vào cốc một ít nước sạch dùng ñũa thủy tinh khuấy nát phân sau ñó thêm lượng nước gấp khoảng 10 lần lượng phân. Lọc dung dịch qua lưới sắt vào cốc sạch to hơn, cặn bỏ ñi. ðổ thêm nước sạch cho ñầy cốc, khuấy ñều, ñể
yên tĩnh khoảng 4-5 phút, cẩn thận lọc lấy cặn gạn bỏ phần nước trong ở trên
ñi, cứ làm như thế cho ñến khi nước phía trên trong và cặn ở ñáy cốc còn ít, thì gạn bỏ phần nước trong phía trên ñi lấy cặn ñáy cho vào ñĩa petri hoặc ñĩa kính ñồng hồ, quan sát dưới kính hiển vi ñể tìm trứng sán.[12]
3.5.3. Phương pháp ñếm trứng Mc. Master
cho 3 gam phân vào bình thủy tinh, hoặc lọ nhựa. Cho nước sạch ñến vạch 45ml, dùng ñũa thủy tinh hay viên bi trộn ñều lọc qua lưới lọc có kích cỡ
16-36 lỗ/cm2. Cho thêm nước sạch ñến vạch 45 ml, trộn ñều và hút dung dịch cho lên 2 buồng ñếm của Slide. ñể yên từ 2-5 phút sau ñó ñưa soi dưới kính hiển vi ñếm số trứng trên hai buồng ñếm.[12]
Cách tính số trứng trong 1 gam phân:
- thể tích của buồng ñếm là 0,15 ml. Ta có 0,15 ml của 3 gam phân trong dung dịch 45 ml. - Gọi số trứng ñếm ñược là X X × 45 - Ta có số trứng trong 45 ml là: 0.15 X × 45
- Số trứng có trong 1 gam phân là: 0,15 x 3
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ...37
1 gam phân, nó cho phép ñánh giá mức ñộ cảm nhiễm của sán. Dùng Phương pháp này ñểñánh giá hiệu quả của thuốc tẩy sán.
3.5.4. Phương pháp ñịnh loại trứng sán.
ðịnh loại trứng sán theo phương pháp ñịnh loại của Mognig (Trịnh Văn Thịnh, !963) [21]
3.5.5.Phương pháp mổ khám phi toàn diện ñường tiêu hóa của chó mèo
Mổ khám tìm sán khi gia súc ñã chết cho kết quả chính xác nhất, nó cho biết chắc chắn sự có mặt của sán ký sinh trong cơ thể gia súc và mức ñộ cảm nhiễm cũng như các biến ñổi về giải phẫu bệnh lý học theo phương pháp mổ
khám của viện sĩ Skrjabin K.I [25]
3.5.5.1. Phương pháp mổ khám phi toàn diện ñường tiêu hóa tìm sán trưởng thành.
Do ñặc tính ký sinh của Clonorchis sinensis tại ñường tiêu hoá của gia súc,.chúng tôi mổ khám chó, mèo tìm sán ở gan và túi mật.
- Gan: mổ gan dọc theo ñường ống dẫn mật tìm sán có hình lá ñặt lên ñĩa petri với nước muối 0,9%. Gan ñược cắt thành miếng nhỏ ñem ngâm trong dung dịch nước muối 0,9% trong khoảng 10 phút, sau ñó bóp nát lọc ñến khi nước trong tìm sán lá.
- Mật: mổ mật, lấy dịch mật rửa sa lắng vài lần lọc lấy cặn soi trên kính hiển vi tìm trứng sán
Thu lượm sán trưởng thành bảo quản trong cồn 70º. Lọ bảo quản phải ghi chép rõ ràng chi tiết: loài gia súc, tính biệt, ñộ tuổi, ñịa ñiểm thu lượm, ghi chép biến ñổi giải phẫu bệnh lý nếu có.
3.5.5.2. Phương pháp làm tiêu bản ñịnh loại sán.
- Chuẩn bị dung dịch thuốc nhuộm carmine- axit Clohidric (HCl): lấy 5 gam carmine nghiền nhỏ cho vào bình tam giác chứa 5ml HCl và 5ml nước cất, ñể yên sau 1 giờ, cho thêm 200ml cồn 90º, lắc ñều, ñậy nút bông, ñun
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ...38
cách thủy cho tới khi carmine tan hết,ñể một ngày sau lọc. Dung dịch ñể sau 1 tuần mới dùng.
- Nhuộm mẫu trong carmine axit: tùy thuộc vào ñộ lớn của mẫu mà thời gian mẫu ñể trong dung dịch nhuộm có thể từ 5 phút ñến 1 giờ. Người ta dùng cồn axit (100ml cồn 80º, thêm vào 2-3 giọt HCl) ñể tẩy màu carmine và làm rõ cấu tạo chi tiết trong 1- 10 phút tùy thuộc vào kích thước mẫu. Sau ñó rút nước trong cồn ở các nồng ñộ khác nhau: 80º, 90º, 100º, thời gian trong mỗi loại cồn 5-7 phút, mẫu có kích thước lớn thường ñể trong dung dịch lâu hơn. Sau ñó làm trong mãu bằng dung dịch xylen và cồn 100º theo tỷ lệ 1:1 trong thời gian từ 1-2 phút. Cuối cùng lên tiêu bản bằng cách nhỏ lên tiêu bản bằng ách nhỏ lên lam kính 1 giọt bom Canada, ñặt mẫu ngay ngắn , nhỏ tiếp một giọt bom lên trên rồi ñậy lamen lại, ðể tiêu bản ở vị trí nằm cho tới khi bom khô thì tiêu bản ñã ñảm bảo hoàn toàn.[21]
3.5.5.3. Phương pháp ñịnh loại sán