M10, M11 phân lập từ bánh men đều có màu trắng. Các chủng nấm mốc có màu xám, viền trắng là M2 và M6. Riêng chủng nấm mốc M4 thì có màu trắng, xám nhạt.
- Về kích thước khuẩn lạc nấm mốc trong 2 ngày sau khi cấy, có kích thước từ 3,9 – 9, 5 cm.
- Tốc độ phát triển của các chủng nấm mốc phân lập được đều nhanh. Riêng chủng M4 có tốc độ phát triển vừa phải.
Sau khi quan sát dưới kính hiển vi, dựa vào khóa phân loại của TS.
Đặng Vũ Hồng Miên, chúng tôi đã phân loại sơ bộ được 3 chủng đến giống: - Chủng M4 thuộc giống Mucor.
- Chủng M2 và M6 thuộc giống Rhizopus.
Do điều kiện hạn chế về thời gian, thiết bị máy móc cũng như hóa chất, chúng tôi chỉ phân loại sơ bộđược 3 chủng nấm mốc đến giống.
3.3. Kết quả xác định khả năng phân giải tinh bột của các chủng nấm mốc : mốc :
Kết quả thí nghiệm xác định khả năng phân giải tinh bột của các chủng nấm mốc cho thấy 9 chủng: M1, M3, M4, M5, M7, M8, M9, M10, M11 có khả năng tạo vòng phân giải tinh bột và 2 chủng: M2, M6 không có khả năng tạo vòng phân giải tinh bột.
Các chủng nấm mốc có khả năng phân giải tinh bột do đó chúng có khả
năng tạo ra enzyme amylase. Nấm mốc tạo ra enzyme amylase phân giải liên kết 1,4 – glycoside ở giữa chuỗi tạo thành dextrin phân tử thấp. Dưới tác dụng
của enzyme amylase, tinh bột trong môi trường nhanh chóng bị mất khả năng tạo màu với dung dịch iodine.
Như vậy, 9 chủng nấm mốc: M1, M3, M4, M5, M7, M8, M9, M10, M11 có khả năng tạo enzyme amylase và 2 chủng nấm mốc: M2, M6 không có khả năng tạo enzyme amylase. Kết quả đo vòng phân giải tinh bột của các chủng nấm mốc theo bảng 3.3:
Bảng 3.3: Khả năng phân giải tinh bột của các chủng nấm mốc phân lập từ
bánh men cơm rượu
STT Chủng Đường kính phân giải tinh bột (cm)
1 M1 1,85 2 M2 - 3 M3 3,1 4 M4 2,25 5 M5 1,55 6 M6 - 7 M7 1,25 8 M8 2,6 9 M9 2,75 10 M10 2,1 11 M11 2,23
Qua kết quả thí nghiệm khả năng phân giải tinh bột của các chủng nấm mốc
đã cho thấy các chủng nấm mốc phân lập được từ bánh men có đường kính phân giải từ 1,25 – 3,1 cm. Trong đó có 2 chủng nấm mốc không có khả năng phân giải tinh bột là chủng M2 và M6. Khả năng phân giải tinh bột của chủng M3 là lớn nhất có vòng phân giải là 3, 1 cm, trong khi đó chủng M7 có khả
a. Chủng M3 b. Chủng M4
Hình 3.2: Khả năng phân giải tinh bột của các chủng M3, M4, M9, M11
Hình 3.3: Khả năng phân giải tinh bột của các chủng M6, M7
3.4 Kết quả thu nhận enzyme amylase từ nấm mốc:
Do thời gian thực hiện đề tài có hạn, chúng tôi chỉ sử dụng chủng nấm mốc M4 để thu nhận enzyme amylase. Chúng tôi chỉ chọn chủng M4 để thu nhận amylase vì lý do sau:
Chủng M4 là 1 trong 9 chủng nấm mốc phân lập được từ bánh men có khả năng phân giải tinh bột cho vòng phân giải tương đối lớn là 2,25 cm.
Chủng M4 đã được định danh sơ bộ là giống Mucor.
Kết quả thí nghiệm cho thấy, từ 1 lít môi trường nuôi cấy chủng M4, chúng tôi thu nhận được 1,23 g chế phẩm enzyme amylase bán tinh khiết. Theo tài liệu tham khảo [8], thông thường bằng phương pháp nuôi bề sâu, từ 1 lít môi trường nuôi cấy thu được từ 1 – 4 gam chế phẩm enzyme khô.
Dưới đây là một số hình ảnh trong quá trình thu nhận enzyme amylase bán tinh khiết từ chủng nấm mốc M4.
