tinh dịch ủạt tiờu chuẩn của bũ Brahman Cuba trong vụðụng - Xuõn (6,76 ml) tương ủương với vụ Hố - Thu (6,73 ml); bũ Brahman Australia ở vụ ðụng - Xuõn thể tớch tinh dịch ủạt tiờu chuẩn (6,91 ml) tương
Qua phõn tớch phương sai cho thấy thể tớch tinh dịch trung bỡnh của hai nhúm bũ trong vụ ðụng - Xuõn và Hố - Thu cú khỏc nhau, song sự sai khỏc này khụng cú ý nghĩa thống kờ (P>0,05). ðiều ủú chứng tỏ rằng mựa vụ trong năm khụng ảnh hưởng ủỏng kể ủến thể tớch tinh dịch của giống bũ Brahman nuụi tại Mụncaủa. 6,70 6,89 6,91 6,76 6,90 6,93 6,62 6,73 6,00 6,20 6,40 6,60 6,80 7,00
V khai thỏc V khai thỏc V ủạt tiờu chuẩn V ủạt tiờu chuẩn Brahman Cuba Brahman Australia Brahman Cuba Brahman Australia
ðụng - Xuõn Hố - Thu
Biểu ủồ 4.2. Thể tớch tinh dịch của bũ ủực giống Brahman theo mựa vụ (ml/lần)
Tỷ lệ thể tớch tinh dịch ủạt tiờu chuẩn của hai nhúm bũ này ủều ủạt cao
ở cả hai mựa ðụng - Xuõn và Hố - Thu, dao ủộng từ 97,24% ủến 99,35%. Như vậy hầu hết cỏc lần khai thỏc, thể tớch tinh dịch ủều ủạt tiờu chuẩn 10TCN 531-2002 (V ≥ 3 ml)
4.1.2. Màu sắc tinh dịch
Màu sắc tinh dịch là chỉ tiờu ban ủầu ủểủỏnh giỏ chất lượng tinh, thụng qua nú cú thể tạm xỏc ủịnh ủược nồng ủộ tinh trựng, ủồng thời cú thể xỏc ủịnh
Giao và Nguyễn Thanh Dương (1997)[18] tinh dịch tốt cú mầu trắng sữa,
trắng ủục, trắng ngà hoặc vàng kem. Kết quả nghiờn cứu ủược trỡnh bầy ở
Bảng 4.3.
Bảng 4.3. Tần suất xuất hiện màu sắc tinh dịch của bũ ủực giống Brahman
Màu sắc tinh dịch Chỉ tiờu Nhúm bũ Trủụắng c Trngà ắng Trsữắng a Trtrong ắng khỏc Màu Tổng Tần suất 280 112 26 5 2 425 Brahman CuBa T ỉ lệ (%) 65,88 26,35 6,12 1,18 0,47 100 Tần suất 437 97 51 16 6 607 Brahman Australia Tỉ lệ (%) 71,99 15,98 8,40 2,64 0,99 100 Tần xuất 717 209 77 21 8 1032 Tổng hai nhúm Tỉ lệ (%) 69,48 20,25 7,46 2,03 0,78 100 Qua kết quả nghiờn cứu trờn ủàn bũ Brahman nuụi tại Mụncaủa cho thấy tinh dịch của cả 2 nhúm bũ ủều cú mầu chớnh là trắng ủục và trắng ngà, với tần suất xuất hiện 92,24 % ở nhúm CuBa và 87,97% ở nhúm Australia, nhiều nhất là mầu trắng ủục trung bỡnh 2 nhúm chiếm 69,48%. Mầu trắng trong và mầu khỏc chiếm tỷ lệ ớt, trung bỡnh 2 nhúm chiếm 2,81%. Mầu khỏc cú thể là mầu xỏm xanh, mầu ủỏ, mầu hồng, mầu nõu...chiếm tỷ lệ rất thấp (0,78%). Sở
