Khi ệềng lỰnh hoẳc giời ệềng, cịc hiỷn t−ĩng nếu trến sỳ ệe dảa sù sèng cựa tinh trỉng, nh−ng khi cã biỷn phịp chèng ệềng thừ khờ nẽng tăn tỰi cựa tinh trỉng lộ thùc tạ. Cịc nhẹn tè sau ệẹy gióp tinh trỉng tăn tỰi khi giời ệềng (Ditto, 1992) [30].
2.5.3.1. Thộnh phẵn cựa mềi tr−êng pha loTng
Thộnh phẵn cể bờn cựa mềi tr−êng pha logng tinh dỡch lộ ệ−êng saccharid, chÊt ệỷm vộ lưng ệá trụng gộ. Sục sèng cựa tinh trỉng khi ệềng lỰnh vộ giời ệềng khịc nhau tuú theo thộnh phẵn nộỵ
Năng ệé tèi −u cựa lưng ệá trụng gộ tõ 15% ệạn 20%, nạu năng ệé nộy quị thÊp hoẳc quị cao thừ khềng tèt cho tinh trỉng, mẳc dỉ lưng ệá trụng ệg bờo vỷ tinh trỉng khềng bỡ tữn hỰi trong khi ệềng lỰnh. Chục nẽng nộy chự yạu do tịc ệéng cựa lipoprotein vộ lecithin trong lưng ệá. ậ−êng saccharide ệãng vai trư quan trảng trong mềi tr−êng, do tịc ệéng ệạn ịp suÊt thÈm thÊu, nã cã tịc dông bờo vỷ tinh trỉng khi ẻ nhiỷt ệé thÊp vộ lộ nguăn nẽng l−ĩng cho tinh trỉng.
Nhọng saccharide cã khèi l−ĩng phẹn tỏ cao, lộm cho hoỰt lùc cựa tinh trỉng tèt hển sau khi ệềng lỰnh vộ giời ệềng. Cịc saccharide cã phẹn tỏ l−ĩng cao (tÝnh theo phẹn tỏ l−ĩng giờm dẵn) bao găm: Trisaccharide, disacharide, hexoses vộ pentonẹ Trong sè hexoses thừ glucose cã hiỷu quờ nhÊt, cã cịc chÊt ệa ệ−êng polysaccharide thừ Ýt cã tịc dông. Bờo vỷ lỰnh bỪng saccharide lộ nhê cã nhãm hydroxy (-OH) trong cÊu tróc, do ệã cã xu h−ắng hừnh thộnh liến kạt hydrọ
ChÊt ệỷm cã vai trư quan trảng trong duy trừ mộng sinh chÊt cựa tinh trỉng khi ệềng lỰnh vộ khi giời ệềng, trong kÝch thÝch trao ệữi chÊt diÔn ra bừnh th−êng ẻ tinh trỉng sau giời ệềng, ệăng thêi duy trừ sục sèng cựa chóng. ChÊt ệỷm phời phỉ hĩp nh− lộ mềi tr−êng khi ệềng lỰnh vộ phời cã ệẳc tÝnh sau:
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ... 25 - Khờ nẽng thÊm qua mộng sinh chÊt phời thÊp vộ cã sục ệÒ khịng mỰnh vắi cịc enzymẹ ậỷm ion zwitter cã nhọng tÝnh chÊt trến nến nã tèt hển so vắi ệỷm phosphat hoẳc ệỷm Natri citrat. ậỷm ion zwitter lộ Trihydroxy methylaminomethane (Tris) vộ N-hydroxymethyl-2-aminoethanesulfonic acid (TES) (Bỉi Xuẹn Nguyến vộ CS, 1994) [15].
2.5.3.2. Bờo quờn ẻ 5oC tr−ắc khi ệềng lỰnh
Bờo quờn ẻ 5oC tr−ắc khi ệềng lỰnh sỳ tẽng c−êng sục khịng ệềng cho
tinh trỉng bư. Thềng th−êng tinh bư sau khi khai thịc vộ ệự tiếu chuÈn pha chạ thừ tiạn hộnh xỏ lý găm cịc b−ắc:
- Pha logng lẵn ệẵu tinh dỡch ẻ 35oC.
