2. Tổng quan tài liệu và cơ sở khoa học của đề tài
2.4.4.Miễn dịch thụ động
Là trạng thái miễn dịch của một cơ thể nhờ các kháng thể chuyển từ ngoài vào, không phải do cơ thể tự sản xuất đ−ợc. Miễn dịch thụ động cũng
Miễn dịch thụ động tự nhiên
Khi kháng thể đ−ợc truyền một cách tự nhiên từ cơ thể này sang cho cơ thể khác. Ví dụ nh− mẹ truyền kháng thể sang cho con qua nhau thai (đối với gia súc ) hoặc qua lòng đỏ trứng (đối với gia cầm ).
Miễn dịch thụ động nhân tạo
Khi kháng thể đ−ợc con ng−ời đ−a vào cơ thể gia súc, gia cầm ví dụ khi dùng liệu pháp huyết thanh (serotherapy), tức là tiêm kháng huyết thanh hoặc kháng thể chiết xuất từ kháng huyết thanh hoặc lòng đỏ trứng vào cơ thể để tạo kháng thể thụ động nhằm mục đích phòng và chữa bệnh cho con vật. 2.5. Tình hình sử dụng vacxin trên thế giới và khuyến
cáo của tổ chức dịch tễ thế giới 2.5.1. Các loại vacxin phòng bệnh hiện nay
Một trong những khó khăn trong sản xuất vacxin là việc chọn virus, vì kháng nguyên H có tầm quan trọng về miễn dịch nh−ng do có nhiều các phân type với tính đa dạng khi phân lập trong cùng 1 phân type và sự xuất hiện của các phân type khác nhau khi đq trải qua nhiều năm.
a.Vacxin truyền thống
Kháng nguyên virus cúm gia cầm đ−ợc nuôi cấy trong phôi gà, sau đấy đ−ợc vô hoạt bằng hoá chất. Kháng nguyên virus sau khi vô hoạt đ−ợc bổ sung chất bổ trợ nhũ dầu để tăng khả năng đáp ứng miễn dịch. Sự t−ơng đồng giữa kháng nguyên trong vacxin và kháng nguyên của virus môi tr−ờng có cùng subtype H (heamaglutinin t−ơng đồng) sẽ quyết định hiệu lực của vacxin [45]. Việc sử dụng các vacxin vô hoạt đq đạt đ−ợc những hiệu quả về ph−ơng diện sinh học và kinh tế ở một số n−ớc.
Vacxin vô hoạt đồng chủng (homologous):
Là vacxin chứa cùng những virus cúm gà giống nh− chủng gây bệnh trên thực địa. Các loại vacxin này đ−ợc sử dụng rộng rqi ở Mêxicô và Pakistan trong những trận dịch cúm gà.
Hiệu lực của những vacxin này trong việc ngăn ngừa bệnh và giảm l−ợng virus thải ra môi tr−ờng đq đ−ợc chứng minh thông qua các nghiên cứu trên thực địa và các thử nghiệm [46].
Nh−ợc điểm của loại vacxin này là không thể phân biệt gia cầm đ−ợc tiêm chủng với gia cầm tiếp xúc với mầm bệnh trên thực địa trừ khi có những con ch−a đ−ợc tiêm chủng đ−ợc nhốt ở trong chuồng.
Vacxin vô hoạt dị chủng (heterologous):
Ví dụ nh− vacxin vô hoạt H5N2 của Intervet (Hà Lan) và của Weiker (Trung Quốc).
Những vacxin này đ−ợc sản xuất t−ơng tự nh− vacxin vô hoạt đồng chủng. Điểm khác biệt là các chủng virus sử dụng trong vacxin có kháng nguyên H giống chủng virus trên thực địa, nh−ng có Neuraminidase (kháng nguyên N) dị chủng.
Sau khi tiếp xúc với virus trên thực địa, bảo hộ lâm sàng và giảm bài thải virus ra ngoài môi tr−ờng đ−ợc đảm bảo bằng phản ứng miễn dịch sản sinh bởi kháng nguyên nhóm H đồng chủng, trong khi kháng thể chống Neuraminidase sản sinh bởi virus thực địa có thể sử dụng nh− chất đánh dấu sự lây nhiễm trên thực địa [25].