Hình 3.6: Chế phẩm enzyme amylase bán tinh khiết từ nấm mốc
3.5. Kết quả xác định hoạt độ của enzyme amylase bán tinh khiết:
Mật độ quang của dung dịch đối chứng: OD1 = 0,023
Mật độ quang của dung dịch nghiên cứu: OD2 = 0,014
- Lượng tinh bột bị thủy phân:
039 , 0 1 , 0 023 , 0 014 , 0 023 , 0 1 , 0 1 2 1 − × = − × = = OD OD OD C (g) - Hoạt độ amylase của chế phẩm enzyme: 72 , 4912 1000 05 , 0 03766 , 0 039 , 0 . 264 , 7 1000 03766 , 0 . 264 , 7 − × = − × = = w C HdAn (đv/g)
Chế phẩm enzyme amylase bán tinh khiết mà chúng tôi thu nhận được từ chủng nấm mốc M4 có hoạt độ cao là 4912,72 đv/g, điều này có ý nghĩa quan trọng góp phần tạo ra nguồn enzyme amylase có giá trị từ chủng nấm mốc này và ứng dụng rộng rãi trong nhiều lĩnh vực không những trong ngành công nghiệp thực phẩm mà còn trong các ngành khác như: ngành công nghiệp dệt, sản xuất chất tẩy rửa, y học, chăn nuôi …
CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1. KẾT LUẬN:
Sau một thời gian tiến hành nghiên cứu, chúng tôi đã:
• Phân lập được 11 chủng nấm mốc từ bánh men cơm rượu ở 8 địa điểm khác nhau.
• Định danh sơ bộ được 3 chủng đến giống: Chủng M4: giống Mucor
Chủng M2 & M6: giống Rhizopus
• Trong đó có 9 chủng nấm mốc đều có khả năng phân giải tinh bột bao gồm các chủng: M1, M3, M4, M5, M7, M8, M9, M10, M11 và 2 chủng không có khả năng phân giải tinh bột là chủng M2, M6. Như vậy, 9 chủng nấm mốc có khả năng tạo enzyme amylase, 2 chủng nấm mốc không có khả năng tạo enzyme amylase.
• Chúng tôi đã tiến hành nuôi cấy chủng M4 để thu nhận được enzyme amylase bán tinh khiết theo phương pháp nuôi cấy chìm.
• Từ 1 lít môi trường nuôi chủng M4 thu được 1,23 g chế phẩm enzyme amylase bán tinh khiết.
• Chế phẩm enzyme amylase bán tinh khiết thu được có hoạt độ cao là 4912,72 đv/g.
4.2. KIẾN NGHỊ:
Do thời gian có hạn và điều kiện máy móc thiết bị còn hạn chế, chúng tôi không thể tiến hành các nghiên cứu sâu hơn. Với những kết quả đạt được, chúng tôi đề nghị:
• Tiến hành định danh các chủng đến loài.
• Nghiên cứu tối ưu quá trình sản xuất enzyme amylase để thu được lượng enzyme tối đa, chất lượng với chi phí thấp.
• Nghiên cứu sản xuất enzyme amylase từ các chủng khác có khả năng phân giải tinh bột ngoài chủng M4.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
[1] Nguyễn Văn Bá – Cao Ngọc Điệp – Nguyễn Văn Thành, Giáo trình môn
Nấm học, Viện nghiên cứu và phát triển công nghệ sinh học – Trường ĐH Cần Thơ, 2005.
[2] Nguyễn Lân Dũng, Vi sinh học học, NXB Giáo Dục, số 04 – 2009/CXB/301 – 2117/GD.
[3] Bùi Xuân Đồng, Nguyên lý phòng chống nấm mốc và mycotoxin, NXB
Khoa học và Kỹ thuật Hà Nội, 2003
[4] Nguyễn Thị Hiền (Chủ Biên), Công nghệ sản xuất mì chính và các sản phẩm lên men cổ truyền, NXB Khoa học và Kỹ thuật – ĐH Bách Khoa Hà Nội, 2006.
[5] Nguyễn Đức Lượng (Chủ biên), Cao Cường – Nguyễn Ánh Tuyết – Lê Thị Thủy Tiên – Tạ Thu Hằng – Huỳnh Ngọc Oanh – Nguyễn Thúy Hương – Phan Thị Huyền, Công nghệ enzyme, NXB Đại học Quốc gia TP.Hồ Chí Minh Trường ĐH Bách Khoa, 2004.
[6] Nguyễn Đức Lượng (Chủ biên) – Phan Thị Huyền – Nguyễn Ánh Tuyết,
Thí nghiệm công nghệ sinh học, tập 2, Thí nghiệm vi sinh vật học, NXB ĐH Quốc gia TP. Hồ Chí Minh, 2006.
[7] Nguyễn Văn Mùi, Thực hành Hóa sinh học, NXB Khoa học và Kỹ thuật, 2000.
[8] Đồng Thị Thanh Thu, Sinh hóa ứng dụng (Trong công nghiệp thực phẩm và một số lĩnh vực khác), NXB Đại học Quốc gia TP.Hồ Chí Minh Trường
ĐH Khoa học Tự nhiên, 2003.
TÀI LIỆU TRÊN MẠNG [9].http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Mature_sporangium_of_a_Muco r_sp._fungus _PHIL_3960_lores.jpg [10].http://muivi.com/muivi/index.php?option=com_content&task=view&id= 3087&Itemid=431 [11].http://vi.wikipedia.org/wiki/N%E1%BA%A5m