- Lộm lỰnh dẵn xuèng 5oC vộ bờo quờn tõ 1,5 ệạn 2 giê.
- Pha logng lẵn hai vắi mềi tr−êng cã chụa glycerol. - Cẹn bỪng trong 2 ệạn 3 giê.
- ậềng lỰnh tinh trỉng.
- Bờo quờn tinh trỉng ệg lộm lỰnh ẻ 5oC tr−ắc khi pha logng lẵn hai
ệg nẹng cao ệịng kÓ tũ lỷ sèng cựa tinh trỉng sau khi ệềng lỰnh vộ giời ệềng. Mét cịch khịc (cịch 2) cựa ph−ểng phịp nộy lộ bờo quờn qua ệếm (tõ
20 ệạn 22 giê), tinh trỉng ệg lộm lỰnh ẻ 5OC, tr−ắc khi pha logng lẵn haị Sục
sèng cựa tinh trỉng theo cịch xỏ lý 2 tèt hển so vắi cịch sỏ lý thềng th−êng (cịch 1).
Cịch thụ 3 lộ bờo quờn tinh trỉng qua ệếm khi ệg cẹn bỪng vắi glycerol
trong 20 ệạn 22 giê, ẻ 5OC sau khi pha logng lẵn 2. Cịch hai tèt hển nhiÒu so
vắi cịch thụ 3 vộ ệiÒu nộy thÓ hiỷn sục khịng ệềng cựa tinh trỉng khịc nhau tỉy theo giai ệoỰn nhẺy cờm vắi nhiỷt ệé thÊp (Tsuyoshi, 1992) [44].
2.5.3.3. Năng ệé glycerol vộ thêi gian cẹn bỪng
Năng ệé glycerol trong mềi tr−êng pha logng cuèi cỉng ệÓ lộm ệềng lỰnh tinh trỉng bư vộo khoờng 7%, nh−ng tũ lỷ nộy cưn hểi khịc nhau tuú theo cịc thộnh phẵn cựa mềi tr−êng pha logng. Năng ệé tèi −u cho sục sèng cựa tinh trỉng lộ 11% vắi sọa khỏ bể. Năng ệé glycerol trong mềi tr−êng pha
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ... 26 logng cã mèi t−ểng quan ệịng tin cẺy vắi tèc ệé giời ệềng, ệã lộ năng ệé glycerol cao trong mềi tr−êng pha logng lộ cẵn thiạt cho tèc ệé giời ệềng nhanh (Hiroshi,1992) [34].
Thêi gian tõ lóc bữ sung glycerol vộo mềi tr−êng pha logng (pha logng lẵn hai) ệạn khi bớt ệẵu lộm ệềng lỰnh ệ−ĩc gải lộ thêi gian cẹn bỪng glycerol.
Hừnh 7: ờnh h−ẻng cựa glycerol trong dung dỡch NaCl so vắi năng ệé NaCl trong dung dỡch cưn lỰi khi dung dỡch NaCl (0,15M) ệ−ĩc ệềng
lỰnh (Hiroshi 1992) [34]
2.5.3.4. Tèc ệé lộm lỰnh
Tèc ệé lộm lỰnh quị nhanh sỳ gẹy tữn hỰi ệạn tinh trỉng vừ nã gẹy ra siếu lỰnh, lộm thÓ vÈn vộ n−ắc l−u giọ trong tạ bộọ ậiÒu ệã gẹy ra ệềng lỰnh ngoỰi bộo vộ sau ệã ệềng lỰnh néi bộọ Tèc ệé lộm lỰnh chẺm sỳ gẹy ra tẺp trung năng ệé cho cờ dung dỡch ngoỰi bộo vộ dung dỡch néi bộo vộ sỳ lộm rèi
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ... 27 loỰn tạ bộo, ệẹy ệ−ĩc coi lộ ờnh h−ẻng cựa dung dỡch. Tèc ệé lộm lỰnh tèi −u lộ tèc ệé lộm giờm tèi ệa cờ ệềng lỰnh néi bộo vộ ờnh h−ẻng cựa dung dỡch.