Khi so sánh hai loại vacxin đồng chủng và dị chủng nh− trên sẽ thấy mức độ bảo hộ lâm sàng và việc giảm bài thải virus ra môi tr−ờng bên ngoài của vacxin đồng chủng đ−ợc cải thiện hơn do khối l−ợng kháng nguyên trong vacxin cao hơn [47].
b.Vacxin tái tổ hợp (recombinant vaccine):
Ví dụ nh− vacxin sống virus tái tổ hợp H5 Trovac của Merial (Liên doanh Pháp-Mỹ) và H5N1 của Weiker (Trung Quốc).
Một vài loại vacxin tái tổ hợp phối hợp virus đậu gà chứa kháng nguyên H5 đq và đang đ−ợc nghiên cứu và phát triển và một vacxin gần đây đq đ−ợc cấp phép ở Mêxicô [46].
Một số thí nghiệm cho thấy có thể phối hợp virus đậu gà với kháng nguyên H7. Một số virus khác có thể phối hợp với kháng nguyên H5 hoặc H7 nh− vacxin sử dụng virus viêm thanh khí quản truyền nhiễm (ILTV) [40].
Một −u diểm của vacxin tái tổ hợp hoặc của vacxin chứa kháng nguyên H là sẽ không xảy ra phản ứng đối với phản ứng miễn dịch ng−ng kết kép trên thạch. Chính vì vậy các điều tra huyết thanh học khó có thể thực hiện đ−ợc đối với loại vacxin này.
Vacxin tái tổ hợp cho phép phân biệt giữa động vật nhiễm bệnh và động vật tiêm chủng vacxin bởi vì chúng không sản sinh kháng thể chống lại kháng nguyên Nucleoprotein phổ biến ở tất cả các virus cúm gà. Chỉ những động vật nhiễm bệnh trên thực địa mới tạo ra kháng thể nhóm A (nucleoprotein) và phát hiện ra kháng thể này qua phản ứng ng−ng kết trên thạch hoặc phản ứng ELISA.
Việc sử dụng các vacxin này cũng đ−ợc giới hạn với những loài mà virus đích sẽ nhân lên hoặc sẽ chỉ đ−ợc giới hạn trong đàn gà có huyết thanh âm tính với virus đích. Ví dụ, ILTV sẽ không nhân lên ở gà tây và gà tây đặc biệt quan trọng trong vấn đề dịch tễ của bệnh cúm gà, việc sử dụng vắc xin đ−ợc hạn chế ở vùng không có gà tây.
c. Chiến l−ợc DIVA
Lựa chọn vacxin t−ơng đồng không hoàn toàn cho phép áp dụng chiến l−ợc “DIVA” (Phân biệt con vật nhiễm bệnh và con vật đ−ợc tiêm phòng) để cho thấy không có virus môi tr−ờng đang l−u hành trong đàn gia cầm dùng vacxin. Nhóm H t−ơng đồng đảm bảo tính bảo hộ, còn khả năng phân biệt gà chủng ngừa và gà nhiễm bệnh dựa vào đáp ứng huyết thanh nhóm N bằng phản ứng miễn dịch huỳnh quang gián tiếp. Gà chủng ngừa chỉ d−ơng tính với nhóm N dùng trong vacxin, còn nếu d−ơng tính với nhóm N của virus môi tr−ờng cho thấy đq nhiễm bệnh. Sự phát triển của các vacxin mới và các xét nghiệm khác cho phép phát hiện đ−ợc sự lây nhiễm trên thực địa ở đàn đq tiêm chủng vacxin là một việc làm −u tiên đối với công nghiệp d−ợc và đối
với các viện nghiên cứu bởi tiêm chủng vacxin đq là một giải pháp để khống chế bệnh cúm gà [21].
Nếu việc tiêm chủng vacxin đ−ợc xem xét thì kế hoạch dự phòng phải dự đoán tr−ớc đ−ợc ngân hàng vacxin đq đ−ợc cấp phép, cho phép bắt buộc thực hiện đ−ợc chiến l−ợc “Phân biệt con vật bị nhiễm bệnh với con vật tiêm chủng vacxin”, nh− vậy đảm bảo đ−ợc sức khoẻ động vật, đối xử nhân đạo với động vật và th−ơng mại quốc tế [37].
