3.1 đối tượng nghiên cứu
-Bệnh virus hại lúa lùn sọc ựen Southern rice black streaked dwarf virus (SRBSDV).
3.2. Thời gian và ựịa ựiểm nghiên cứu
- Thời gian thực hiện ựề tài: từ tháng 1/2010 ựến tháng 12/2010.
- địa ựiểm thực hiện ựề tài: Trung tâm bảo vệ thực vật phắa Bắc, trung tâm nghiên cứu bệnh cây nhiệt ựới Ờ Trường đHNN, trung tâm giám ựịnh kiểm dịch thực vật.
- Chúng tôi tiến hành ựiều tra ựịnh kỳ tại huyện Tiền Hải - Thái Bình và lấy mẫu của một số vùng lân cận trồng lúa thuộc các tỉnh phắa Bắc Việt Nam.
3.3. Vật liệu nghiên cứu
3.1.1. Cây ký chủ bị bệnh
Mẫu bệnh: Các mẫu bệnh trên lúa bị bệnh lùn sọc ựen phương Nam ựược thu thập từ các vùng bị bệnh nặng (tỷ lệ bệnh >20%) thuộc huyện Tiền Hải tỉnh Thái Bình trong năm 2010. Thắ nghiệm lây bệnh nhân tạo (LBNT) ựược tiến hành trên lúa giống BTs7 và môi giới truyền bệnh là rầy lưng trắng, rầy nâu, rầy nâu nhỏ và ựược duy trì trong nhà lướị
3.1.2. Vector truyền bệnh
- Rầy lưng trắng, rầy nâu nhỏ, rầy nâu ựược nhân nuôi tại nhà lưới của Trung tâm bảo vệ thực vật phắa Bắc.
Các mẫu rầy (RLT, RN, RNN) ựược thu từ các vùng bị bệnh và nguồn rầy sạch nuôi liên tục 2 thế hệ trong phòng thắ nghiệm.
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ.. 30
Nuôi nguồn rầy và nguồn bệnh trong nhà lưới ựể lấy nguồn lây bệnh nhân tạo
3.1.3. Cặp mồi dùng ựể lây nhiễm.
Một cặp mồi RT Ờ PCR ựược thiết kế từ vùng bảo thủ của gene S10 từ 17 chuỗi sẵn có trên GenBank ựại diện 3 virus là RBSDV (Rice black- streaked dawrf virus), SRBSDV (Southem rice black- streaked dawrf virus) = RBSDV2 (Rice black- streaked dawrf virus 2) và MRDV ( Maize rough dawrf virus). Trình tự cặp mồi này là:
RB- S10 -F2: 5ỖTCCATAATGGCTGACATAAGAC3Ỗ RB-S10-R2: 5ỖCATTTGAGCAGGAACTTCACG3Ỗ Cặp mồi này tạo sản phẩm có kắch thước dự kiến là 0.6 kb.
3.1.4. Dụng cụ, hóa chất và thiết bị nghiên cứu
- Dụng cụ phục vụ cho thu mẫu rầy và bố trắ thắ nghiệm gồm: Máy hút rầy, ống tuýp sạch, lồng chụp, chậu vại cấy lúa, ống nghiệm, chầy cối sứ, lồng chụp bắt rầy sau thắ nghiệm.
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ.. 31
nhân gây bệnh trong phòng thắ nghiệm:
Ớ Phương pháp RTỜPCR: gồm hóa chất các loại, ựệm tách chiết RNA, cặp mồi ựặc hiệu của SRBSDV, máy li tâm, máy PCR, máy ựiện di, máy ựọc trình tự gen.
3.4. Nội dung và phương pháp nghiên cứu
3.4.1. Nội dung nghiên cứu