Tèc ệé lộm lỰnh tèi −u nộy khịc nhau khềng chử theo loỰi tạ bộo mộ cưn theo cịc yạu tè nh− cịc thộnh phẵn cựa thÓ vÈn tạ bộo vộ loỰi chÊt chèng ệềng bẽng. ChỬng hỰn dung dỡch ệ−êng saccharide ệ−ĩc ệềng lỰnh nhanh (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
(ệềng lỰnh tõ 2 ệạn 4 phót, 5oC xuèng -79oC) sỳ cho hoỰt lùc tinh trỉng sau
giời ệềng cao hển so vắi ệềng lỰnh chẺm (ệềng lỰnh 45 phót, 5oC xuèng -
79oC), vừ ệg ngẽn cờn ệ−ĩc ờnh h−ẻng cựa dung dỡch. Mềi tr−êng pha logng
cã năng ệé glycerol tõ 5% ệạn 7% ệ−ĩc ệềng lỰnh nhanh (ệềng lỰnh tõ 3 ệạn
5 phót, 5oC xuèng -130oC) cho hoỰt lùc tinh trỉng cao hển so vắi ệềng lỰnh
chẺm (ệềng lỰnh tõ 20 ệạn 40 phót, 5oC xuèng -79oC) (Hiroshi,1992) [34].
2.5.3.5. Tèc ệé giời ệềng
Tèc ệé giời ệềng tinh ệềng lỰnh cã ờnh h−ẻng lắn ệạn sục sèng, hoỰt lùc, tũ lỷ acrosome bừnh th−êng vộ quị trừnh trao ệữi chÊt cựa tinh trỉng.
Giời ệềng tinh cảng rỰ bỪng n−ắc 35oC sục sèng tinh trỉng cao hển so vắi
n−ắc 4oC hoẳc 20oC. Giời ệềng ẻ n−ắc tõ 35oC ệạn 37oC còng cho tũ lỷ
acrosome bừnh th−êng cao hển so vắi n−ắc 4oC hoẳc 20oC. Nh−ng nạu giời
ệềng bỪng n−ắc cã nhiỷt ệé cao hển nọa, chỬng hỰn n−ắc 90oC, sỳ lộm
giờm sục sèng cựa tinh trỉng. Nạu tinh trỉng ệ−ĩc bờo quờn ẻ nhiỷt ệé
37oC sau khi giời ệềng, cảng rỰ nộo ệ−ĩc giời ệềng nhanh ẻ nhiỷt ệé cao hển
sỳ cã sục sèng tinh trỉng cao hển.
2.5.3.6. Thêi gian bờo quờn
Tinh trỉng ệềng lỰnh phời luền luền ệ−ĩc bờo quờn ngẺp chừm trong
nitể láng (-196oC), nạu bờo quờn tèt sau vội chôc nẽm, tũ lỷ sèng vộ sục hoỰt
ệéng cựa tinh trỉng vÉn khềng thay ệữi, khờ nẽng thô tinh vÉn khềng bỡ giờm
(Hộ Vẽn Chiếu, 1996) [8]. ẻ Thôy Sủ tinh bư ệềng lỰnh bờo quờn 20 nẽm vÉn
thô tinh vộ bư mứ ệĨ bế con ngộy 25-7-1975. ẻ NhẺt Bờn tinh cảng rỰ bờo
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ... 28 tinh 54%. Cã nhiÒu tr−êng hĩp tinh ệềng lỰnh bờo quờn 20 nẽm vÉn cã tũ lỷ thô tinh lộ 69,8% (Hiroshi,1992) [34].
Hừnh 8: Biạn ệữi vẺt lý trong tạ bào khi ệềng lỰnh (Mazur,1989) [40]