2.5.2. Yêu cầu cần đạt đ−ợc đối với vacxin phòng bệnh cúm gà
Mỗi loại vắc xin phòng bệnh Cúm gà cần đạt đ−ợc những yêu cầu cơ bản sau: (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
a. An toàn
Trong chế tạo vacxin, chỉ tiêu an toàn là chỉ tiêu cần đ−ợc coi trọng hàng đầu cần phải quan tâm. An toàn của vacxin là khi dùng trên vật chủ không gây bệnh và bệnh tích cho các cơ quan trong cơ thể gia cầm. Tuy nhiên những biểu hiện phản ứng cục bộ hoắc toàn thân nhẹ trong một thời gian ngắn (triệu chứng không đặc tr−ng) có thể đ−ợc chấp nhận ở một số loại vacxin nếu sau đó con vật trở lại khoẻ mạnh và có miễn dịch. Tính an toàn của một vacxin còn phụ thuộc vào thời điểm đ−a vacxin vào cơ thể con vật.
Theo tiêu chuẩn của Tổ chức dịch tễ thế giới (OIE), vacxin cúm gà vô hoạt đạt tiêu chuẩn an toàn khi tiêm 2 liều sử dụng cho 10 gà 3 tuần tuổi, theo dõi 2 tuần không có biểu hiện của bệnh cũng nh− bệnh lý cục bộ.
b. Hiệu lực
Hiệu lực của vacxin còn có thể hiểu là khả năng kích thích tạo miễn dịch đặc hiệu đủ sức chống bệnh của một vacxin ít nhất là trong giai đoạn mẫn cảm với bệnh.
Hiệu lực của vacxin phụ thuộc vào nhiều yếu tố, trong đó tính kháng nguyên của virus vacxin và tính đặc hiệu giữa kháng thể sinh ra và kháng nguyên là quan trọng nhất. Những virus có tính kháng nguyên cao và giữ đ−ợc tính kháng nguyên cao sau khi đ−ợc chế làm vacxin thì khả năng kích thích
2.5.3. Tình hình sử dụng vacxin cúm gia cầm trên thế giới.
Mặc dù có một số loại vacxin đq đ−ợc nghiên cứu và thử nghiệm trong phòng thí nghiệm về khả năng ứng dụng ngoài thực địa nh−ng chỉ có hai loại vacxin đ−ợc cấp giấy phép và đ−ợc sử dụng đối với gia cầm: các vacxin virus cúm gia cầm toàn thân, vô hoạt và một vacxin vector virus đậu gà tái tổ hợp với gene AI H5 nhận từ vi rút AI của gà tây A/turkey/Ireland/83 [H5N8]). Công nghệ sản xuất hai loại vacxin này đảm bảo vacxin đạt độ an toàn, tinh khiết và hiệu lực theo yêu cầu. Cả hai loại vacxin này đều đòi hỏi bắt và tiêm từng con vật [29].
Số l−ợng vacxin đq đ−ợc sử dụng trên thực địa ch−a đ−ợc từng n−ớc thông báo cụ thể, nh−ng các nguồn tin đáng tin cậy cho rằng Mêxicô đq sử dụng 1 tỷ 300 triệu liều vacxin vô hoạt và 850 triệu liều vacxin tái tổ hợp đậu gà trong ch−ơng trình sử dụng vacxin chống bệnh cúm gia cầm từ tháng 1 năm 1995 và đq thanh toán đ−ợc bệnh cúm gia cầm thể độc lực cao do virus H5N2 vào tháng 6 năm 1995, mặc dù virus H5N2 thể độc lực thấp vẫn l−u hành. Indonesia cũng sử dụng vacxin AI H5 vô hoạt. Từ 1995 Pakistan bắt đầu sử dụng vacxin phòng chống cúm gia cầm ở các ổ dịch H7N3 thể độc lực cao (1995, 2001 và 2004). Các vacxin vô hoạt chế tạo từ chủng virus H9N2 độc lực thấp đq và đang đ−ợc sử dụng ở một số n−ớc châu á, vùng Cận Đông và Đông Âu. Gần đây, vacxin vô hoạt nhũ dầu H7 đq đ−ợc dùng cho các vùng có nguy cơ cao ở phía Bắc Italy và tại một công ty nuôi gà con một ngày tuổi ở Mỹ [20].
Trung Quốc là n−ớc sử dụng vacxin nhiều nhất với số l−ợng 2 tỷ 830 triệu liều (tính từ tháng 12 năm 2003 đến tháng 4 năm 2005). Trung Quốc đq có bản t−ờng trình về kết quả của 3 vacxin đang đ−ợc sử dụng tại Trung Quốc, đ−ợc tóm tắt nh− sau:
+ Vacxin vô hoạt AI (chủng H5, N-28): Bộ Nông nghiệp Trung Quốc đq phê chuẩn vacxin này là một sản phẩm mới dùng cho gia cầm từ tháng 12
năm 2003.Vacxin này đq đ−ợc sử dụng rộng rqi ở Trung Quốc trong các ổ dịch cúm gia cầm thể độc lực cao vào đầu năm 2004.
+ Vacxin vô hoạt vi rút cúm gia cầm tái tổ hợp (sub-typ H5N1, chủng Re- 1). Bộ Nông nghiệp Trung Quốc đq phê chuẩn vacxin này là sản phẩm mới dùng cho gia cầm từ tháng 1 năm 2005.Vacxin rất có hiệu quả đối với bệnh cúm gia cầm, kích thích gia cầm sản xuất kháng thể với hiệu giá cao hơn và thời gian bảo hộ dài hơn. Các thực nghiệm đq chứng minh rằng thủy cầm đ−ợc tiêm chủng vacxin này không bị nhiễm và không bài thải virus cúm gia cầm. Hiện nay, nhiều n−ớc trên thế giới đq sử dụng kỹ thuật này để chế tạo chủng virus vacxin nh−ng chỉ có Trung Quốc là thành công và đq th−ơng mại hóa đ−ợc vacxin [43].
+ Vacxin sống virus đậu tái tổ hợp phòng cúm gia cầm (H5). Bộ Nông nghiệp Trung Quốc đq phê chuẩn vacxin này là một sản phẩm mới dùng cho gia cầm từ tháng 1 năm 2005. Sử dụng vacxin này có thể phân biệt đ−ợc miễn dịch do vacxin hay bị nhiễm tự nhiên.
2.5.4. Khuyến cáo của OIE về việc sử dụng vacxin phòng chống cúm gia cầm. Đối với bệnh cúm gà, việc sử dụng, tiêm chủng vacxin nh− một giải pháp, Đối với bệnh cúm gà, việc sử dụng, tiêm chủng vacxin nh− một giải pháp, một công cụ hỗ trợ tích cực để ngăn chặn, khống chế và tiến đến thanh toán bệnh cúm gà ở vùng nhiễm bệnh [28].
Theo quan điểm của OIE, vacxin nên đ−ợc sử dụng nh− là một biện pháp trong chiến l−ợc toàn diện phòng chống bệnh cúm gia cầm mà chiến l−ợc đó bao gồm:
- An toàn sinh học.
- Nâng cao nhận thức ng−ời dân. - Chẩn đoán và giám sát.
- Loại bỏ gia cầm bị nhiễm virus. - Sử dụng vắc xin.
L−u ý tr−ớc khi sử dụng vacxin:
- Vacxin phải đ−ợc sản xuất theo công nghệ đq tiêu chuẩn hóa để đảm bảo có một vacxin hiệu quả và phù hợp về chủng virus.
- Cần có các hoạch định tr−ớc về bảo quản tốt vắc xin, phân phối và sử dụng vacxin
- Đảm bảo đ−ợc việc giám sát huyết thanh học và virus học để xác định virus c−ờng độc có l−u hành trong đàn gia cầm đ−ợc dùng vacxin hay không.
- Phải có một kế hoạch loại trừ (exit strategy) để phòng tránh việc sử dụng vĩnh viễn vacxin
L−u ý khi dùng vacxin virus toàn thân vô hoạt:
- Cần một l−ợng kháng nguyên đủ để kích thích một đáp ứng miễn dịch phòng hộ
- Cần đảm bảo an toàn sinh học cho nhân viên tiêm phòng vacxin ngoài thực địa để ngăn ngừa sự lây lan của virus c−ờng độc.
Ưu điểm của tiêm chủng:
- Giảm đáng kể virus bài xuất trong đàn gà nhiễm bệnh - Giảm thiểu nhu cầu loại thải những đàn gia cầm khoẻ mạnh
- Là ph−ơng án thay thế khả thi đối với những đàn gà có giá trị cao và gà chăn nôi gia đình, gà cảnh. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
- Giảm thiệt hại kinh tế cho ngành chăn nuôi gia cầm công nghiệp.
Nh−ợc điểm của việc tiêm chủng:
- Không phù hợp với qui định th−ơng mại quốc tế. Tiêm chủng đ−ợc chấp nhận nh− một biện pháp khống chế dịch cúm gà của OIE
- Những đàn gà tiêm chủng không biểu hiện triệu chứng lâm sàng bệnh cúm. Vai trò của việc tiêm phòng trong công tác kiểm soát dịch cúm gia cầm phải đ−ợc bắt đầu với kết luận rằng bệnh cúm gia cầm độc lực thấp, nếu không đ−ợc kiểm soát, có thể dẫn tới sự xuất hiện dịch cúm độc lực cao.
Những vacxin nh− vậy có thể giảm sự nghiêm trọng của bệnh và sự lan truyền của virus trong tình huống thực tế, nh−ng virus có thể sẽ không bị loại hoàn toàn khỏi đàn gia cầm[41].
3. Nội dung, nguyên liệu, ph−ơng pháp nghiên cứu ph−ơng pháp nghiên cứu
3.1. Nội dung nghiên cứu
- Gây miễn dịch chủ động cho gà bằng vacxin cúm gia cầm H5N2 theo các lịch trình khác nhau.
- Giám sát gà chỉ báo sau tiêm phòng.
- Đánh giá đáp ứng miễn dịch và độ dài miễn dịch của gà sau khi tiêm phòng vacxin.
- Đánh giá đáp ứng miễn dịch thụ động qua lòng đỏ trứng gà. - Đánh giá đáp ứng miễn dịch thụ động ở gà con.
3.2. nguyên liệu dùng trong nghiên cứu
Động vật thí nghiệm
+ Gà h−ớng trứng 1 ngày.
+ Thức ăn đq đ−ợc tiêu chuẩn hóa.
Vacxin
+ Vacxin của WEIKER-Trung Quốc vô hoạt H5N2 dạng nhũ dầu màu trắng sữa.
Đây là vacxin chứa kháng nguyên vô hoạt cúm gia cầm subtype H5 (H5N28): A/gà tây/Anh/N28/73
Các hoá chất dùng trong xét nghiệm
* Môi tr−ờng và hoá chất bảo quản bệnh phẩm
- Môi tr−ờng 199 chứa 0,5% BSA (Albumin huyết thanh bò) có bổ sung kháng sinh.
Penicillin G 2.000.000U/l Streptomycin 200 mg/l Polymyxin B 2.000.000 U/l Gentamicin 250 mg/l Nystatin 500.000 U/l Ofloxacin HCl 60 mg/l Sulfamethoxasole 200 mg/l - Môi tr−ờng Glycerol Pha chế PBS NaCL 8g KCl 0,2 g Na2HPO4 1,15 g KH2PO4 0,2 g N−ớc cất vđ 1000 ml
Hấp vô trùng 1210C/ 15 phút, bổ sung kháng sinh có trộn với glycerol theo tỷ lệ 1:1.
* Chuẩn bị các dung dịch và xử lý huyết thanh
- Dung dich PBS 0,01M pH7.2
Na2HPO4 1,096 g
NaH2PO4..H2O 0,316 g
Na Cl 8,5 g
N−ớc cất 1 lit
Chỉnh pH = 7.2 băng NaOH 1N hoăc HCl 1N, hấp vô trùng, bảo quản 4oC không quá 3 tuần. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
- Dung dịch n−ớc muối sinh lý 0,85%:
8,5 g NaCl trong 1 lít n−ớc cất.
Hấp vô trùng, bảo quản 4oC không quá 3 tuần.
+ Máu gà trống khoẻ mạnh đq tr−ởng thành, không có kháng thể cúm và Newcastle.
+ Dùng bơm tiêm 5 - 10ml hút sẵn 1ml (10% thể tích) dung dịch chống đông (Natri Citrat 4%) rồi lấy máu gà cho máu vào ống nghiệm.
+ Ly tâm1000 - 1500 vòng/phút,trong 15 phút, hút bỏ huyết t−ơng, cho thêm n−ớc sinh lý(NaCl 0,85%) vào hồng cầu,lắc đều.Ly tâm nh− trên3- 4